細胞免疫精選(九篇)

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第1篇：細胞免疫范文

戈謝病(Gaucher''''sdisease)是一種罕見的脂類代謝異常性疾病，臨床資料報道較多，實驗室資料尚少。我們通過對3例戈謝病骨髓中戈謝細胞的免疫表型及吞噬功能研究，發(fā)現(xiàn)戈謝細胞主要表達淋巴細胞抗原，高度表達B淋巴細胞抗原，同時證實戈謝細胞具有吞噬功能。

1材料與

1.1標本來源取自3例戈謝病患者骨髓液，迅速制成薄涂片，同時取骨髓液做吞噬功能試驗。免疫組化于24h后進行。

1.2試劑ABC試劑盒、單抗購于醫(yī)學院血液學研究所。

1.3方法

1.3.1ABC免疫酶法按操作說明書進行。

1.3.2戈謝細胞墨汁吞噬功能測定取肝素抗凝骨髓液100μl，陳群芳方法［1］，37℃孵箱中，孵育2h，涂片，用瑞氏染色觀察。

1.3.3戈謝細胞吞噬細菌功能測定參考臨床免疫學方法［2］，實驗時按墨汁吞噬功能方法操作。

1.3.4戈謝細胞吞噬膠乳顆粒功能測定采用市售膠乳顆粒(3.6×108ml-1)，實驗時按墨汁吞噬功能方法操作。分級標準：“0”：細胞內未吞噬膠乳顆粒?！埃保杭毎麅群?～10個膠乳顆粒?！埃保杭毎麅群?5～30個膠乳顆粒?！埃保杭毎麅群?0～50個膠乳顆粒?！埃保杭毎麅群写笥?0個膠乳顆粒。

2結果

2.13例戈謝細胞免疫組化結果結果判斷標準分別為強陽性：戈謝細胞呈彌漫的棕黃色，胞漿邊緣及條索狀結構著色濃厚。細胞核為藍色，上面覆蓋一層棕黃色。胞核模糊不清。陽性：戈謝細胞著黃色，胞漿邊緣及條索狀結構著色較深，胞核為藍色，清晰。弱陽性：戈謝細胞漿為淡黃色，細胞邊緣及條索狀結構著色稍深。胞核為藍色，清晰。陰性：戈謝細胞漿不著色，核為藍色。3例戈謝細胞免疫表型結果為：CD8、CD9、CD10、CD18、HLA-DR均為強陽性表達；CD3、CD33、CD15均為陽性表達；CD22均為弱陽性表達；CD7、CD14、CD41均為陰性；CD2、CD4、CD19、CD383例中均為1例陽性表達，而且CD38為強陽性表達。

2.23例戈謝細胞的吞噬功能結果吞噬墨汁的吞噬率分別為75%、90%、95%。吞噬指數(shù)分別為105、148、198；吞噬細菌的吞噬率分別為70%、89%、81%，吞噬指數(shù)分別為21.5、27.6、22.5；吞噬膠乳顆粒的吞噬率分別為75%、82%、86%，吞噬指數(shù)分別為90、103、107。

3討論

戈謝細胞是由于葡萄糖腦苷酶缺乏和減少，因而在單核-巨噬細胞系統(tǒng)的細胞內積聚大量葡萄糖苷脂而形成。有關戈謝細胞免疫表型報道甚少，僅陳輝樹報道1例脾臟戈謝細胞免疫組化結果為CD33、HLA-DR、CD45、CD71(Wu67)為陽性，CD3、CD4、CD8、CD22、CD38、CD41為陰性［3］。我們測定的骨髓戈謝細胞CD33、HLA-DR、CD41的結果與其相同，但其它單抗結果則有一定差異，有待進一步觀察。3例戈謝細胞免疫表型說明，戈謝細胞主要表達淋巴細胞抗原，高度表達B細胞抗原，而且細胞陽性程度強。髓系抗原部分表達，但陽性程度較弱。提示戈謝細胞主要起源于B淋巴細胞，但也涉及多細胞系，細胞的陽性程度不一，可能與抗原濃度及對單抗的親和力有關。陳璋認為HLA-DR、CD38、CD18為非系列特異性抗原［4］。報道HLA-DR、CD38、CD33為干細胞或未成熟細胞標志，戈謝細胞HLA-DR、CD38、CD33為陽性，表明戈謝細胞是處于早期的單核細胞。

戈謝細胞是被激活的特殊巨噬細胞，其結構和形態(tài)發(fā)生變異后，是否仍具有吞噬功能?實驗結果證實，戈謝細胞具有吞噬功能，但吞噬率及吞噬指數(shù)明顯下降。Marodi報道，戈謝病患者對嚴重感染有較高的易感性，原因是戈謝病患者的單核巨噬細胞在殺死細菌和產(chǎn)生O-．2超氧化物陰離子的中間環(huán)節(jié)上有缺陷?；颊叩膯魏思毎麣⑺阑畹募毦歪尫臤-．)2能力比對照組的細胞要低得多(P＜0.05)［5］。戈謝細胞吞噬功能降低可導致免疫功能下降，致使戈謝病患者易發(fā)生感染。戈謝細胞具有吞噬功能也說明了戈謝細胞確實來源于單核巨噬細胞系統(tǒng)。

文獻：

［1］陳群芳，王志澄.血液病患者白細胞墨汁吞噬功能試驗.中華血液學雜志，1981；2(2)：121

［2］甘芾，陳璋.臨床免疫檢驗學.天津：天津技術出版社，1990：340

［3］陳輝樹.戈謝氏病脾臟病理形態(tài)及免疫組化特征1例.中華血液學雜志，1992；13(2)：65

第2篇：細胞免疫范文

【關鍵詞】 高原??；紅細胞增多癥

高原紅細胞增多癥（簡稱HAPC）是指在高原地區(qū)常見的危害人體健康的慢性疾病。在低氧的情況下，紅細胞的變形能力隨之下降，是高原紅細胞增多癥的主要病理生理變異的原因之一[1]。經(jīng)研究表明，機體的血漿丙二醛（簡稱MDA）的升高和紅細胞超氧化物歧化酶（簡稱SOD）的降低都參與了高原紅細胞增多癥的發(fā)生與發(fā)展的過程。本文通過對不同海拔的高原紅細胞增多癥患者的紅細胞免疫粘附功能和紅細胞超氧化物歧化酶、血漿丙二醛進行了研究分析，現(xiàn)結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對象皆為在4200m與3500m海拔區(qū)域居住的居民，將其分為HAPC組以及對照組，其中已經(jīng)確診的HAPC患者共84例（不同海拔區(qū)域各半），對照組居民共62例（不同海拔區(qū)域各半）。兩組研究對象的性別、年齡以及職業(yè)等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.1.1 HAPC組 男性患者51例，女性患者33例，最小年齡為24歲，最大年齡為50歲，平均年齡為（37.81±4.27）歲。多數(shù)患者并發(fā)不同程度的紫紺、頭暈或者頭痛等多血癥癥狀。

1.1.2 對照組 已排除了患有腎、肝、肺、心或者各種高原病，以及其他疾病的健康人群。其中男性35例，女性27例，最小年齡為21歲，最大年齡為55歲，平均年齡為（41.57±5.29）歲。

1.2 方法

1.2.1 測定紅細胞免疫功能 根據(jù)參考文獻[1]中的測定方法對紅細胞免疫復合物花環(huán)率（RBCICFR）以及紅細胞C3b受體花環(huán)率（RBCC3bRFR）進行測定。

1.2.2 紅細胞濾過指數(shù)（EFI） 根據(jù)參考文獻[1]中的測定方法采用膜濾器與核孔聚脂膜，其中膜厚10μm，孔密度為4×105孔/cm2，膜直徑為4.6-5.0μm。紅細胞的變形能力是隨著EFI的變高而變差的。

1.2.3 氧自由基代謝指標 本次研究使用TBA法用來測定血漿MDA，使用鄰苯三酚自氧化法進行測定紅細胞SOD。

1.3 統(tǒng)計學分析 本次實驗數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件進行統(tǒng)計學分析，其中計量資料采用均數(shù)±標準差（χ±s）表示，計量數(shù)據(jù)對比采用t檢驗，計數(shù)資料對比采用卡方檢驗，以P

2 結 果

2.1 比較在不同海拔時高原紅細胞增多癥與健康人紅細胞的各項指標的變化 見表1。

3 討 論

經(jīng)研究表明，患有高原紅細胞增多癥的患者的紅細胞濾過指數(shù)，血漿丙二醛的水平與紅細胞免疫復合物花環(huán)率有顯著的增加，但是紅細胞的C3b受體花環(huán)率與紅細胞超氧化物歧化酶卻有顯著的下降，隨著海拔的上升，各項指標也發(fā)生明顯的變化。高原紅細胞增多癥患者的一條脂質過氧化的反應增加，紅細胞的變形能力與免疫功能則下降，海拔越高，患有高原紅細胞增多癥的患者體內脂質過氧化的作用越強，紅細胞的免疫功能越變形能力越低。

氧自由基代謝的海拔性變化是導致高原紅細胞增多癥患者的紅細胞變化的主要因素之一，并且隨著海拔的上升，紅細胞的變形能力越差，會引起嚴重的微循環(huán)阻礙，因為應對患者使用抗自由基損傷的藥物，降低患者的機體血漿丙二醛，提高患者機體的御酶紅細胞超氧化物歧化酶，減少脂質過氧化反應，用來提高和改善患者紅細胞的變形能力，降低血液的粘度，促進微循環(huán)，可以有效的治療高原紅細胞增多癥。

第3篇：細胞免疫范文

【摘要】目的 探討淋巴細胞免疫治療反復自然流產(chǎn)的臨床療效。方法 隨機選擇2008年7月~2012年8月在我院就診的封閉抗體為陰性的反復自然流產(chǎn)患者86例，對患者采用淋巴細胞皮內注射的方式進行治療。結果 86例封閉抗體陰性的患者中治療后共73例成功妊娠，成功率達84.88%，足月妊娠分娩60例，早產(chǎn)2例，5例再次流產(chǎn)，占5.81%，所有患者在后期隨訪中情況良好。結論針對封閉抗體缺乏的反復自然流產(chǎn)患者采用淋巴細胞免疫治療能夠提高妊娠成功率。

【關鍵詞】淋巴細胞免疫治療 反復自然流產(chǎn) 封閉抗體陰性

【Abstract】Objective

To Analyze clinical curative effect of lymphocyte immunity treatment repeatedly natural abortion. Methods

We choose 86 patients with recurrent spontaneous abortion between July 2008 and August 2012 in our hospital. they are treated by intradermal injection of lymphocytes. Results

73 cases of 86 cases blocking antibody in patients with negative total are pregnant successful after treatment with an 84.88% success rate； term pregnancy in 60 cases； less than 2； 5 cases of abortion （5.81%）. The patient as well as the good newborn situation in the later period revisit， does not have other side effect appearance. ConclusionAiming at the lack of blocking antibody in patients with recurrent spontaneous abortion， lymphocyte immunity treatment can improve the success rate of pregnancy.

【Key words】 Lymphocyte immunity treatment， Recurrent spontaneous abortion， Blocking antibody negative

【Author′s address】Guangdong No.2 Provincial People’s Hospital， Guangzhou， Gungdong， 510317， China

doi：10.3969/j.issn.1671-332X.2014.12.025

反復自然流產(chǎn)（Recurrent Spontaneous Abortion，RSA）指的是連續(xù)兩次懷孕在同一妊娠周期發(fā)生自然流產(chǎn)的現(xiàn)象，屬不育癥范疇，這類患者往往經(jīng)歷多次的妊娠和多次流產(chǎn)，給患者本人及其家庭身心帶來極大痛苦。該病成因較為復雜，隨著免疫學在生殖醫(yī)學領域滲透進程的推進，相關研究［1］表明RSA與患者的封閉抗體（Blocking Antibody，BA）水平有關，并產(chǎn)生了利用患者丈夫或無關個體的淋巴細胞進行主動免疫，來抑制母體與胚胎之間免疫排斥反應的治療方法，以降低流產(chǎn)率，使妊娠得以成功，這種治療方法即淋巴細胞免疫療法（Lymphocyte Immunity Treatment，LIT）。為探討淋巴細胞免疫療法的療效，自2008年7月~2012年8月，我院對86例RSA患者予以LIT治療，臨床效果滿意，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2008年7月~2012年8月到本院就診的RSA患者，排除因形態(tài)學、內分泌、染色體或自身抗體異常等因素所致流產(chǎn)者，BA陰性患者合計86例，平均年齡（34.2±4.3）歲。

1.2方法

1.2.1篩查方法與標準全部RSA患者需符合下列條件：①自然流產(chǎn)史2次以上（包括2次），無活產(chǎn)史；②排除生殖道畸形和形態(tài)學異常；③抗抗體（ASAb），抗子宮內膜抗體（EmAb），抗心磷脂抗體（AcpAb）均為陰性；④內分泌檢查催乳素（PRL）、卵泡刺激素（FSH）、促黃體生成激素（LH）、雌二醇（E2）、血清三碘甲狀腺原氨酸（T3）、甲狀腺素（T4）、血清促甲狀腺素（TSH）及空腹血糖（GLU）等正常；⑤BA陰性；⑥雙方染色體檢查結果正常，無家族遺傳性疾病史；⑦對夫婦雙方進行TORCH（包括弓形蟲、風疹病毒、巨細胞病毒和單純皰疹病毒四項）、支原體、衣原體等檢測顯示陰性；⑧男方分析結果正常；⑨接受治療前3個月患者未使用免疫調節(jié)藥物，且未接受任何免疫治療。

1.2.2治療方法對患者丈夫進行乙、丙型肝炎、梅毒及艾滋病毒檢測，結果顯示正常后，無菌條件下抽取男方靜脈血20 ml，抗凝，以生理鹽水按1∶1比例稀釋后，混勻，分別緩慢注入4個裝有淋巴細胞分離液4 ml的無菌試管內，使兩者形成分明界面，后以2 000 r/min速度離心（5～10）min，得到淋巴細胞層。以適量無菌生理鹽水洗滌收集到的淋巴細胞2次，吸取底層的沉淀物制備懸液，使淋巴細胞數(shù)約為（2～4）×107ml，靜置待用。對患者進行治療時，在其前臂內側分點（以4～6個點為宜）皮下注射淋巴細胞，2周后再注射1次，4次為1個療程。接受LIT治療1個療程后，囑患者在12周內妊娠，若此段時間內未獲得妊娠，應再次接受1個療程的LIT治療。妊娠后每2周接受1次治療，至孕12周后停用。符合妊娠≥28周，B超提示宮內活胎，胎兒、胎盤、羊水均未見異?；蛞逊置湔；顙胝邽槿焉锍晒?。

1.2.3注意事項①操作前評估患者手臂注射部位的皮膚顏色、有無皮疹、硬結、疤痕、感染等，并取得患者的配合；②嚴格無菌操作，以防止局部感染，且每次治療需改變注射部位；③告知患者接受治療后24～72 h若出現(xiàn)瘙癢或灼痛感屬正常情況，囑患者勿按壓針眼、勿搓揉或抓搔局部皮膚；④密切觀察患者局部皮膚以及全身反應30 min，無任何不良反應方可離開，并囑其定期進行淋巴細胞免疫治療。

1.2.4統(tǒng)計學方法所有資料均采用?2檢驗。

2結果

86例患者接受LIT后，再次妊娠者（包括妊娠成功及再次流產(chǎn)）共78例，73例成功妊娠，成功率達84.88%。其中足月妊娠分娩60例，早產(chǎn)2例，處于妊娠期且孕≥28周11例。5例于妊娠早期發(fā)生自然流產(chǎn)，8例治療后未妊娠。62例新生兒出生體重2 500～3 570 g，除2例早產(chǎn)兒有黃疸外，62例新生兒各系統(tǒng)發(fā)育均正常。

本研究中，接受LIT治療的患者注射部位均有不同程度的紅腫、瘙癢或灼痛感，但程度都隨著免疫次數(shù)的增加而減輕；2例患者初次接受治療后出現(xiàn)全身風團狀蕁麻疹癥狀，予以氯雷他定口服后癥狀消失。

3討論

3.1免疫、封閉抗體與妊娠三者間的關系

妊娠本質上相當于同種異體移植，其成功與否則取決于移植的供受兩者之間的主要組織相容性抗原（Human Leukocyte Antigen，HLA）。胎兒HLA的遺傳有一半來自父親，胎兒所攜帶的父系抗原刺激母體免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生免疫應答，因此胎兒與母體間存在著復雜而特殊的免疫平衡關系。FAULK的TLX學說［2］認為，胎兒逃脫母體免疫排斥的機制主要與放大T細胞（Amplifier T Cells，TA）有關。TA在受到相關抗原刺激后，分泌非特異性因子，或者在巨噬細胞的介導作用下，使B細胞產(chǎn)生免疫應答，產(chǎn)生特異性抗體，具有放大免疫效果的作用。它又細分為TA1和TA2，即（TLX），TA1有誘發(fā)細胞毒性淋巴細胞反應的作用，能阻礙胚胎在子宮著床，并抑制滋養(yǎng)細胞的生長，TA2則有誘導產(chǎn)生BA（即抗TLX抗體），并進行免疫營養(yǎng)的作用。BA作為抗TLX的抗體，能使胚胎避開母體免疫系統(tǒng)的攻擊而使妊娠得以維持，正常孕婦體內BA為陽性，且在妊娠早期（妊娠12周末以前）水平最高，中期（妊娠13～27周末）逐漸下降，到晚期（妊娠28周以后）又增高，如果BA為陰性，就容易發(fā)生免疫排斥而導致流產(chǎn)。本研究中的86例RSA患者，封閉抗體均為陰性，且除外生殖道畸形和形態(tài)學異常、染色體異常、內分泌失調、感染性疾病所至流產(chǎn)者，未經(jīng)任何免疫治療前，自然流產(chǎn)史在2次（包括2次）以上，且無活產(chǎn)史，一定程度上也驗證了以上觀點。

3.2配偶淋巴細胞免疫治療的效果與預后

基于以上機理，TAYLOR等［3］于1981年建立了RSA患者的免疫療法，采用配偶淋巴細胞等對母體進行免疫治療，利用淋巴細胞具有的免疫功能對母體中相同種類免疫反應起刺激作用，使得母體內的BA增加，以避免母體免疫系統(tǒng)對胎兒或其中的父系抗原識別和排斥，從而使得患者再次妊娠。既往研究表明，免疫療法可以有效地阻止一部分患者的反復流產(chǎn)，但是目前關于淋巴細胞主動免疫治療RSA的作用機制尚未完全清楚。本研究對我院收治的86例RSA患者采取配偶體內的淋巴細胞對其進行免疫治療，以增加母體內BA，療效良好，78例患者獲得良好妊娠，妊娠成功率達84.88%，其中60例足月分娩，2例早產(chǎn)，處于妊娠期且孕≥28周11例，再次流產(chǎn)5例，在后期的隨訪中所有患者情況良好。而對于5例于妊娠早期再次發(fā)生自然流產(chǎn)的患者，推測與其孕后治療不及時和治療次數(shù)不足有關，所以孕后加強治療非常重要，必須教育患者在孕后盡早接受治療。同時，在LIT治療過程中，患者注射部位皮膚反應的輕重程度變化可以作為判斷免疫療法效果的參考指標之一，一般來說，若患者初次注射后局部皮膚反應較重，但往后幾次治療后注射部位皮膚反應逐漸減輕的，預示療效良好。

免疫治療的主要副作用是它可能促進母體對胎兒的免疫反應，發(fā)生胎兒宮內發(fā)育遲緩的概率增高，且有輸入病毒造成感染，惡化母體潛在的自身免疫疾病的危險［4］。上述情況在高齡孕婦當中發(fā)生率較高，猜測其原因主要是高齡孕婦體質較差，母體受孕壞境不良，易受感染。因此，在對患者進行注射前必須全面、精準地檢測待用的淋巴細胞，確保男方的淋巴細胞無任何問題后方可使用。在本研究中，我院在對RSA患者進行LIT治療前，血液檢測時仔細篩查所有可經(jīng)血液傳播的疾病，未發(fā)生任何醫(yī)源性感染事件，除外2例患者發(fā)生全身風團狀蕁麻疹，無其他副作用出現(xiàn)。86例患者在接受淋巴細胞免疫治療過程中，男方體檢結果示身體各項機能正常，73例經(jīng)LIT治療后妊娠成功的患者中，未見病毒感染或胎兒發(fā)育遲緩等不良現(xiàn)象發(fā)生，足月妊娠分娩60例，不足月2例，62例新生兒除2例有黃疸外，各系統(tǒng)發(fā)育均正常，證實配偶淋巴細胞主動免疫療法安全有效，預后良好。

總之，對RSA患者采取其配偶體內的淋巴細胞進行免疫治療，方法簡便易行，妊娠成功率較高，交叉感染的危險性較低，預后良好，是治療RSA安全有效的方法，值得在臨床實踐中推廣和使用。而對于妊娠失敗的病例，可能有較多的原因影響，需要進一步探討。

參考文獻

［1］KUJOVICH J，MERRILL PA.Antiphospholipid antibodies and antithrombin deficiency：double trouble for pregnancy［J］.Am J Hematol，2011，86（12）：1028-1031.

［2］SHANKARKUMAR U，PRADHAN VD， PATWARDHAN MM，et al.Autoantibody profile and other immunological parameters in recurrent spontaneous abortion patients［J］.Niger Med J，2011，52（3）：163-166.

第4篇：細胞免疫范文

[關鍵詞]口腔扁平苔蘚；細胞免疫

[中圖分類號]R781 [文獻標識碼]B[文章編號]1673-7210（2007）07（c）-116-02

口腔扁平苔蘚（oral lichen planus，OLP）是一種常見的慢性口腔黏膜炎癥性疾病，具有癌變潛能。其病因和發(fā)病機制目前仍不明確，損害可同時或分別發(fā)生在皮膚和黏膜，患病率為2%[1]，臨床上病程遷延、各種治療方法效果不佳。OLP的組織病理學表現(xiàn)為基底上皮細胞變性和破壞，基底膜增厚或斷裂，并且有淋巴細胞浸潤。有研究報道，OLP的發(fā)病與病毒感染、焦慮和疲勞、內分泌紊亂及機體免疫功能狀態(tài)有關[2]，患者的免疫機能存在不同程度的異常。本實驗觀察30例OLP患者外周血T 細胞亞群和NK 細胞百分比、紅細胞C3b 受體花環(huán)（RBC-C3bRR）和免疫復合物花環(huán)（RBC-ICR）百分率及血清中細胞因子的分泌水平等幾種細胞免疫功能指標的變化，旨在探討OLP 患者發(fā)病的免疫機理，為臨床治療提供實驗依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

以2004年11月~2006年4月共30例在我科臨床診斷和病理確診的OLP 患者為研究對象，形成實驗組。納入標準：病損無糜爛，無局部刺激因素，無其它口腔黏膜病，無皮膚損害，無系統(tǒng)性疾??；近2月內未接受過全身性免疫治療，近2 周內未接受抗生素及局部免疫治療。實驗組中男12例，女18例，年齡26～57歲，平均年齡35歲，病程在3～5年以上。同期采集30 例正常體檢者靜脈血作為對照組，男12 例，女18例，年齡20～60歲，平均年齡38歲。

1.2 試劑和儀器

免疫熒光抗體：CD4-FITC/CD8- PE/CD3-Cy5，CD56-FITC，陰性對照（羊抗鼠） IgG1-FITC/IgG1-PE/CD45-PE-Cy5，F(xiàn)ACS溶血素（BD公司）；人IL-10、IL-12 ELISA kit （Endogen公司），酶標檢測儀（Bio-Red 450），流式細胞儀（FACS calibur，BD公司），EDS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（PE公司）。

1.3 方法

1.3.1 T細胞亞群檢測取肝素抗凝血100 μl， 加入相應的熒光標記抗體20 μl，混合，放置4°C、避光處30 min，加入溶血素2 ml 混勻，10 min 后離心，PBS洗滌2次，棄上清，加入300 μl PBS將細胞懸浮，上機檢測。

1.3.2 細胞因子的檢測采用雙夾心ELISA法，按人IL-10、IL-12檢測試劑盒說明書，在酶標儀上讀取不同濃度的標準品相應的吸光度值（A450值），繪制標準曲線，并進行直線相關回歸分析。取待測血清100 μl，按試劑盒說明分別檢測IL-10、IL-12的水平，將測得的不同待測標本的A450值代入相應的直線回歸方程中，即將得到相應的細胞因子的含量。

1.3.3RBC-C3bRR和RBC-ICR的檢測按試劑盒說明書操作，油鏡觀察，一個紅細胞上結合兩個以上酵母菌者為一個陽性花環(huán)細胞，計數(shù)200個紅細胞，計算出RBC-C3bRR和RBC-ICR的百分率（%）。

1.4 統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)以x±s表示，用t檢驗分析組間的顯著性。

2 結果

2.1 外周血T細胞亞群和NK細胞檢測結果

OLP患者外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和CD56+細胞分別為（52.19±5.57）%、（25.57±5.07）%、1.02±0.51和（3.69±1.31）%，均明顯低于對照組（63.01±8.19）%、（36.19±5.07）%、1.46±0.90和（5.79±1.29）%，兩組之間的差別均具有非常顯著性差異(P0.05)，表1。

2.2 血清中細胞因子檢測結果

OLP 組血清中IL-12產(chǎn)生水平低于對照組，兩組之間的差異具有顯著性意義(P

2.3 OLP患者的RBC-C3bRR和RBC-ICR檢測結果

OLP患者的RBC-C3bRR明顯低于對照組，RBC-ICR明顯高于對照組，經(jīng)統(tǒng)計學檢驗兩組之間的差異具有顯著性意義（P

3 討論

口腔扁平苔癬的發(fā)病原因和發(fā)病機理尚不十分清楚，但大多認為OLP 與免疫功能障礙有關。有學者指出，在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中存在由T細胞介導的免疫應答。T細胞對特異抗原的識別主要是通過T細胞受體發(fā)揮作用[3]?？谇槐馄教Π_損害組織中T細胞受體TCR Vβ鏈基因存在優(yōu)勢取用。采用特異性單克隆抗體的免疫組織化學方法，觀察到正常人外周血T細胞TCR Vβ的表達水平為0%～7%，而OLP患者損害區(qū)T細胞TCR的表達水平為18%～40%，明顯高于外周血T細胞[4]。Kawamura等采用PCR半定量分析，并將損害T細胞于外周血細胞的結果進行比較，結果顯示，損害T細胞的優(yōu)勢Vβ在各個病例中各不相同，但Vβ2、Vβ6在超過一半的病人中是占優(yōu)勢的[5]，表明OLP損害T細胞通常優(yōu)勢表達Vβ2、Vβ6。Kawamura等的研究還指出，在OLP發(fā)病機制中超抗原和普通抗原都起作用，但要確定OLP 的致病性抗原是很困難的，因為內部和外部的抗原太多。到目前為止，已有一些外源性抗原和內源性抗原引起注意，如金黃色葡萄球菌和鏈球菌毒素等；在自身抗原方面，熱休克蛋白[6]、與人同源的鼠Mls抗原等都與口腔上皮細胞有關，被認為是OLP 的致病性抗原[5]。

細胞因子及其平衡在機體免疫應答過程中起重要作用，IL-10和IL-12是調節(jié)細胞因子網(wǎng)絡平衡的重要因子，IL-10是由Th2細胞亞群分泌，能促進體液免疫，抑制細胞免疫[7]；IL-12由是巨噬細胞和DC等非T細胞分泌，促進CD4+T 細胞分化成Th1細胞，后者釋放IL-2、IFN-γ等，促進細胞免疫[8]。NK細胞是抗病毒感染免疫的重要效應細胞。NK細胞殺傷靶細胞不受MHCI類分子限制，能夠殺傷受病毒感染后MHCI類分子表達異常、逃逸CTL攻擊的靶細胞。本研究發(fā)現(xiàn)OLP患者外周血中總的T淋巴細胞比例及TH比例、NK細胞百分比、血清中IL-12的水平均明顯低于正常體檢對照組（P

紅細胞免疫功能是通過紅細胞表面的CR1和CR3，將致病菌、病毒及免疫復合物攜帶至肝、脾加以消毀；通過CD58，CD59，CR1，CR3與淋巴細胞、吞噬細胞上的CD2，CR1，CR2，CR3相互作用，參與免疫調控；通過釋放NK細胞激活因子增加NK細胞活性。本研究證實OLP患者的RBC-C3bRR明顯低于對照組，RBC-ICR明顯高于對照組，兩組之間的差別均具有非常顯著性的意義（P

由于CD4+的T輔助細胞和NK細胞的數(shù)量減少，T細胞分泌的細胞因子的功能和紅細胞免疫功能降低所造成的細胞免疫功能低下是OLP發(fā)病的主要免疫機制。在臨床治療中， 應采用調節(jié)機體免疫功能的方法，將更有利于減少OLP復發(fā)。

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第5篇：細胞免疫范文

［摘要］ 目的 探討低氧血癥對老年肝硬化患者紅細胞免疫功能的影響。方法 采用紅細胞酵母菌混合花環(huán)法檢測了68例肝硬化患者（其中≥60歲組24例，

［關鍵詞］ 肝硬化；低氧血癥；紅細胞免疫功能；老年人

Relationship between hypoxaemia and red cell immune function in elderly patients with liver cirrhosis

［Abstract］ Objective To evaluate the relationship between hypoxaemia and red cell immune function in elderly patients with liver cirrhosis.Methods Of the 68 patients with liver cirrhosis，24 cases of elderly patients (≥60 years)，and 44 cases of non elderly patients (

［Key words］ cirrhosis;hypoxaemia;red cell immune function;elderly

免疫是人體的一種生物學功能，它的任務是特異地或非特異性地識別和排斥、清除一切異物或抗原性物質。紅細胞具有吸附、運輸免疫復合物、遞呈抗原和促進吞噬等多種免疫功能，紅細胞C3b受體是其發(fā)揮作用的關鍵部位。RBCC3bRR能較敏感地反映紅細胞免疫黏附能力［1］。肝硬化患者紅細胞免疫功能受損的觀點已被反復證實［2］。本文旨在分析動脈低氧血癥時對老年肝硬化患者紅細胞免疫功能的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇失代償期肝炎后肝硬化患者68例，男50例，女18例，年齡18～75歲。其中≥60歲24例（35.3%），男21例，女3例；合并大量腹水和（或）胸腔積液4例，上消化道出血3例，慢性肝性腦?。╤epatic encephalopathy，HE)11例，合并感染13例：其中合并膽囊炎癥4例，呼吸道感染4例，原發(fā)性腹膜炎3例，尿路感染2例。＜60歲44例（64.7%）；男37例，女7例；合并大量腹水和（或）胸腔積液7例，上消化道出血5例，原發(fā)性肝癌2例，肝腎綜合征1例，HE 9例，合并感染11例：其中合并膽囊炎癥4例，呼吸道感染3例，原發(fā)性腹膜炎4例。健康人20例，男12例，女8例，年齡18～66歲，均為門診體檢正常者，無心、肝、腎等重要臟器疾患，肝腎功能試驗正常。

1.2 測定方法及試劑 全部受檢者均空腹取靜脈血進行紅細胞C3b受體花環(huán)率（RBCC3bb）及免疫復合物花環(huán)率（RBCICR）的檢測，采用郭峰法［3］，即在高倍顯微鏡下計數(shù)200個紅細胞，以結有2個以上酵母菌體于紅細胞上為一個花環(huán)，然后換算成百分率（%），表示紅細胞C3b受體相對活性及紅細胞免疫復合物水平。動脈血氣標本均取自股動脈血，用丹麥產(chǎn)ABL3型血氣酸堿分析儀測定。

1.3 統(tǒng)計學方法 結果以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用配對t檢驗。率的比較采用卡方檢驗。

2 結果

2.1 紅細胞免疫功能 20例健康體檢者RBCC3bb為（12.11±2.03），RBCICR為（5.14±1.84）。68例患者RBCC3bb為（10.02±2.08），RBCICR（7.88±1.79）。兩組比較，差異均有非常顯著性（P均＜0.01)。

2.2 低氧血癥對老年肝硬化患者紅細胞免疫功能的影響 68例中發(fā)生動脈低氧血癥45例（66.2%），其中≥60歲17例（17/24，70.8%），＜60歲28例（28/44，63.6%），兩組低氧血癥發(fā)生率差異無顯著性（P＞0.05）。低氧血癥時老年肝硬化患者紅細胞免疫功能的變化，見表1。在老年組RBCC3bb下降明顯，而RBCICR無明顯變化。

注：兩組相比較，*P0.05

2.3 老年肝硬化患者HE與發(fā)生感染的關系 68例中并發(fā)HE者22例；其中≥60歲13例（13/24，54.2%）；＜60歲9例（9/44，20.5%）；兩組HE發(fā)生率差異有顯著性（P＜0.05)?！?0歲組感染發(fā)生率為58.3%（14/24）；＜60歲組感染發(fā)生率為22.7%（10/44）；兩組感染發(fā)生率差異有顯著性（P＜0.05)。老年組較非老年組更易發(fā)生HE，也更易合并感染。

2.4 老年肝硬化患者并發(fā)HE時低氧血癥與紅細胞免疫功能的關系 老年肝硬化患者并發(fā)HE時低氧血癥與紅細胞免疫功能的關系，見表2。并發(fā)HE組與無HE組相比，低氧血癥更為明顯；但僅RBCC3bRR降低明顯（P＜0.05)，而RBCICR差異無顯著性（P＞0.05）。在并發(fā)HE時，老年組較非老年組低氧血癥更明顯（P＜0.05)，此時亦表現(xiàn)為僅RBCC3bRR降低明顯（P＜0.05)，而RBCICR差異無顯著性（P＞0.05）。

注：與無HE組相比較，*P0.05；與老年組相比較，**P0.05

3 討論

本組資料顯示，肝炎后肝硬化患者紅細胞免疫功能明顯受損，表現(xiàn)為RBCC3bRR明顯降低，RBCICR明顯升高；表明肝硬化病人紅細胞免疫功能繼發(fā)性缺陷。此種免疫缺陷代表患者紅細胞仍有清除免疫復合物的能力，只是循環(huán)免疫復合物增多，經(jīng)有效治療后紅細胞免疫功能可恢復。但在合并低氧血癥時，老年肝硬化組與非老年組相比，低氧血癥發(fā)生率差異無顯著性，但低氧血癥使老年人組的RBCC3bb下降更明顯，而RBCICR則差異無顯著性，說明老年肝硬化患者同時存在著原發(fā)性免疫功能低下。在機體缺氧時，老年肝硬化患者紅細胞代謝受抑更明顯，更易致C3b受體數(shù)目減少或活性降低。在并發(fā)HE時老年肝硬化組隨低氧血癥的進一步加重，RBCC3bb進一步下降，但在同樣的低氧血癥條件下，RBCICR則無明顯變化。RBCC3bb可以反映肝功能損害程度，在肝功能嚴重損害時，導致紅細胞受體不可逆破壞。

本組資料還觀察到，老年組較非老年組肝硬化患者更易發(fā)生HE，也更易合并感染。筆者曾研究肝硬化患者的免疫功能，觀察到肝硬化患者同時存在著紅細胞免疫及體液免疫功能障礙，IgG升高，IgA下降，在合并感染時，RBCC3bb下降較無感染組更為明顯，而RBCICR差異則無顯著性，說明感染可使紅細胞老化或受體受損，或紅細胞過氧化損傷，以致發(fā)生了原發(fā)性紅細胞功能受損［4］。

肝硬化患者易于發(fā)生感染的最主要因素是肝功能不全及與之相關的免疫功能缺陷［5］。肝硬化患者往往有門脈高壓、脾腫大、脾功能亢進，引起明顯體液免疫功能障礙及白細胞下降，庫普弗細胞吞噬細菌能力明顯下降，加上門靜脈分流，為感染的形成創(chuàng)造了有利條件［6］。

肝硬化患者由于肝炎病毒及細菌被吞噬細胞吞噬或形成復合物引起免疫反應，激活BLC，分泌大量免疫球蛋白，又與自身IgG結合形成CIC沉積在組織及紅細胞膜上。紅細胞免疫是機體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，而紅細胞主要通過膜上C3b受體黏附免疫復合物，攜至肝、脾，由吞噬細胞吞噬。因此紅細胞C3b受體活性的強弱直接影響機體中免疫復合物被清除的程度。紅細胞在清除循環(huán)系統(tǒng)液相中抗原-抗體-補體復合物方面起重要作用。同時紅細胞在抵抗外來微生物感染、促進吞噬細胞活性、增強T淋巴細胞和B淋巴細胞的免疫活性已明確，再加紅細胞數(shù)量甚大，超過白細胞總數(shù)的百倍，因此紅細胞在機體抗感染免疫中起著重要作用。故紅細胞免疫功能低下是導致肝硬化患者易發(fā)生感染的重要因素之一。

1981年Siegel等［7］提出了紅細胞免疫的概念，他指出由于在紅細胞膜上有C3b 受體，并且紅細胞內有SOD、GSH-Px等抗氧化酶，因此能夠黏附、攜帶、清除抗原抗體復合物、清除自由基等。有學者提出肝病患者的紅細胞由于它的結構和代謝異常將對自由基的損害更加敏感［8］。肝硬化病人紅細胞的抗氧化系統(tǒng)受損，紅細胞膜的脂質過氧化作用增強，降低了紅細胞的自身保護性，提高了紅細胞對氧自由基損害的敏感性，導致紅細胞免疫功能缺陷的傾向。

臨床上，肝硬化患者常常久治不愈且易并發(fā)感染及其他各種并發(fā)癥，究其原因可能與機體免疫力下降有關。因此，糾正肝硬化患者的低氧血癥及免疫功能障礙應作為其綜合性治療的一個方面。應用抗氧化劑及氧自由基清除劑可望打斷自由基引起的惡性循環(huán)，糾正自由基與抗氧化系統(tǒng)的失衡，提高機體紅細胞免疫功能，維持肝硬化肝損傷時紅細胞的免疫調控能力，對改善疾病狀態(tài)，對疾病的治療及預后可能會有積極的意義。

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第6篇：細胞免疫范文

[關鍵詞] 間充質干細胞；羊藿苷；免疫調控

[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2013）10（c）-0004-04

間充質干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）來源于中胚層，具有向成骨、軟骨和脂肪細胞多向分化的潛能，另外還具有多種因子的分泌功能和表達多種胞外基質的特性。已知MSCs能夠分泌干細胞生長因子、肝細胞生長因子、血管內皮細胞生長因子、巨噬細胞集落刺激因子和基質細胞衍生因子等多種細胞因子，在組織修復中發(fā)揮重要作用[1]。因此，MSCs除可用于組織修復外，還可用于多種疾病的免疫抑制治療，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、類風濕性關節(jié)炎和移植后繼發(fā)的移植物抗宿主病（GVHD）[2-4]。

羊藿（Icariin，ICA）具有強筋健骨、補腎壯陽之功效，是中醫(yī)治療骨質疏松方劑中使用頻率最高的中草藥之一[5]。ICA的主要化學成分是黃酮類化合物，尤以羊藿苷的含量最高[6]。近年來，隨著中藥ICA藥理學的研究，其在臨床上的用途也越來越廣泛。有文獻證明ICA可促進骨髓MSCs的成骨性分化[7]，但ICA是否會影響MSCs的免疫調控能力尚未見報道。本實驗將采用混合淋巴細胞培養(yǎng)和分子生物學方法，以研究ICA對MSCs的免疫調控能力的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

成人骨髓來自山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院（以下簡稱“我院”）骨科外傷術中少量取樣（1 mL，患者知情同意，共12人份），所有實驗均經(jīng)我院倫理委員會同意，羊藿苷標準品購自上海晨易生物科技有限公司。α-MEM培養(yǎng)基和RPMI 1640培養(yǎng)基購自Hyclone公司，胎牛血清（fetal bovin serum，F(xiàn)BS）購自GIBCO公司，表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）、堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）和血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）購自R&D公司，L-植物凝集素（phytohemagglutinin，L-PHA）購自Sigma公司，熒光標記鼠抗人CD34、CD44、CD45、CD71、CD90和CD105抗體及其同型對照購自英國SEROTEC公司；CCK-8檢測試劑盒購自濟南遠達晶美生物科技有限公司，Trizol試劑購自Invitrogen公司，反轉錄試劑盒、實時定量PCR試劑盒購自天根生化科技有限公司；細胞觀察使用Olympus公司IX71倒置顯微鏡，吸光值測定使用伯樂公司的Model 450酶標儀，PCR使用美國ABI公司的7500型定量PCR儀。

1.2 方法

1.2.1 骨髓MSCs的分離和培養(yǎng) 骨髓MSCs的培養(yǎng)：人骨髓（含肝素鈉500 U/mL）1 mL加入4 mL無菌超純水裂解30 s，迅速加入4 mL 1.8%氯化鈉溶液恢復等滲，1200 r/min離心10 min，取細胞沉淀重懸于磷酸鹽緩沖液（PBS）中計數(shù)細胞，調整細胞數(shù)為1.0×107/mL，以每孔2 mL接種于6孔板 （Nunc公司）。MSCs培養(yǎng)基為α-MEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，EGF、bFGF和VEGF各2 ng/mL）。在37℃、5%CO2和飽和濕度的條件下培養(yǎng)，此后每3天換液1次，待細胞鋪滿80%以上皿底時，0.25%胰蛋白酶-PBS溶液消化以1∶3傳代，取第4～6代細胞進行后續(xù)實驗，每日常規(guī)觀察并照相。

1.2.2 流式細胞儀檢測表型 取第5代穩(wěn)定增殖細胞，使用0.25% 胰蛋白酶消化收集，取106個細胞懸浮在100 μL含1%牛血清白蛋白的PBS中，分別加入下列鼠抗人單克隆抗體：FITC-CD34，F(xiàn)ITC-CD45，PE-CD44，PE-CD90，PE-CD71和PE-CD105，在4℃標記20 min，PBS洗1次，使用Merck Milipore 公司的guava easyCyte 6HT-2L型流式細胞儀檢測分析。

1.2.3 MSCs淋巴細胞混合培養(yǎng)檢測羊藿苷對MSCs的影響 取健康成人的外周血（已知情同意），密度梯度離心法制備淋巴細胞并以6×105/mL的密度接種于96孔板中，淋巴細胞培養(yǎng)基為RPMI 1640培養(yǎng)基（含10%胎牛血清），加入終濃度10 μg/mL 的L-植物血凝素（L-PHA）以刺激淋巴細胞增殖，培養(yǎng)5 d。每日取1組加入CCK-8，培養(yǎng)箱內孵育2 h，酶標儀檢測450 nm處吸光值。在MSCs與淋巴細胞混合試驗中，將未處理的MSCs作為對照組，羊藿苷處理的MSCs作為羊藿苷組，將此2組細胞分別以3×104/mL的密度接種于96孔板中，細胞貼壁后進行3 d培養(yǎng)基適應性訓練，每天更換培養(yǎng)基1次，次序為MSCs培養(yǎng)基培養(yǎng)1 d；淋巴細胞培養(yǎng)基∶MSCs培養(yǎng)基為 1∶1混合液培養(yǎng)1 d，淋巴細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)1 d。訓練完成后在培養(yǎng)基中加入羊藿苷使終濃度為2 mg/L，刺激24 h后進行后續(xù)實驗。按MSCs∶淋巴細胞=1∶20的比例調整淋巴細胞的密度，建立共培養(yǎng)體系，分別于共培養(yǎng)第3、4、5天加入CCK-8，培養(yǎng)箱內孵育2 h，酶標儀檢測450 nm處吸光值。實驗重復3次。

1.2.4 qRT- PCR檢測免疫相關基因的表達 為檢測羊藿對MSCs細胞免疫調節(jié)能力的作用，本實驗選取若干常見的免疫調控相關基因進行實時定量PCR檢測。MSCs培養(yǎng)基中加入羊藿苷使終濃度為2 mg/L，刺激24 h后進行PCR檢測。細胞總RNA提取和逆轉錄分別按試劑盒的說明書進行。實時熒光定量PCR使用ABI公司的7500系統(tǒng)以SYBR Green法完成。引物由上海博尚基因有限公司合成（表1），內參基因為β-actin。目的基因的表達量通過2-dCT與內參基因對比（dCT=CT目的基因/CT內參基因），未刺激對照組的基因表達量設為1。

表1 定量PCR引物1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 15.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗；定量PCR數(shù)據(jù)采用Sequence Detection Software 1.4 （Applied Biosystems）軟件進行分析；以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 MSCs的細胞基本生物學特征

骨髓單個核細胞懸液貼壁法2 d后就有少量成纖維狀細胞貼壁，經(jīng)過約10 d培養(yǎng)后這些細胞匯合成片，傳代2～3次后能獲得形態(tài)均一的細胞（圖1A）。根據(jù)流式細胞儀檢測結果，所獲得的貼壁細胞CD34和CD45表達陰性，CD44、CD71、CD90和CD105陽性表達（圖1B），符合間充質干細胞的特征。

2.2 淋巴細胞混合培養(yǎng)檢測羊藿苷對MSCs的影響

采用L-PHA（終濃度為10 μg/mL）刺激人外周血淋巴細胞，并用CCK-8方法檢測淋巴細胞增殖（圖2A）。與對照組相比，刺激后第3天淋巴細胞增殖明顯。所以后續(xù)實驗MSCs與淋巴細胞混合培養(yǎng)時從第3天開始檢測。對照組和羊藿苷組MSCs分別與淋巴細胞進行混合培養(yǎng)，于第3～5天分別進行淋巴細胞增殖檢測。結果顯示，羊藿苷組的吸光值低于對照組（圖2B），即羊藿苷組混合培養(yǎng)體系內淋巴細胞的數(shù)目較對照組少，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。提示羊藿苷處理的MSCs對淋巴細胞增殖的抑制作用增強，其免疫抑制能力強于未處理的MSCs。

2.3 實時定量PCR結果

與對照組相比，羊藿苷組MSCs表達更多的血紅素加氧酶1（HMOX-1）、白細胞介素10（IL-10）、誘導型一氧化氮合酶（iNOS）和白介素2（IL-2）的基因，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）；而IL-1α、IL-1β和IFN-γ基因的表達水平下降，吲哚胺2，3雙加氧酶1（IDO-1）、環(huán)氧合酶2（COX-2）和轉化生長因子β（TGF-β）的表達水平未發(fā)生明顯變化（圖3）。已知HMOX-1、IL-10和iNOS基因表達具有抑制炎癥的作用，而IL-1α、IL-1β和IFN-γ可促進炎癥。因此，雖然IL-2的表達上調，但其他促炎因子均表達下調，多種免疫抑制因子的表達水平均上升。

3 討論

ICA是小檗科羊藿屬植物的地上部分干燥物，具有補腎壯陽、強筋骨、祛風除濕、祛痰止咳的功效，是中醫(yī)治療骨質疏松方劑中使用頻率最高的中草藥之一[5]。ICA常通過口服方式給藥，經(jīng)腸道細菌分解會產(chǎn)生多種代謝產(chǎn)物，其中主要功效物質是羊藿次苷Ⅱ （icariside Ⅱ，ICSⅡ）[8]。關于ICA的作用機制，許多人認為是植物雌激素樣作用，有結果顯示ICA的體內代謝產(chǎn)物ICSⅡ可以提高iNOS的活性，促進NO的生成，從而激活NO信號途徑[7]，目前普遍認為此途徑是其主要作用機制。但MSCs的免疫調節(jié)功能是否受到ICA的影響目前尚不明確。

混合淋巴細胞培養(yǎng)實驗結果表明，兩組MSCs均可抑制淋巴細胞的增殖，但羊藿苷處理后的MSCs的免疫抑制作用更加明顯，且差異有統(tǒng)計學意義。為了進一步研究其抑制作用的機制，本研究進一步通過定量PCR的方法驗證了MSCs中相關免疫調控基因的表達。結果顯示，與免疫抑制功能密切相關的基因如HMOX-1、IL-10和iNOS的表達水平均顯著上調，其中，已知iNOS能夠誘導產(chǎn)生NO，影響巨噬細胞和T細胞的功能，在抑制T細胞的增殖中發(fā)揮重要的作用[9-10]，這和ICA促進NO的合成相關報道[7]相符。另外，IL-10可刺激MSCs釋放可溶性的HLA-G，抑制T淋巴細胞的增殖以及NK和T細胞的細胞毒作用，提高免疫抑制性Treg細胞的比例[11-12]。此外，HMOX-1在MSCs的免疫抑制調控中也發(fā)揮了重要作用[13]。免疫調控中的另外兩個關鍵基因IDO-1、COX-2上調并不顯著。值得注意的是，相關促炎因子IL-1α、IL-1β和IFN-γ都有所下調，僅IL-2表達水平上升。從熒光定量反轉錄PCR結果來看，兩組細胞免疫調控相關基因表達情況與淋巴細胞混合培養(yǎng)的結果基本一致。

本研究表明，羊藿苷組MSCs的免疫抑制作用強于未處理的對照組MSCs。MSCs免疫調控作用不僅通過分泌途徑實現(xiàn)，也通過細胞直接接觸實現(xiàn)。在MSCs與外周血淋巴細胞混合培養(yǎng)過程中，本研究也觀察到大量淋巴細胞貼附于ICA處理過的MSCs表面，可能與免疫抑制效果增強有關。

綜上所述，本研究首先對MSCs的羊藿苷與其免疫調控特性之間的關系進行了初步研究，并對其機制進行了初步探討，對治療相關疾病時羊藿苷的選擇具有一定的指導意義。

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第7篇：細胞免疫范文

【關鍵詞】 吸毒者

關鍵詞: 吸毒者;細胞免疫;自由基;性腺檢測;腎虛

摘 要:目的 研究吸食阿片類對人體細胞免疫功能、自由基及性腺激素的影響及與中醫(yī)腎虛的關系. 方法 應用紅細胞C3 b受體-酵母菌花環(huán)試驗和紅細胞-IC花環(huán)試驗檢測紅細胞免疫功能，應用流式細胞儀技術，通過微量全血直接免疫熒光染色法測定外周血T淋巴細胞亞群以反映細胞免疫功能;應用酶標儀及851光電比色計測定自由基相關指標（SOD，MDA，NO，NOS）的含量;應用酶免法檢測黃體生成素（LH）、濾泡刺激素（FSH）、睪酮（T）的含量.參考昆明藥物依賴性康復中心《阿片類藥物戒斷癥狀量表》（OWS）［1］ 進行戒斷腎虛癥狀積分評定. 結果 17例吸毒者外周血檢測RBC-C 3 bRR，CD4+ 細胞百分率明顯低于健康人（P

Keywords:drug addicts;cellular immune function;SOD;MDA;NO;NOS;gonad function;deficiency of kidney

Abstract:AIM To study the reactive ability of cellular im-mune function，free radical（SOD，MDA，NO，NOS）and hypo-pituitary-gonad axis in the drug addicts.METHODS T-lymphocyte subgroups of peripheral blood（including CD4+ and CD8+ ）were measured by direct microvolume whole blood immunoflurescent staining technique with flow cytometer（FCM）were observed to evaluate the immune functions in drug addicts.The SOD，MDA，NO，NOS were observed to evaluate in drug addicts.Gonad functions（in-cluding FSH，LH and T）were observed to valuate the gonad functions in the drug addicts.RESULTS The value of RBC-C3 bRR，CD4+ in drug addicts were significantly lower than that in normal people（P

0 引言

為了研究吸食阿片類對人體細胞免疫功能、自由基及性腺激素的影響以及中醫(yī)證型的認定，我們對17例吸毒者進行紅細胞免疫、T細胞亞群、自由基及性腺激素檢測，并進行了戒斷癥狀腎虛積分評定.

1 對象和方法

1.1 對象 本組病例均來自西安市公安局灞橋戒毒所，共17例，均為男性，年齡17～39（平均32）歲;均符合DSM-IV中阿片類物質所致依賴及戒斷綜合征診斷標準［1］ ，吸毒史最長者15a，最短者1a，平均吸毒史4a;日吸毒量0.5～2.5（平均1.5）g;吸毒方式，燙吸15例（88.4%），燙吸加注射2例（11.6%）.實驗室檢查，肝腎功、心電圖、血常規(guī)均正常，尿嗎啡定性實驗陽性.

1.2 方法 吸毒者于清晨08∶00靜脈采血，125U?L-1 肝素抗凝，應用微量全血直接免疫熒光染色法通過Epics-profileⅡ型流式細胞儀（美國Coulter公司生產(chǎn)）.檢測T細胞亞群.測定C3 b受體花環(huán)率（RBC-C3 bRR）、紅細胞免疫復合物花環(huán)率（RBC-IcR）.清晨08:00靜脈采血，應用酶標儀檢測超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS），應用851光電比色計，采用比色法檢測丙二醛（MDA）的含量，試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，檢測嚴格按照試劑盒說明進行.于清晨08∶00;08∶30;09∶00靜脈采血，采用酶免法檢測黃體生成素（luteinizing hormone，LH）、濾泡刺激素（fol-licle stimulating hormone，F(xiàn)SH）、睪酮（testos-terone，T）.記錄戒斷腎陽虛損癥狀積分，即惡心嘔吐，腰痛，便秘，手震顫，陣發(fā)性抽搐，四肢關節(jié)痛，怕冷，寒熱交替，出冷汗，哈欠，流清涕，流淚，入睡困難，睡眠質量不佳，早醒，疲乏，坐臥不寧，脈沉細.每項標準評分:0無癥狀，1癥狀輕微，2癥狀較重.

統(tǒng)計學處理:采用SPSS軟件進行數(shù)據(jù)分析，所用數(shù)據(jù)用x ±s表示，進行t檢驗.

2 結果

戒斷癥狀積分最高為23～33（平均28）分，根據(jù)標準，積分值愈高腎虛癥狀愈嚴重.

2.1 細胞免疫功能 吸毒者C3 b受體花環(huán)率（RBC-C3 bRR）及T4 （CD4+ ）細胞百分率明顯低于健康人（P0.05），而且依吸毒時間長短，日吸入量，個體等不同都有很大差異（Tab1）.

2.2 SOD，MDA，NO，NOS 吸毒者血清中SOD、MDA的含量明顯高于健康人（P

2.3 性腺功能 吸毒者黃體生成素（LH）、濾泡刺激素（FSH）、睪酮（T）明顯低于健康人（Tab3）.

轉貼于

3 討論

本結果顯示，17例吸毒者C3 b受體花環(huán)率（RBC-C3 bRR）及CD4+ 細胞百分率明顯低于健康人（P

表1 吸毒者細胞免疫功能的變化　略

表2 吸毒者SOD，MDA，NO，NOS的變化　略

表3 吸毒者性腺功能的變化　略

性腺功能檢測顯示，吸毒者血清LH，F(xiàn)SH，T含量明顯低于正常人（P

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第8篇：細胞免疫范文

【關鍵詞】角膜移植;免疫耐受;排斥反應;細胞

角膜移植術后免疫排斥反應是一個多種免疫細胞和免疫分子參與的復雜的免疫應答。雖然存在免疫赦免和前房相關性免疫偏離，但排斥反應仍是角膜移植失敗的主要限制因素[1]。誘導角膜移植免疫耐受是克服角膜移植排斥反應的關鍵。而參與角膜移植排斥反應的多種免疫細胞，在阻斷免疫應答、誘導免疫耐受中，發(fā)揮著重要作用職稱論文。

1樹突狀細胞

樹突狀細胞(dendriticcell,DC)是由美國Rockfeller大學Steinman等[2]于1973年在分離小鼠脾細胞分離中被發(fā)現(xiàn)，因其表面具有許多樹枝狀的突起而得名。DC是目前所知的機體內功能最強的、專職的、唯一誘導初始T細胞活化的抗原遞呈細胞(antigenprocessingcell，APC)，是適應性T細胞免疫應答的始動者。DC是一組異質的細胞群體，其異質性主要表現(xiàn)在不同的細胞起源、不同的成熟狀態(tài)和不同的功能等方面。未成熟DC低表達MHCⅠ/Ⅱ類分子，缺乏免疫應答所必需的CD40，B7(CD80，CD86)等共刺激分子和黏附分子，缺少激活T細胞免疫應答所必需的第二信號[3]，從源頭抑制免疫應答。過去認為DC主要分布在角膜周邊上皮及淺基質層，少量分布于偏中央?yún)^(qū)，中央?yún)^(qū)缺乏，Hamrah等[4]發(fā)現(xiàn)成人角膜的中央上皮及其淺基質層存在未成熟DC和前體DC，骨髓源的未成熟的存在是DC形成前房相關性免疫偏離(anteriorchamberassociatedimmunedeviation,ACAID)的一個重要原因。Raimondi等[5]和NouriShirazi等[6]認為，未成熟的自體DC或供體DC作為誘導移植免疫耐受的啟動子，通過致敏受體的T細胞誘導免疫耐受,從而延長移植物的存活時間。未成熟DC誘導免疫耐受的機制表現(xiàn)為：(1)誘導T細胞無能：未成熟DC表面表達低水平的MHC分子，幾乎不表達CD40，CD80，CD86等激活T細胞所必須的輔助分子，因此不能活化T細胞導致T細胞無能或低反應;(2)促進Th1/Th2偏離：Khanna等[7]將肝臟DC皮下注射到同種異體鼠內，可誘導Th2細胞增生，促進Th2細胞因子分泌，誘導免疫耐受;(3)誘導調節(jié)性T細胞的產(chǎn)生:Min等[8]發(fā)現(xiàn)未成熟DC能夠刺激初始T細胞轉化成調節(jié)性T細胞，反過來，調節(jié)性T細胞也能抑制DC的成熟。未成熟DC與調節(jié)性T細胞如此反復相互激發(fā)形成反饋環(huán)路，阻礙移植物排斥;(4)促進T細胞凋亡：最近研究發(fā)現(xiàn)未成熟DC細胞具有一種DEC205受體，可以和許多抗原結合，其結合效率比其他同源受體高30～100倍。在穩(wěn)態(tài)時，將antiDEC配體選擇性靶向結合到DC細胞上，T細胞首先大量增殖，然后大部分激活T細胞在1wk內凋亡，實驗小鼠獲得免疫耐受[9];(5)高表達IDO誘導免疫耐受：吲哚胺2，3二氧化酶(indoleamine2,3dioxygenase，IDO)是將色氨酸轉化為犬尿氨酸的限素酶，色氨酸是T細胞、尤其是抗原活化的T細胞增殖所必需的氨基酸，IDO的活性表達導致T細胞微環(huán)境中色氨酸的耗竭使細胞處于一種“色氨酸饑渴”狀態(tài)引起T細胞的增殖抑制。研究證實，正常角膜有低水平IDOmRNA和蛋白表達，IDO在角膜的表達明顯提高角膜植片的存活時間[10];(6)細胞因子模式：IL10，TGFβ等細胞因子通過上調免疫抑制性受體ILT3，ILT4是DC耐受的分子機制[11]。研究證實，未成熟樹突狀細胞分泌IL10在免疫耐受中起重要作用[12];(7)NFκB(nuclearfactorκB，NFκB)是一種細胞內普遍存在的轉錄因子,具有啟動基因轉錄的功能。實驗證實，自身免疫性疾病、變態(tài)反應、心肌再灌注損傷、機體對移植物的排異反應以及某些神經(jīng)性疾病中均可發(fā)現(xiàn)NFκB呈過度激活狀態(tài)[13]。趙巍等[14]證實,NFκB參與了異體角膜移植排斥反應的調控,在免疫排斥反應的發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。Yoshimura等[15]研究證明對于阻斷樹突狀細胞的抗原遞呈以及抑制T細胞依賴的免疫應答,NFκB是一個有效的靶基因。

2調節(jié)性T細胞

調節(jié)性T細胞(regulatoryTcells,Treg)是一類表面高表達IL2受體α鏈(CD25)、胞質中表達Foxp3轉錄因子的CD4+T細胞，在免疫應答的負調節(jié)及自身免疫耐受中發(fā)揮重要作用。眼源性抗原信號通過眼局部的抗原遞呈細胞經(jīng)血到達脾臟后,選擇性地激活Treg,抑制抗原特異性的遲發(fā)型超敏反應(delayedtypehypersensitivity,DTH)和補體結合性抗體的產(chǎn)生發(fā)展,保留抗原特異致敏的細胞毒性T細胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)反應,這種現(xiàn)象叫前房相關性免疫偏離(anteriorchamberassociatedimmunedeviation,ACAID)[16]。ACAID是全身免疫系統(tǒng)對前房內抗原產(chǎn)生的一種特殊的免疫偏離現(xiàn)象,造成全身性的免疫炎癥反應DTH被抑制,保護眼球免遭炎癥破壞[17]。誘導ACAID必須具備以下條件:調節(jié)性T淋巴細胞，抗原注射后保持眼球完整性不少于3d、脾臟和正常的眼部微環(huán)境。無論是可溶性抗原卵蛋白(OVA)還是同種異基因抗原(脾細胞懸液)，都必須通過調節(jié)性T淋巴細胞的免疫調節(jié)作用才能誘導產(chǎn)生ACAID[18]。最近研究證實在鼠角膜移植模型中，Treg在區(qū)域引流淋巴結中而不是在外周免疫反應中發(fā)揮抑制功能[19]。

3自然殺傷T細胞

自然殺傷T細胞(naturalkillerT,NKT)是一種新型淋巴細胞,與T細胞和NK細胞不同,被稱為第4類淋巴細胞，其同時表達T細胞表面受體和NK細胞表面標志,發(fā)育受CD1分子限制。CD1d反應性NKT表達Vα14Jα281TCR，而敲除Jα281的小鼠,不能產(chǎn)生抗原特異性Treg和ACAID。NKT來源的IL10對抗原特異性Treg細胞的產(chǎn)生和ACAID的誘導是非常重要的[20]。Sonoda等[21]將正常小鼠和去除NKT細胞的小鼠分別作為受體進行同種異體移植，在移植12wk后,正常小鼠和NKT細胞敲除鼠的植片存活率分別為50%和0,NKT細胞對于植片的存活是必要的。劉穎等[22]在大鼠角膜移植手術結束時結膜下僅注射一次細胞,就能使植片存活時間延長,直到術后第26d植片才發(fā)生排斥,存活時間遠較對照組長。Ly49C/I為表達于NK，NKT，γδT等細胞的一種抑制性受體，研究證實，Ly49C/I+CD4+NKT細胞上調IL10的表達，降低IFNγ，在眼的免疫耐受中起重要作用[23]。

4γδT細胞

根據(jù)表達TCR的類型，T細胞分為αβT細胞和γδT細胞。執(zhí)行固有免疫功能的γδT細胞作為黏膜淋巴組織的重要成員，參與構成了機體的第一道防線?；罨摩忙腡分泌IL2，IL4，IFNγ，TNFα，TGFβ，IL10等多種細胞因子，參與免疫調節(jié)。研究發(fā)現(xiàn),γδT細胞與ACAID密切相關,在攜帶抗γδ抗體鼠的前房注入可溶性抗原或同種異體抗原(脾細胞)后不能誘導產(chǎn)生ACAID。在基因敲除鼠的實驗中，功能性的γδT細胞的缺少不能形成ACAID。角膜移植前用GL3Ab阻滯γδT細胞的實驗，確定了γδT在ACAID形成中的重要性[24]。預先用抗鼠δ鏈單克隆抗體的C57BL/6小鼠或是γδT細胞受體缺陷的小鼠δ(/)不能誘導ACAID[25]。因此γδT誘導ACAID，誘導角膜移植免疫耐受是必需的。

目前，角膜病在致盲的各種原因中占第2位，而角膜移植是治療頑固性角膜病的最終手段。但角膜移植排斥反應一直都是角膜移植失敗的主要原因。誘導免疫耐受是徹底克服角膜排斥反應的理想方法。多種參與免疫活動的免疫細胞如樹突狀細胞、調節(jié)性T細胞、自然殺傷T細胞、γδT細胞等在抑制角膜移植術后排斥反應，誘導免疫耐受中的作用已得到實驗證實。這為我們徹底克服角膜移植排斥反應，最終治療角膜病，提供了新的思路。

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第9篇：細胞免疫范文

【關鍵詞】 肺腫瘤 淋巴細胞免疫分型 免疫監(jiān)測

Abstract:Objective To investigate the baseline immunological status in patients with lung cancer by analyzing the changes in peripheral blood lymphocyte subsets.Methods Lymphocyte subsets in the peripheral blood were detected by flow cytometry in 60 patients with lung cancer and 20 healthy controls.Results The lung cancer group had a lower percentages of CD3（+）， CD4（+） lymphocytes， NK cell， and lower CD4（+）/CD8（+） ratio than the control group (P

Key words: pulmonary neoplasms; lymphocyte subsets; immune mornitoring

機體免疫功能在抗腫瘤過程中起著重要的作用，不同淋巴細胞免疫分型在機體免疫的調控和抗腫瘤免疫中起重要作用。肺癌的發(fā)生、發(fā)展與宿主免疫監(jiān)視功能低下有關。近年來研究發(fā)現(xiàn)，肺癌患者免疫功能低下主要表現(xiàn)為T淋巴細胞和NK細胞功能紊亂與缺陷。監(jiān)測肺癌患者免疫狀態(tài)有助于合理選擇最佳的治療方法并評價疾病的預后。本研究采用流式細胞儀檢測了肺癌患者外周血淋巴細胞免疫分型的變化情況，以初步探討肺癌患者的免疫功能狀態(tài)變化，評估病情狀況，指導免疫治療。

1 資料和方法

1．1 研究對象和分組 2006年10月～2007年4月在蘇州大學附屬第二醫(yī)院經(jīng)病理確診為肺癌的患者60例（肺癌組），其中男性47例，女性13例，年齡34～82歲（中位年齡66歲）。根據(jù)美國聯(lián)合癌癥分類委員會（AJCC）和國際抗癌聯(lián)盟（UICC）2002年制定的肺癌的TNM分期標準臨床分期如下：Ⅱ期1例，Ⅲ期23例，Ⅳ期36例；病理類型為：鱗癌23例，腺癌20例，小細胞癌7例，未定型10例。對照組20例均為既往無相關疾病的健康體檢者，其中男性16例，女性4例，年齡51～78歲（中位年齡64歲）。

1.2 實驗方法

1.2.1 標本采集及處理 取肺癌組患者及對照組

健康體檢者靜脈血 3ml加入含肝素的抗凝管中混

勻后備用。取專用試管6支，各試管加入外周血標本100 μl，分別加入CD45-異硫氰酸熒光素（FITC)/CD14-藻紅脘（PE），IgG1-FITC/IgG2a-PE，CD3-FITC/CD19-PE，CD3-FITC/CD4-PE，CD3-FITC/CD8-PE，CD3-FITC/ CD16（+）56-PE單克隆雙色抗體15 μl，與之充分混勻，室溫避光下孵育15 min，然后每管加入10×FACS(紅細胞裂解液)溶血劑2 ml，充分混勻，室溫避光下溶血10～15 min（15～22℃）至完全透明，1500 r/min離心10 min，棄上清液，PBS洗滌3次，每管加入0.5 ml PBS液懸浮，混勻放置室溫下待測。

1.2.2 淋巴細胞免疫分型檢測 用Becton-Dickinson公司生產(chǎn)的FACS Calibur型流式細胞儀測定。

1.3 統(tǒng)計學處理 本實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 11.0軟件處理，檢測結果以±s表示。肺癌患者與對照組之間的比較采用獨立樣本的雙側t檢驗， P

2 結 果

肺癌組外周血CD3（+）、CD4（+）、NK細胞比例及CD4（+）/CD8（+）比值均低于對照組（P

3 討 論

機體免疫監(jiān)視功能缺陷可能是腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的常見事件。隨著對腫瘤病因的認識的深入，人們發(fā)現(xiàn)淋巴細胞亞群改變導致的免疫功能損害可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預后相關，目前研究最多的是T細胞亞群的測定［1～2］。

T淋巴細胞不僅是細胞免疫的效應細胞，而且在調節(jié)免疫反應中起重要作用。T細胞亞群表面分子主要包括CD3（+）、CD4（+）和CD8（+）等。CD3（+） T細胞存在于所有成熟T細胞膜上，代表了宿主總的T細胞數(shù)量和細胞免疫狀態(tài)。CD4（+）分布在輔助細胞誘導亞群和抑制細胞誘導亞群表面，又稱T輔助或誘導細胞，在抗腫瘤免疫中起著積極的作用，其主要功能是通過分泌淋巴因子，增加和擴大免疫應答過程，輔助誘導其它免疫細胞共同發(fā)揮抗腫瘤作用。CD8（+）分布在抑制性T細胞和殺傷性T細胞表面，不僅具有負調節(jié)效應，同時具有維持抗腫瘤免疫記憶的功能，并能抑制B細胞產(chǎn)生抗體。CD4（+）/CD8（+）比例的恒定維持著細胞免疫反應的平衡，腫瘤抗原識別和殺傷分別通過CD4（+） T細胞和CD8（+） T細胞完成。Trojan等［3］研究表明，在非小細胞肺癌的患者中，CD8（+） T細胞雖然能浸潤入腫瘤細胞中，但由于不能被充分激活而無法產(chǎn)生有效的抗腫瘤作用。Prado-Garcia等［4］發(fā)現(xiàn)CD8（+） T細胞亞群的比例不受T細胞產(chǎn)生的細胞因子刺激而改變，這種改變是導致肺癌患者抗腫瘤免疫效應低下的原因之一。此外，NK細胞也是機體免疫監(jiān)視系統(tǒng)的主要組成部分，是機體抗腫瘤的第一道防線，參與T淋巴細胞、B淋巴細胞的調節(jié)，是細胞免疫中的非特異性成分。在多數(shù)情況下，NK細胞不依賴抗體、補體及預先致敏，可自發(fā)啟動殺傷功能，并與單核細胞、粒細胞等協(xié)同發(fā)揮抗腫瘤、抗感染的免疫調節(jié)作用，但其活性可被腫瘤細胞分泌的免疫抑制因子抑制，從而降低機體對腫瘤的抵抗力。近年來的研究還表明：NK細胞不僅在非特異性抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用，并且具有激活和增強重要的抗原遞呈細胞樹突狀細胞（DC）的功能，因此，NK細胞起到連接非特異性免疫和特異性免疫的橋梁作用［5］。我們的研究發(fā)現(xiàn)，和對照組相比，肺癌患者機體免疫活性細胞比例存在異常，主要表現(xiàn)為淋巴細胞免疫分型比例失調，如CD3（+）、CD4（+）、NK細胞比例下降，CD8（+）細胞比例上升，CD4（+）/CD8（+）比值下降。提示肺癌患者存在免疫抑制和免疫調節(jié)功能紊亂，CD4（+） T細胞輔助誘導其它免疫細胞發(fā)揮抗腫瘤作用的功能減弱，CD8（+） T細胞數(shù)量增多，負調節(jié)效應增強；CD4（+）/CD8（+）比值下降，有利于腫瘤增殖。

CD19是B淋巴細胞膜表面標志，B淋巴細胞主要介導體液免疫。本研究結果顯示，肺癌患者與正常人相比CD19（+）細胞比例差異無顯著性，顯示體液免疫在腫瘤免疫中并非處于主要地位。

我們認為，肺癌患者細胞免疫功能較正常人群存有降低趨勢，外周血淋巴細胞免疫分型測定可用于肺癌患者的免疫功能監(jiān)測。研究肺癌患者的免疫功能狀況在指南個體化治療、療效評價、功能狀態(tài)評分及預后中的作用有待于更多前瞻性的臨床研究。

【參考文獻】

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［4］ Prado-Garcia H， Aquilar-Cazares D， Flores-Verqara H， et al. Effector， memory and nave CD+8 T cells in peripheral blood and pleural effusion from lung adenocarcinoma patients ［J］. Lung Cancer， 2005， 47(3):361-371.