基因工程疫苗精選(九篇)

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第1篇：基因工程疫苗范文

基因工程在醫(yī)學(xué)上已得到廣泛應(yīng)用，并且應(yīng)用領(lǐng)域不斷被拓寬，取得了令人驚喜的成就。

1 基因工程制藥

基因工程制藥開(kāi)創(chuàng)了制藥工業(yè)的新紀(jì)元，解決了過(guò)去不能生產(chǎn)或者不能經(jīng)濟(jì)生產(chǎn)的藥物問(wèn)題?，F(xiàn)在，人類(lèi)已經(jīng)可以按照需要，通過(guò)基因工程生產(chǎn)出大量廉價(jià)優(yōu)質(zhì)的新藥物和診斷試劑，諸如人生長(zhǎng)激素、人的胰島素、尿激酶、紅細(xì)胞生成素、白細(xì)胞介素、干擾素、細(xì)胞集落刺激因子、表皮生長(zhǎng)因子等。令人振奮的是，具有高度特異性和針對(duì)性的基因工程蛋白質(zhì)多肽藥物的問(wèn)世，不僅改變了制藥工業(yè)的產(chǎn)品結(jié)構(gòu)，而且為治療各種疾病如糖尿病、腎衰竭、腫瘤、侏儒癥等提供了有效的藥物。眾所周知，醫(yī)治侏儒癥的良藥是人生長(zhǎng)激素，倘若從人的尸體中獲取，治療一個(gè)病人就需要600具尸體的腦下垂體才能獲得足夠的量；倘若運(yùn)用基因工程生產(chǎn)，就可從每升基因工程菌液中得到2．4g。人們?yōu)榇硕铺祗@的興奮!成本如此之低，又如此之高產(chǎn)，其巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益，由此可見(jiàn)。

2 基因工程抗病毒疫苗

為人類(lèi)抵御病毒侵襲提供了用武之地。基因工程乙型肝炎疫苗、狂犬病疫苗、流行性出血熱病毒疫苗、輪狀病毒疫苗等應(yīng)用于臨床，提高了人類(lèi)對(duì)各種病毒病的抵御能力。比如，乙型肝炎病毒疫苗的問(wèn)世，使我國(guó)新生兒不再遭遇乙型肝炎病毒的侵襲，也降低了人群肝癌的發(fā)病率。又如，為治愈癌癥正在研制的用單克隆抗體制成的“生物導(dǎo)彈”，就是按照人類(lèi)的設(shè)計(jì)，把“生物導(dǎo)彈”發(fā)射出去，精確地命中癌細(xì)胞，并炸死癌細(xì)胞而不傷害健康的細(xì)胞。就單克隆細(xì)胞而言，單克隆細(xì)胞在腫癌的診斷檢測(cè)、顯示定位、監(jiān)測(cè)病變、監(jiān)測(cè)療效等方面也有重要價(jià)值。人類(lèi)還通過(guò)基因工程生產(chǎn)抵御各種病菌、血吸蟲(chóng)、虐原蟲(chóng)等疫苗，提高人體對(duì)各種傳染病的免疫力。脫氧核糖核酸或者基因疫苗的問(wèn)世，變革了機(jī)體的免疫方式。如今，人們翹首關(guān)注困擾人類(lèi)的艾滋病病毒(人類(lèi)免疫缺陷病毒)疫苗的早日問(wèn)世?；蚬こ炭贵w技術(shù)的發(fā)展，為克服單克隆抗體生產(chǎn)細(xì)胞株在生產(chǎn)過(guò)程中的不穩(wěn)定性，為生產(chǎn)大量高效抗病毒疫苗提供了先進(jìn)的生產(chǎn)工藝。

3 基因工程治療疾病

臨床實(shí)踐已經(jīng)表明，基因治病已經(jīng)變革了整個(gè)醫(yī)學(xué)的預(yù)防和治療領(lǐng)域。比如，不治之癥——白癡病，用健康的基因更換或者矯正患者的有缺損的基因，就有可能根治這種疾病。現(xiàn)在已知的人類(lèi)遺傳疾病約有4000種，包括單基因缺陷和多基因綜合征。運(yùn)用基因工程技術(shù)或者基因打靶的手段，將病毒的基因殺滅，插入校正基因，得以治療、校正和預(yù)防遺傳疾病的目的。人類(lèi)精心設(shè)計(jì)的基因工程操作，克服了不同個(gè)體甚至物種之間由于器官移植所產(chǎn)生的免疫排斥作用，實(shí)現(xiàn)人體之間的移植已獲成功，成功的實(shí)體器官移植有腎、心、肝、胰、肺、腸，也有雙器官和多器官的聯(lián)合移植。而人體與動(dòng)物之間的器官移植成為現(xiàn)實(shí)，臨床應(yīng)用已是指日可待的事了。脫氧核糖核酸化學(xué)合成的完善和自動(dòng)化，脫氧核糖核酸擴(kuò)增技術(shù)的優(yōu)化，為合成基因“探針”，提高臨床診斷的質(zhì)量，是人類(lèi)所殷切企盼的。基因治療有兩種途徑，一是體細(xì)胞的基因治療，二是生殖細(xì)胞的基因治療。體細(xì)胞的基因治療是將正常的遺傳基因?qū)胧芫穆鸭?xì)胞內(nèi)，讓這種遺傳物質(zhì)進(jìn)入受精卵的基因組內(nèi)，并隨著受精卵分裂，分配到每一個(gè)子細(xì)胞中去，最終糾正未來(lái)個(gè)體的遺傳缺陷。而生殖細(xì)胞的基因治療是將人類(lèi)設(shè)計(jì)的“目的基因”導(dǎo)入患有遺傳病病人的生殖細(xì)胞內(nèi)，此法操作技術(shù)異常復(fù)雜，又涉及倫理，緩行之理充足，故尚無(wú)人涉足。

4 基因工程診病

第2篇：基因工程疫苗范文

1. 轉(zhuǎn)基因植物

轉(zhuǎn)基因作物的研究規(guī)模已達(dá)到了空前的水平。自1983年世界上第一例轉(zhuǎn)基因抗病毒植物誕生以來(lái)，轉(zhuǎn)基因作物的研制、中間試驗(yàn)、田間釋放和商業(yè)化種植得到了迅速的發(fā)展，到1997年底，轉(zhuǎn)基因植物已達(dá)幾百種；轉(zhuǎn)基因作物于1986年在美國(guó)和法國(guó)首次進(jìn)入大田試驗(yàn)，到1997年底全世界轉(zhuǎn)基因作物的田間試驗(yàn)已達(dá)25000多例；1994年，美國(guó)批準(zhǔn)了轉(zhuǎn)基因延熟番茄的商業(yè)化生產(chǎn)，到1997年底，全世界共有51種轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)品被正式投入商品化生產(chǎn)。

轉(zhuǎn)基因作物的種植面積正在迅速擴(kuò)大。全世界轉(zhuǎn)基因作物的種植面積在1995年僅為1.2×106hm2，1996年為2.84×106hm2，1997年為1.25×107hm2，1998年為2.78×107hm2，1999年增至3.99×107hm2.2000年進(jìn)一步增至4.42×107hm2，2001年已達(dá)5.26×107hm2.2001年全球轉(zhuǎn)基因作物按作物種類(lèi)統(tǒng)計(jì)為：大豆占46%，棉花占20%，油菜占11%，玉米占7%；按國(guó)家統(tǒng)計(jì)：美國(guó)占70%（面積，下同）、阿根廷占22%、加拿大占6%、中國(guó)占1%～3％，上述4國(guó)占全球轉(zhuǎn)基因作物種植面積的99%；按目標(biāo)性狀分類(lèi)：抗除草劑轉(zhuǎn)基因作物占77%，抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因作物占15%.據(jù)統(tǒng)計(jì)，1999年美國(guó)轉(zhuǎn)基因大豆、棉花和玉米的種植面積，分別占該國(guó)相應(yīng)作物種植面積的55%、50%和30%。

轉(zhuǎn)基因作物具有巨大的經(jīng)濟(jì)效益，1997年美國(guó)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉種植面積為1×106hm2，平均增產(chǎn)70%，每公頃抗蟲(chóng)棉可增加凈收益83美元，直接經(jīng)濟(jì)效益近1億美元；1998年美國(guó)種植轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)玉米達(dá)5×106hm2，平均增產(chǎn)9%，其凈收益為68.1美元／hm2，可產(chǎn)生直接經(jīng)濟(jì)效益3.4億美元。1995年全球轉(zhuǎn)基因作物的銷(xiāo)售額僅為0.75億美元，1998年達(dá)到12億美元～15億美元，2000年已達(dá)30億美元，5年間增加了40倍。預(yù)計(jì)2005年將達(dá)60億美元，2010年將達(dá)到200億美元。 

2.植物用轉(zhuǎn)基因微生物 

自上世紀(jì)80年代以來(lái)，重組農(nóng)業(yè)微生物工程研究取得了突破性進(jìn)展，其中新型重組固氮微生物研究已進(jìn)入田間試驗(yàn)，一些殺蟲(chóng)、防病遺傳工程微生物進(jìn)入田間試驗(yàn)或商業(yè)化生產(chǎn)。防凍害基因工程菌株已于1987年進(jìn)入田間試驗(yàn)，防治果樹(shù)根癌病工程菌株也于1991年和1992年先后在澳大利亞和美國(guó)獲準(zhǔn)登記，目前已在澳大利亞、美國(guó)、加拿大和西歐一些國(guó)家銷(xiāo)售，這是世界上首例商品化生產(chǎn)的植病生防基因工程細(xì)菌制劑。具有殺蟲(chóng)活性的轉(zhuǎn)b.t基因工程細(xì)菌，自1991年起已有多個(gè)產(chǎn)品進(jìn)入市場(chǎng)。在高銨條件下仍保持良好固氮能力的耐銨工程菌株，也進(jìn)入田間試驗(yàn)。 

3.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物主要應(yīng)用于以下幾個(gè)方面：改良動(dòng)物品種和生產(chǎn)性能；生產(chǎn)人藥用蛋白和營(yíng)養(yǎng)保健蛋白；生產(chǎn)人用器官移植的異種供體；建立疾病和藥物篩選模型；生產(chǎn)新型生物材料等。1998年全球動(dòng)物生物技術(shù)產(chǎn)品總銷(xiāo)售額約為6.2億美元，預(yù)計(jì)2010年總銷(xiāo)售額將達(dá)到110億美元，其中75億美元是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物產(chǎn)品。

4. 獸用基因工程生物制品

獸用基因工程生物制品是指利用重組dna技術(shù)生產(chǎn)的獸用免疫制劑。主要包括：?jiǎn)慰寺】贵w等診斷試劑，目前國(guó)內(nèi)外正在研究、開(kāi)發(fā)或已應(yīng)用的單克隆抗體診斷試劑已達(dá)1000多種；基因工程疫苗，已有44例獲準(zhǔn)進(jìn)行商品化生產(chǎn)，其中重組亞單位疫苗30例，基因缺失活疫苗12例，基因重組活疫苗2例。此外，還有dna疫苗和獸用基因植物源生物制品等。 

5. 轉(zhuǎn)基因水生生物 

迄今為止，全世界研究的轉(zhuǎn)基因水生生物達(dá)20余種，已有8種進(jìn)入中間試驗(yàn)，其中我國(guó)有一種兩例，僅有大西洋鮭1種可能已開(kāi)始小規(guī)模商品化生產(chǎn)。

6. 我國(guó)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物研發(fā)現(xiàn)狀與產(chǎn)業(yè)化概況

我國(guó)轉(zhuǎn)基因植物的研究開(kāi)發(fā)始于20世紀(jì)80年代，1986年啟動(dòng)的863高新技術(shù)計(jì)劃起到了關(guān)鍵性的導(dǎo)向、帶動(dòng)和輻射作用。據(jù)1996年統(tǒng)計(jì)，國(guó)內(nèi)正在研究和開(kāi)發(fā)的轉(zhuǎn)基因植物約47種，涉及各類(lèi)基因103種。1997年～1999年，有26例轉(zhuǎn)基因植物獲準(zhǔn)進(jìn)行商業(yè)化生產(chǎn)。按轉(zhuǎn)基因性狀分：抗蟲(chóng)16例，抗病毒9例，改良品質(zhì)1例。按作物劃分：棉16例，番茄5例，甜椒4例，矮牽牛1例。

轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉是國(guó)內(nèi)植物基因工程應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的第一個(gè)成功范例，使我國(guó)成為繼美國(guó)之后獨(dú)立研制成抗蟲(chóng)棉，并具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的第二個(gè)國(guó)家。1998年～2001年4年累計(jì)種植逾1.3×106hm2，減少農(nóng)藥使用量70%以上，產(chǎn)生了巨大的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益。由于其傘形輻射的帶動(dòng)作用，抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因水稻、玉米、楊樹(shù)等一批后繼轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品正在進(jìn)行田間試驗(yàn)，蓄勢(shì)待發(fā)。轉(zhuǎn)基因技術(shù)將使農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)發(fā)生深刻的結(jié)構(gòu)變化，向農(nóng)業(yè)與醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)與食品、農(nóng)業(yè)與加工結(jié)合的方向發(fā)展。

我國(guó)植物用轉(zhuǎn)基因微生物研究已取得長(zhǎng)足進(jìn)展，正在研發(fā)的防病殺蟲(chóng)微生物13種，涉及基因16種；固氮微生物8種，涉及基因12種，大多已進(jìn)入中間試驗(yàn)和環(huán)境釋放試驗(yàn)。我國(guó)獸用基因工程生物制品研究與產(chǎn)業(yè)化進(jìn)展迅速，已有近70種單克隆抗體等診斷試劑投放市場(chǎng)，2例基因工程疫苗獲準(zhǔn)進(jìn)行商品化生產(chǎn)，其中重組亞單位疫苗1例，基因重組活疫苗1例。

我國(guó)轉(zhuǎn)基因水生生物研究取得了舉世矚目的成就，1985年，我國(guó)培育出世界首批轉(zhuǎn)基因魚(yú)。此后，培育出比正常生長(zhǎng)速度快3倍～4.6倍的轉(zhuǎn)基因泥鰍。目前，轉(zhuǎn)生長(zhǎng)激素基因鯉、轉(zhuǎn)大馬哈魚(yú)生長(zhǎng)激素基因鯉均進(jìn)入中試階段。此外，我國(guó)還開(kāi)展了藻類(lèi)、貝類(lèi)等其他水生生物的轉(zhuǎn)基因研究。我國(guó)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究成績(jī)斐然，生長(zhǎng)速度快、瘦肉率高、對(duì)某些病毒有一定抗性的轉(zhuǎn)基因豬培育成功，乳腺組織能夠表達(dá)人藥用蛋白凝血因子ix、人生長(zhǎng)激素、人紅細(xì)胞生成素的轉(zhuǎn)基因羊已進(jìn)入中試和安全性評(píng)價(jià)階段，此外，還成功地培育了轉(zhuǎn)基因牛。

第3篇：基因工程疫苗范文

【Abstract】 AIM: To design and obtain novel rotavirus (RV) VP6 gene. METHODS: On the basis of our previous reports， RV VP6 gene was optimized through the gradual splicing method， according to the improved PCR strategy. RESULTS: The optimized cDNA sequence of RV VP6 gene was successfully synthesized， which was about 1220 bp and reached 55% in (G+C) content. CONCLUSION: The optimized RV VP6 gene was obviously increased about 20% in (G+C) content compared to wildtype RV VP6 gene. This study laid a further strong foundation for the development of novel oral rotavirus genetic engineering vaccine.

【Keywords】 rotavirus; VP6 gene; genes， synthetic; genetic engineering vaccine

【摘要】 目的：設(shè)計(jì)獲得輪狀病毒（RV）新型VP6基因. 方法：本研究在前期工作的基礎(chǔ)上，對(duì)RV VP6基因的優(yōu)化合成方法進(jìn)行了探索研究. 我們應(yīng)用改良的嵌套式PCR策略，通過(guò)逐步拼接法對(duì)RV VP6基因進(jìn)行了優(yōu)化改造. 結(jié)果：成功地合成了優(yōu)化的RV VP6基因cDNA序列，該序列長(zhǎng)約1220 bp，(G+C)含量達(dá)55%. 結(jié)論：與野生型RV VP6基因相比，優(yōu)化合成的RV VP6基因(G+C) 含量提高了約20%，這一工作為新型高效口服RV基因工程疫苗的深入研究奠定了基礎(chǔ).

【關(guān)鍵詞】 輪狀病毒； VP6基因；基因，合成； 基因工程疫苗

0引言

輪狀病毒（rotavirus， RV）是引起全世界嬰幼兒嚴(yán)重腹瀉的重要病原，RV危害嚴(yán)重且無(wú)有效的治療手段［1］，根除RV感染的惟一途徑是發(fā)展安全、有效的疫苗，這已成為一個(gè)全球性的公共醫(yī)療目標(biāo)，是一項(xiàng)十分迫切而必要的工作［2-5］. A組RV血清型眾多，VP6蛋白是其主要的組特異性抗原，有較強(qiáng)的抗原性和免疫原性，可誘導(dǎo)保護(hù)性免疫. 有研究表明，VP6蛋白的IgA mAb對(duì)RV感染具有免疫保護(hù)作用，肌注免疫VP6 DNA疫苗可產(chǎn)生較好的異源保護(hù)作用［6］，以VP6蛋白和黏膜佐劑免疫小鼠可誘導(dǎo)產(chǎn)生對(duì)鼠RV EDIM株的完全保護(hù)作用［7］. 根據(jù)我國(guó)RV的感染狀況，本課題組的疫苗設(shè)計(jì)方案主要包括A組RV的VP6抗原和A組RV G1，G2和G3型3種不同的VP7抗原. 前期免疫效果研究結(jié)果表明，灌胃免疫組產(chǎn)生的RV特異性免疫反應(yīng)較滴鼻組弱，推測(cè)可能與疫苗在胃腸道受到胃酸和消化酶的降解破壞作用，導(dǎo)致其表達(dá)量降低和免疫效果弱化有關(guān). 據(jù)此，為了發(fā)展新型高效的口服RV基因工程疫苗，我們應(yīng)用改良的嵌套式PCR策略，通過(guò)逐步拼接法對(duì)RV VP6基因進(jìn)行了優(yōu)化合成研究，以期提高其(G+C)含量，可望增加其表達(dá)量和提高以其為目標(biāo)抗原的RV疫苗的免疫效果.

1材料和方法

1.1材料PcDNAⅡ質(zhì)粒，E.coli DH5α菌種和E.coli DH10B菌種均為本室保存. Agarose Gel DNA purification Kit， Pyrobest DNA polymerase，T4 DNA Ligase， 限制性DNA內(nèi)切酶KpnⅠ，XhoⅠ，EcoRⅠ，EcoRV，XGal， IPTG， DNA Marker DL2000， dNTP mixture和Amp均為T(mén)akara產(chǎn)品；RNA酶為Sigma產(chǎn)品； 酵母提取物和胰蛋白胨為OXOID產(chǎn)品； PEG(4000)為Promega產(chǎn)品.

1.2方法

1.2.1引物合成引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成.

1.2.2RV VP6基因的優(yōu)化合成根據(jù)RV VP6基因的氨基酸序列和人類(lèi)細(xì)胞偏愛(ài)的密碼子，重新設(shè)計(jì)了RV VP6基因的重組cDNA序列，合成了引物P11～P116和P21～P216與sP115和sP216. 根據(jù)嵌套式PCR方法制備突變體的原理［8］，我們應(yīng)用改良的嵌套式PCR策略，通過(guò)逐步拼接法人工合成RV VP6基因的重組cDNA序列.

2結(jié)果

2.1RV VP6基因S1和S2片段的合成應(yīng)用改良的嵌套式PCR策略，通過(guò)逐步拼接法人工合成RV VP6基因的重組cDNA序列，RV VP6基因全長(zhǎng)S片段分為S1和S2片段兩部分先分別合成，再以S1和S2片段為模板，合成RV VP6基因全長(zhǎng)S片段，合成策略見(jiàn)圖1，2. 獲得RV VP6基因S1和S2片段（圖3，4），對(duì)其進(jìn)行酶切和測(cè)序鑒定（圖5，6），合成片段序列正確.

2.2獲得優(yōu)化的RV VP6基因全長(zhǎng)S片段逐步拼接法獲得了約1220 bp的RV VP6基因全長(zhǎng)目的片段（圖7），進(jìn)行酶切（圖8）和測(cè)序鑒定，目的片段序列正確.

1: RV VP6基因全長(zhǎng)S片段；2: DNA標(biāo)準(zhǔn)DL2000.

圖7RV VP6基因全長(zhǎng)S片段的PCR產(chǎn)物

1: DNA標(biāo)準(zhǔn)DL2000；2: RV VP6基因全長(zhǎng)S片段陽(yáng)性重組質(zhì)粒.

圖8RV VP6基因全長(zhǎng)S片段陽(yáng)性重組質(zhì)粒酶切鑒定

2.3RV VP6基因優(yōu)化改造前后的序列對(duì)比分析應(yīng)用改良的嵌套式PCR策略，通過(guò)逐步拼接法成功地優(yōu)化合成了RV VP6基因. 與優(yōu)化改造前的野生型序列相比，優(yōu)化后的RV VP6基因(G+C)含量提高了約20％. 優(yōu)化改造前后的序列對(duì)比和(G+C)含量分析見(jiàn)表1.表1RV VP6基因優(yōu)化改造前后的序列對(duì)比分析

轉(zhuǎn)貼于 3討論

國(guó)內(nèi)外新型病毒疫苗發(fā)展規(guī)劃將RV預(yù)防性疫苗列為新型病毒疫苗研制的重點(diǎn)項(xiàng)目之一，全球疫苗與免疫接種聯(lián)盟（GAVI）和WHO也十分重視中國(guó)的口服RV活疫苗，將其列為“全球疫苗腹瀉病控制和免疫規(guī)劃”主攻發(fā)展的首要疫苗. 為了發(fā)展新型高效的口服RV基因工程疫苗， 本研究在前期免疫效果研究工作的基礎(chǔ)上， 針對(duì)灌胃免疫組產(chǎn)生的RV特異性免疫反應(yīng)比滴鼻組弱的問(wèn)題，分析其原因可能與疫苗在胃腸道受到胃酸和消化酶的降解破壞作用，導(dǎo)致其表達(dá)量降低和免疫原性弱化有關(guān)，根據(jù)有關(guān)HIV和DNA序列化學(xué)合成的有關(guān)研究報(bào)道［9-17］，提高目的基因的(G+C)含量可顯著提高其表達(dá)量，從而增強(qiáng)其免疫效果. 據(jù)此，我們對(duì)RV VP6基因優(yōu)化合成方法進(jìn)行了探索研究. 根據(jù)RV VP6基因的氨基酸序列和人類(lèi)細(xì)胞偏愛(ài)的密碼子，我們重新設(shè)計(jì)了RV VP6基因的cDNA序列，并增加了有助序列正確翻譯的Kozak序列，以提高VP6的表達(dá)量. 優(yōu)化改造的VP6基因重組cDNA序列包含保護(hù)性堿基、酶切位點(diǎn)和Kozak序列，共計(jì)約1220 bp.

應(yīng)用改良的嵌套式PCR策略，通過(guò)逐步拼接法對(duì)RV VP6基因的人工合成方法進(jìn)行探索，我們發(fā)現(xiàn)應(yīng)用改良的嵌套式PCR策略合成基因時(shí)，具體合成方法（逐步拼接法或兩步法）的選擇及基因合成的成功率可能主要取決于引物長(zhǎng)度及其彼此間的重疊長(zhǎng)度. ①當(dāng)引物長(zhǎng)度

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第4篇：基因工程疫苗范文

各位老師、各位領(lǐng)導(dǎo)：

大家下午好！

我叫榮俊，是生命科學(xué)學(xué)院的一名普通教師。今天有機(jī)會(huì)站在這里，主要是與大家進(jìn)行交流，分享一下從事科研工作的體會(huì)。

今年1月10日，我在北京參加了2013年度國(guó)家科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)大會(huì)，我參與的一個(gè)項(xiàng)目獲得了國(guó)家技術(shù)發(fā)明二等獎(jiǎng)。

這個(gè)項(xiàng)目名稱(chēng)叫《傳染性法氏囊病的防控新技術(shù)構(gòu)建及其應(yīng)用》，是由浙江大學(xué)、長(zhǎng)江大學(xué)、北京市農(nóng)林科學(xué)院、青島易邦生物工程有限公司共同完成的。長(zhǎng)江大學(xué)是第二完成單位。作為主要完成人，我排名第三，動(dòng)物科學(xué)學(xué)院的程太平副教授排名第六。

算起來(lái)，進(jìn)行這個(gè)項(xiàng)目的研究，前前后后已有20多年。項(xiàng)目組在“863”“科技支撐”“973” 等計(jì)劃項(xiàng)目的持續(xù)資助下，構(gòu)建了傳染性法氏囊病病毒（IBDV）反向遺傳學(xué)技術(shù)平臺(tái)，揭示了傳染性法氏囊病病毒的基因重配和復(fù)制的機(jī)制，發(fā)展了具有國(guó)際領(lǐng)先水平的安全的傳染性法氏囊病新型疫苗、檢測(cè)技術(shù)體系，尤其是發(fā)明的基因工程亞單位疫苗在養(yǎng)雞生產(chǎn)上的廣泛應(yīng)用，為減少疫病發(fā)生、消除傳染性法氏囊病病毒變異、凈化雞場(chǎng)的傳染性法氏囊病作出了重大貢獻(xiàn)。

作為成果第三完成人，我主持了雞傳染性法氏囊病基因工程亞單位疫苗的研究，組織實(shí)施了傳染性法氏囊病毒VP2 基因改造、基因表達(dá)、表達(dá)產(chǎn)物純化、油乳劑疫苗生產(chǎn)工藝研究，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，獲得了國(guó)家授權(quán)發(fā)明專(zhuān)利、農(nóng)業(yè)部簽發(fā)了國(guó)家II類(lèi)新獸藥注冊(cè)證書(shū)和準(zhǔn)予生產(chǎn)產(chǎn)品批準(zhǔn)文號(hào)、獲得國(guó)家重點(diǎn)新產(chǎn)品證書(shū)1 個(gè)。

尤其值得欣慰的是，我的發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)在青島易邦生物工程有限公司得到了具體實(shí)施和應(yīng)用，作為國(guó)家重點(diǎn)新產(chǎn)品，該疫苗已連續(xù)生產(chǎn)5年并在全國(guó)除香港和澳門(mén)所有省、市、自治區(qū)推廣使用，實(shí)現(xiàn)銷(xiāo)售收入4.776 億元，新增利稅收2.134億元。目前本成果產(chǎn)品的國(guó)內(nèi)市場(chǎng)份額達(dá)到70%以上。

回顧我的科研歷程，我覺(jué)得，有幾點(diǎn)感受較深的體會(huì)，在此與大家分享。

第一，科研成果的獲得是大量時(shí)間和精力投入的結(jié)果。

記得黨委書(shū)記朱業(yè)宏來(lái)看我時(shí)我曾經(jīng)說(shuō)過(guò)一句話(huà)，我絕對(duì)不是長(zhǎng)江大學(xué)做科研中最聰明的和最有水平的，但我肯定是最勤奮的。以這次獲獎(jiǎng)項(xiàng)目的研究過(guò)程為例：傳染性法氏囊病基因工程疫苗的研究，1999年立項(xiàng)，2000年經(jīng)費(fèi)到賬后進(jìn)行理論研究和前期準(zhǔn)備。從2001年到項(xiàng)目通過(guò)鑒定這4年時(shí)間里，我的工作時(shí)間是每年360天。沒(méi)有節(jié)假日和星期天，每年春節(jié)后一般都是初二或初三去實(shí)驗(yàn)室工作。經(jīng)常是我到實(shí)驗(yàn)室了，管門(mén)房的工人還沒(méi)有起來(lái)開(kāi)門(mén)。

第二，不要抱怨自己所在單位的條件不好，充分利用現(xiàn)有試驗(yàn)設(shè)備和試驗(yàn)條件你一定會(huì)獲得成功。將普通設(shè)備用好也是一種創(chuàng)新。

我們有很多新教師和老教師習(xí)慣報(bào)怨單位沒(méi)有好的研究條件，其實(shí)好多人都沒(méi)有真正了解自己試驗(yàn)室有些什么東西，能做什么。其實(shí)這是一種缺乏進(jìn)取心、自我解壓的心理表現(xiàn)。其實(shí)在我的研究早期是沒(méi)有什么試驗(yàn)設(shè)備的。當(dāng)時(shí)有不少同事挖苦我要在湖北農(nóng)學(xué)院研究基因工程疫苗，認(rèn)為這是不可能的事。我們做基因工程疫苗抗原蛋白的表達(dá)必須做western blot，而我們實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有轉(zhuǎn)膜電泳槽，我就根據(jù)在武漢大學(xué)用過(guò)的儀器構(gòu)造和原理，拆下報(bào)廢電泳槽上的鉑金絲自己制作了一個(gè)轉(zhuǎn)膜電泳槽，用我自制的設(shè)備做的實(shí)驗(yàn)非常成功。用這個(gè)設(shè)備做的western blot 照片在2篇SCI論文（3.0以上）中應(yīng)用。

在青島易邦公司做工藝時(shí)，要增加一步去內(nèi)毒素的工藝，公司的員工要去買(mǎi)冷凍離心機(jī)，每臺(tái)需大約45萬(wàn)元。我?guī)退麄冊(cè)O(shè)計(jì)了一個(gè)可放置5個(gè)5升分液漏斗可移動(dòng)操作臺(tái)，可以在冷庫(kù)和操作間移動(dòng)。每個(gè)臺(tái)架加分液漏斗可相當(dāng)兩臺(tái)離心機(jī)。而每個(gè)臺(tái)架的造價(jià)不到1000元。易邦的老總感嘆道，現(xiàn)在年輕的研究人員只知道現(xiàn)代化的設(shè)備，對(duì)那些管用又便宜的玻璃儀器一無(wú)所知。像這樣的例子在我的科研實(shí)踐中還有不少。

第三，國(guó)家的需求社會(huì)的需求是科研選題的最重要標(biāo)準(zhǔn)。

上世紀(jì)末和本世紀(jì)初正是我國(guó)動(dòng)物疫苗生產(chǎn)由傳統(tǒng)疫苗向現(xiàn)代新型疫苗轉(zhuǎn)型的初期。人類(lèi)醫(yī)藥中乙型肝炎病毒基因工程亞單位疫苗成功研制和應(yīng)用，產(chǎn)生了巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。在獸醫(yī)中還沒(méi)有一個(gè)叫得響的產(chǎn)品，與我們前后同時(shí)進(jìn)入新藥申報(bào)的基因工程疫苗有：復(fù)旦大學(xué)的豬口蹄疫病毒基因工程亞單位疫苗，西南農(nóng)大的豬偽狂犬病基因缺失疫苗。這兩個(gè)疫苗因?yàn)槊庖咝Ч患褯](méi)有能推廣開(kāi)。其中復(fù)旦大學(xué)的疫苗轉(zhuǎn)讓給內(nèi)蒙古金宇集團(tuán)后基本沒(méi)有生產(chǎn)。從特定疫苗生產(chǎn)的專(zhuān)業(yè)角度更是急需的產(chǎn)品。我們的產(chǎn)品是在產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)型的關(guān)鍵時(shí)期推出的，是國(guó)家和社會(huì)急需的東西。2011年春天，我到荊門(mén)十里鋪去買(mǎi)雞做實(shí)驗(yàn)，我特地問(wèn)了一下養(yǎng)雞戶(hù)，你們免疫傳染性法氏囊病用什么疫苗，他們告訴我他們附近的養(yǎng)殖戶(hù)都用青島易邦的疫苗，效果非常好，免疫后基本上都可以不患法氏囊病。他們不知道我是該疫苗的發(fā)明者。聽(tīng)到這樣的評(píng)價(jià)我真正有了成就感。

第四，千萬(wàn)不要迷信文獻(xiàn)資料和專(zhuān)家權(quán)威。

從1990年起就有國(guó)外的論文報(bào)道用原核生物表達(dá)傳染性法氏囊病毒VP2蛋白做疫苗是行不通的。我們的研究真真切切的讓這種不可能變?yōu)榱丝赡?。在我們進(jìn)行新藥申報(bào)的過(guò)程中也曾有國(guó)內(nèi)的頂級(jí)專(zhuān)家提出質(zhì)疑，其理由就是兩個(gè)：一是國(guó)外權(quán)威雜志的論文和結(jié)論；二是他們自己做過(guò)沒(méi)有成功。所以專(zhuān)家權(quán)威不可全信。

華中農(nóng)大的陳煥春院士知道我們這個(gè)產(chǎn)品后，對(duì)他們?cè)囼?yàn)室的博士們發(fā)出感慨道，榮老師在長(zhǎng)江大學(xué)做的產(chǎn)品賣(mài)到易邦去了（因?yàn)橐装罟驹趪?guó)內(nèi)是排第二的獸藥企業(yè)）。所以作為長(zhǎng)江大學(xué)人要有我們的自信。

第五，成功的最關(guān)鍵時(shí)刻是咬緊牙再堅(jiān)持一會(huì)。

在該項(xiàng)目的研究中有兩次令人崩潰的時(shí)候。第一次是獲取目的基因，由于病理樣本中病毒數(shù)太少，加上當(dāng)時(shí)缺乏經(jīng)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)基本上是按書(shū)本來(lái)做。當(dāng)時(shí)相同的工作反復(fù)做了10個(gè)月。反轉(zhuǎn)錄，PCR，電泳，轉(zhuǎn)化，鑒定。每星期重復(fù)2-3次，最后終于取得了正確的基因。第二次是在青島易邦做工藝時(shí)，遇上了副反應(yīng)的問(wèn)題。這種問(wèn)題在試驗(yàn)室比較不明顯，在免疫的局部出現(xiàn)核桃大小的結(jié)蒂組織增生。那時(shí)是三個(gè)星期一個(gè)輪回，制苗，免疫，剖檢。反復(fù)改進(jìn)工藝和疫苗配比，經(jīng)過(guò)11個(gè)月完成了工業(yè)生產(chǎn)工藝流程。

說(shuō)完這些科研體會(huì)，我還想說(shuō)一下感恩，做人必須常懷感恩之心。說(shuō)實(shí)話(huà)，我真心感謝原農(nóng)學(xué)院和現(xiàn)在的長(zhǎng)江大學(xué)，為我提供了展示自己的舞臺(tái)。

感謝原湖北農(nóng)學(xué)院為我提供了當(dāng)時(shí)院內(nèi)最高的資助，8萬(wàn)元。正是湖北省科技廳的2萬(wàn)元加上湖北農(nóng)學(xué)院的8萬(wàn)元使我能夠完成該項(xiàng)目。我現(xiàn)在是不差錢(qián)，但在當(dāng)時(shí)這點(diǎn)錢(qián)是甘露。

感謝易邦公司的老總，杜元釗總經(jīng)理，在兩次巨額賠款后仍然對(duì)該產(chǎn)品充滿(mǎn)信心。2次賠了300多萬(wàn)。

感謝生科院給了我相對(duì)比較寬松的環(huán)境和條件。

感謝動(dòng)科院在我離開(kāi)學(xué)院后還能為我敞開(kāi)試驗(yàn)室。

感謝朱業(yè)宏書(shū)記親臨看望，使我這個(gè)一線(xiàn)的科研人員深切地體會(huì)到了組織的關(guān)懷和溫暖。

第5篇：基因工程疫苗范文

摘要：近年來(lái)，基因工程技術(shù)廣泛應(yīng)用于馬鈴薯抗病、抗菌、抗蟲(chóng)、抗除草劑、品質(zhì)改良及生物反應(yīng)器的研究中并取得了一定進(jìn)展。本文綜述了近20年國(guó)內(nèi)外基因工程在馬鈴薯育種上的應(yīng)用現(xiàn)狀，為馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的大力發(fā)展提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：基因工程；馬鈴薯育種；應(yīng)用現(xiàn)狀

中圖分類(lèi)號(hào)：S532.035.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2013）06-0130-04

馬鈴薯（Solanum tuberosum）是世界上廣為種植的糧、菜、飼兼用型作物，也是我國(guó)干旱和半干旱地區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)作物，可以加工制成各種產(chǎn)品[1]，其栽培面積僅次于小麥、水稻和玉米。全世界每年的總產(chǎn)量將近3×108 t，中國(guó)占了其中的18%，居世界第一位[2]。馬鈴薯以其獨(dú)特的經(jīng)濟(jì)價(jià)值受到了國(guó)內(nèi)外的廣泛關(guān)注，尤其近年來(lái)隨著生物能源的興起與開(kāi)發(fā)，馬鈴薯也被視為一種新型的能源材料，從而掀起了對(duì)馬鈴薯生物學(xué)性狀及應(yīng)用的研究熱潮[3]。

馬鈴薯為同源四倍體作物，其遺傳分離復(fù)雜、后代篩選繁瑣，用常規(guī)育種方法改良品種難度極大。盡管已培育出許多食用加工的優(yōu)良品種，但至今許多優(yōu)良栽培品種仍受到多種病蟲(chóng)害等的嚴(yán)重危害。近些年發(fā)展起來(lái)的植物基因工程技術(shù)，可以將各種來(lái)源的基因?qū)腭R鈴薯，使馬鈴薯基因工程取得了許多突破，顯示出誘人的前景。

1 馬鈴薯抗病基因工程

11 馬鈴薯抗病毒病基因工程

病毒病是馬鈴薯的主要病害之一，也是造成馬鈴薯退化的主要原因，嚴(yán)重危害著我國(guó)馬鈴薯的生產(chǎn)。隨著病毒檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)幾乎所有馬鈴薯品種都受到一種或幾種病毒的侵染[4]。目前已報(bào)道的侵染馬鈴薯的病毒有40余種[5]，國(guó)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的專(zhuān)門(mén)寄生于馬鈴薯的就有9種，即馬鈴薯X病毒（PVX）、馬鈴薯Y病毒（PVY）、馬鈴薯S病毒（PVS）、馬鈴薯A病毒（PVA）、馬鈴薯M病毒（PVM）以及馬鈴薯卷葉病毒（PLRV）[6]。其中馬鈴薯Y 病毒和馬鈴薯卷葉病毒是最主要的馬鈴薯病毒[7]。而且PVY+PVX或PVY+PLRV混合侵染帶來(lái)的損失遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于各病毒單獨(dú)侵染。

馬鈴薯抗病毒基因工程主要有病毒外殼蛋白（CP）基因的交叉保護(hù)作用，RNA和反義RNA介導(dǎo)的抗性，核酶、缺損的復(fù)制酶基因介導(dǎo)的抗性以及干擾運(yùn)動(dòng)蛋白等[8]。在以上技術(shù)中， 利用病毒外殼蛋白基因介導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性是目前馬鈴薯抗病毒基因工程的熱點(diǎn)之一。近十多年來(lái)，應(yīng)用生物工程技術(shù)將病毒外殼蛋白（CP） 基因?qū)腭R鈴薯的研究工作已取得重要進(jìn)展[9]，有些學(xué)者鑒定了表達(dá)PVX+PVY雙價(jià)CP基因轉(zhuǎn)基因馬鈴薯的抗病性，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因馬鈴薯對(duì)PVX+PVY復(fù)合感染產(chǎn)生不同程度的抗性[10]。利用反義RNA技術(shù)，有些學(xué)者用非翻譯的序列轉(zhuǎn)化植株也能產(chǎn)生抗性，RNA與反義RNA轉(zhuǎn)化阻礙翻譯的進(jìn)行，導(dǎo)致基因產(chǎn)物減少[11]。馬鈴薯抗病毒基因工程的成果還有很多，隨著對(duì)病毒與植物相互作用機(jī)理的深入研究，抗病毒基因工程在育種上將會(huì)發(fā)揮更大的作用。

12 馬鈴薯抗真菌病基因工程

真菌性病害也是限制馬鈴薯產(chǎn)量和品質(zhì)的主要病害之一，馬鈴薯真菌病害種類(lèi)繁多，其中最主要的是晚疫病菌（Phytophthora infestans），往往造成馬鈴薯大幅度減產(chǎn)。近年來(lái)通過(guò)基因工程技術(shù)在馬鈴薯抗真菌病方面取得一定的進(jìn)展。在馬鈴薯抗真菌病基因工程育種中大量使用的主要有植物病程相關(guān)蛋白、水解酶——幾丁質(zhì)酶和β-1，3-葡聚糖酶、抗真菌蛋白（肽）、抑制病原菌毒性因子的蛋白等等。付道林等[12]將攜帶有Ⅰ型煙草β-1，3-葡聚糖酶基因和Ⅰ型菜豆幾丁質(zhì)酶基因的pBLGC質(zhì)粒導(dǎo)入津引8號(hào)馬鈴薯品種中，獲得了抗病轉(zhuǎn)基因品種。Ali等[13]將人工合成的4種陽(yáng)離子肽基因?qū)腭R鈴薯并對(duì)馬鈴薯病原真菌和細(xì)菌的抗菌活性進(jìn)行了測(cè)試，所獲得的轉(zhuǎn)基因植株對(duì)相應(yīng)病原菌的抗性都得到一定程度的增強(qiáng)。

13 馬鈴薯抗細(xì)菌病基因工程

近年來(lái)植物抗細(xì)菌病基因工程研究取得的進(jìn)展，主要表現(xiàn)在阻斷病原細(xì)菌的致病途徑，強(qiáng)化植物抗病反應(yīng)及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，植物防御基因的表達(dá)，利用非植物源抗菌蛋白和利用細(xì)胞凋亡反應(yīng)控制病害的發(fā)生等方面。Dong等[14]將克隆于芽孢桿菌的N-?；呓z氨酸內(nèi)酯（AHL）水解酶基因aiiA轉(zhuǎn)入煙草和馬鈴薯，轉(zhuǎn)基因煙草和馬鈴薯對(duì)軟腐病菌（Erwinia carotovora）的抗性顯著提高。賈士榮等[15]將人工合成的Cecropin B及Shiva A基因轉(zhuǎn)入我國(guó)7個(gè)馬鈴薯主栽品種中，經(jīng)溫室和田間接種試驗(yàn)鑒定，部分轉(zhuǎn)基因材料對(duì)青枯病的抗性比對(duì)照提高1～3級(jí)。

2 馬鈴薯抗蟲(chóng)基因工程

在馬鈴薯的整個(gè)生育期，常常遭受各種害蟲(chóng)的侵襲，如蚜蟲(chóng)、馬鈴薯塊莖夜蛾、蠐螬等，直接危害地上與地下部分，造成產(chǎn)量和品質(zhì)下降，甚至導(dǎo)致死亡。迄今為止，各國(guó)研究人員已經(jīng)利用基因工程技術(shù)分離得到了不同來(lái)源的抗蟲(chóng)基因，其中用于提高植物抗蟲(chóng)性的主要有兩類(lèi)：一類(lèi)是從細(xì)菌中分離出來(lái)的抗蟲(chóng)基因，如蘇云金芽孢桿菌毒蛋白基因（Bt基因）；另一類(lèi)是從植物中分離出來(lái)的抗蟲(chóng)基因，如蛋白酶抑制劑基因（PI基因）、淀粉酶抑制劑基因、外源凝集素基因等。其中，Bt基因和PI基因在農(nóng)業(yè)上應(yīng)用最廣[16]。Arpaia等[17]的研究結(jié)果表明，雌性科羅拉多甲蟲(chóng)取食了含有cry3B的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯后，生殖能力受到了嚴(yán)重?fù)p害，不能產(chǎn)生后代。Marchetti等[18]從大豆中分離得到了幾種蛋白酶抑制劑基因（KTi3、C-Ⅱand PⅠ-Ⅳ），并將其導(dǎo)入馬鈴薯中，經(jīng)檢測(cè)在表達(dá)足夠數(shù)量抑制劑的情況下，幼蟲(chóng)重量的增加降低50%。

3 馬鈴薯抗除草劑基因工程

通過(guò)化學(xué)方法控制雜草已成為現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中不可缺少的一部分，但除草劑在殺死雜草的同時(shí)不僅污染環(huán)境，有的還會(huì)對(duì)農(nóng)作物的生長(zhǎng)產(chǎn)生傷害。而通過(guò)基因工程技術(shù)將耐除草劑基因?qū)胱魑?，增加了?duì)除草劑的選擇性和安全性[19]。耐除草劑基因工程主要從兩個(gè)方面解決問(wèn)題，一是修飾除草劑作用的靶蛋白，使其對(duì)除草劑不敏感，或使其過(guò)量表達(dá)讓植物吸收除草劑以后仍能進(jìn)行正常代謝；二是引入酶或酶系統(tǒng)，在除草劑發(fā)生作用前降解或解毒。如比利時(shí)植物遺傳部門(mén)的研究人員把編碼乙酰CoA轉(zhuǎn)移酶的Bar基因?qū)腭R鈴薯，獲得耐除草劑的轉(zhuǎn)基因植株。

4 馬鈴薯抗逆基因工程

干旱、高溫、低溫、鹽脅迫等逆境條件影響馬鈴薯生長(zhǎng)，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致死亡。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，研究者從基因組成、表達(dá)調(diào)控及信號(hào)傳導(dǎo)等方面進(jìn)行深入研究，明確植物對(duì)逆境脅迫的耐（抗）性機(jī)理，將相關(guān)基因?qū)腭R鈴薯以改良脅迫抗性。例如，Goddijn等[20]成功地將大腸桿菌海藻糖合成酶基因復(fù)合體otsAB基因?qū)腭R鈴薯，明顯提高了轉(zhuǎn)基因植株的抗旱性。趙映琴[21]將AtNHX1基因轉(zhuǎn)入馬鈴薯株系中，在相同鹽濃度脅迫下，轉(zhuǎn)基因馬鈴薯的株高明顯高于對(duì)照，尤其是在高鹽條件下脅迫90 d時(shí)，大部分轉(zhuǎn)基因株系的株高均顯著高于對(duì)照。

5 馬鈴薯加工品質(zhì)改善基因工程

51 馬鈴薯淀粉品質(zhì)改良基因工程

在淀粉的生物合成過(guò)程中，影響淀粉品質(zhì)的關(guān)鍵酶是淀粉合成酶（SS）、淀粉分支酶（SBE）和腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（AGPase），它們共同作用影響淀粉顆粒的結(jié)構(gòu)和特性。利用基因工程手段改變這些酶在植物中的表達(dá)，從而獲得具有獨(dú)特性質(zhì)、新型的馬鈴薯淀粉用于食品加工或其它工業(yè)生產(chǎn)之中。宋波濤等[22]通過(guò)根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將CaMV35S驅(qū)動(dòng)的正/反義sAGP基因?qū)腭R鈴薯后，轉(zhuǎn)正義sAGP基因的淀粉含量增加5%～6%，而轉(zhuǎn)反義sAGP基因淀粉含量下降達(dá)27%。在馬鈴薯中，AGPase水平降低時(shí)，直鏈淀粉含量顯著降低，而支鏈淀粉含量升高[23]。

52 馬鈴薯塊莖抗褐變基因工程

多酚氧化酶（Polyphenol oxidase，PPO）是產(chǎn)生褐變現(xiàn)象的主要原因。許多研究者運(yùn)用反義RNA技術(shù)特異抑制PPO的表達(dá)，從而達(dá)到抑制馬鈴薯褐化的目的。如Bachem等[24]將反義多酚氧化酶基因?qū)腭R鈴薯，能夠有效增強(qiáng)塊莖的抗褐變能力。

53 馬鈴薯塊莖抗低溫糖化基因工程

據(jù)資料介紹，塊莖在低溫貯藏條件下的低溫糖化給馬鈴薯加工產(chǎn)業(yè)帶來(lái)的損失高達(dá)數(shù)千萬(wàn)美元。于是，人們借助基因工程技術(shù)來(lái)解決這一難題。張金文[25]克隆了馬鈴薯栽培品種“甘農(nóng)薯1號(hào)”的酸性轉(zhuǎn)化酶基因，構(gòu)建了反義植物表達(dá)載體，獲得了轉(zhuǎn)基因植株。除了運(yùn)用反義RNA技術(shù)外，還可通過(guò)表達(dá)自身或外源的酸性轉(zhuǎn)化酶抑制因子來(lái)改善馬鈴薯低溫糖化。如超量表達(dá)煙草酸性轉(zhuǎn)化酶抑制子的馬鈴薯在4℃低溫貯藏后塊莖中的還原糖含量與液泡酸性轉(zhuǎn)化酶的活性都顯著降低，兩者呈正相關(guān)[26]。張瓊[27]用低溫誘導(dǎo)塊莖特異表達(dá)融合啟動(dòng)子pCL與pCLMlb的反義轉(zhuǎn)基因株系，結(jié)果酸性轉(zhuǎn)化酶的活性顯著降低，進(jìn)而引起還原糖含量不同程度的下降。

6 馬鈴薯生物反應(yīng)器基因工程

馬鈴薯作為生物反應(yīng)器的基因工程主要有：利用馬鈴薯生產(chǎn)疫苗、植物抗體、蛋白質(zhì)多肽藥物、糖類(lèi)物質(zhì)、工業(yè)可降解塑料的原料及可降解生物塑料等。Zhang等[28]利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)將人免疫缺陷Ⅰ型病毒 HIV-1p24蛋白插入馬鈴薯基因組，葉片中的表達(dá)量為35 mg/g。李晉濤等[29]報(bào)道，將人源輪狀病毒（RV）轉(zhuǎn)入馬鈴薯，并用小鼠口服該轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行免疫應(yīng)答研究，結(jié)果顯示，人源輪狀病毒轉(zhuǎn)基因植物疫苗聯(lián)合黏膜佐劑免疫動(dòng)物可誘導(dǎo)特異的系統(tǒng)與黏膜免疫應(yīng)答，且黏膜免疫強(qiáng)度略高于系統(tǒng)免疫。謝安勇等[30]利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)，從真養(yǎng)產(chǎn)堿桿菌H16染色體DNA中擴(kuò)增并克隆了調(diào)控PHB生物合成的phbB和phbC基因；雍偉東等[31]將多聚β-羥基丁酸酯（PHB）合成過(guò)程中所需的2種酶phbB和phbC的編碼基因轉(zhuǎn)入到馬鈴薯體內(nèi)，并采用特定的啟動(dòng)子使這些基因的編碼蛋白最后定位在細(xì)胞的葉綠體中，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因馬鈴薯葉片中PHB干物質(zhì)的含量可以達(dá)到0025～1800 g/kg，并且這些外源基因的表達(dá)并不影響馬鈴薯的生長(zhǎng)和育性。

7 前景展望

馬鈴薯基因工程育種在短短十幾年中已取得了豐碩成果，其在抗蟲(chóng)、抗病、抗逆等方面具有傳統(tǒng)育種和生產(chǎn)無(wú)法比擬的優(yōu)越性，提高了對(duì)病蟲(chóng)的抵抗和防御能力，增強(qiáng)了對(duì)干旱高鹽的適應(yīng)性，并能減少化學(xué)農(nóng)藥的使用量及保護(hù)生態(tài)環(huán)境，為培育馬鈴薯優(yōu)良品系開(kāi)辟了一條嶄新的道路。同時(shí)，作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)人們所需要的大量疫苗和藥物，可供人類(lèi)和家畜直接使用，便捷可靠。但是，目前馬鈴薯基因工程還受許多因素的制約，如轉(zhuǎn)基因效率低和轉(zhuǎn)基因生物安全性等問(wèn)題。為了更好地發(fā)展和應(yīng)用這項(xiàng)技術(shù)，在今后的研究中應(yīng)著重解決以下問(wèn)題：首先繼續(xù)發(fā)現(xiàn)新型、高效基因，并研究其機(jī)制；其次應(yīng)加強(qiáng)研究目的基因在轉(zhuǎn)基因植株后代中的遺傳、表達(dá)穩(wěn)定性；且深入研究基因抗性的機(jī)制并制定確實(shí)有效的反抗性措施。盡管還存在許多有待進(jìn)一步解決的問(wèn)題，但應(yīng)該看到，馬鈴薯基因工程的發(fā)展速度是非常快的，其應(yīng)用前景十分廣闊。參 考 文 獻(xiàn)：

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第6篇：基因工程疫苗范文

家長(zhǎng)們都知道孩子進(jìn)行疫苗接種非常重要，可是疫苗有哪些種類(lèi)？什么是減毒活疫苗？計(jì)劃外的疫苗要不要接種？如何正確認(rèn)識(shí)接種后的疫苗反應(yīng)？疫苗接種有什么禁忌癥？對(duì)此，我們要科普一下。

兒童疫苗接種程序中包含減毒活疫苗、滅活疫苗和基因工程疫苗。減毒活疫苗，顧名思義是將某種病原（細(xì)菌或病毒）傳代培養(yǎng)，將其致病毒力減到很低的程度，只刺激免疫反應(yīng)，不會(huì)使人發(fā)?。粶缁钜呙缇褪怯眉兹┑葘⒉≡瓪⑺?，但是仍保留其抗原性，但絕對(duì)沒(méi)有致病力；基因工程疫苗是利用基因工程技術(shù)提取病原體的抗原成分制成疫苗，根本不是病原本身。

那么具體的疫苗有哪些種？接種程序中減毒活疫苗有：卡介苗、口服脊髓灰質(zhì)炎疫苗、乙型腦炎疫苗、麻風(fēng)腮疫苗、水痘疫苗、流行性腦膜炎球菌疫苗、輪狀病毒疫苗。滅活疫苗有：百白破疫苗、B型流感嗜血桿菌疫苗（HIB）、注射脊髓灰質(zhì)炎疫苗、肺炎球菌疫苗?；蚬こ桃呙缬幸腋我呙绾图赘我呙?。計(jì)劃外疫苗要不要接種呢？社區(qū)疫苗接種中心能夠提供的自費(fèi)疫苗有很多種，要根據(jù)兒童自身健康情況加以選擇。但是在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家和一些國(guó)際醫(yī)療中心，已經(jīng)普遍開(kāi)始建議家長(zhǎng)為寶寶接種HIB疫苗、肺炎球菌疫苗、輪狀病毒疫苗、水痘疫苗等。

HIB疫苗是小兒肺炎、小兒腦膜炎的克星，該疫苗已被世界上20多個(gè)國(guó)家列入常規(guī)計(jì)劃免疫接種范圍。由于中國(guó)國(guó)內(nèi)普遍存在抗生素濫用的現(xiàn)象，使得細(xì)菌對(duì)抗生素的耐藥性上升，感染后比較難診治。所以，5歲以下，尤其是兩個(gè)月到兩歲的嬰幼兒應(yīng)在醫(yī)生監(jiān)督下接種。

常見(jiàn)的接種反應(yīng)有發(fā)熱，局部注射部位紅腫熱痛，皮疹，精神不振，嗜睡，食欲減退，嘔吐，腹瀉等。上述不良反應(yīng)常發(fā)生在疫苗接種后頭兩天，持續(xù)1～2天后發(fā)熱及其他癥狀將相繼消失。

值得注意的是，社區(qū)接種的脊髓灰質(zhì)炎疫苗，也就是我們常說(shuō)的糖丸，是減毒活疫苗。有的家長(zhǎng)在孩子服用糖丸后喂溫?zé)崴?，?huì)影響體內(nèi)抗體的產(chǎn)生，極個(gè)別情況下還會(huì)出現(xiàn)口服糖丸后感染小兒麻痹癥的病例。國(guó)際上推薦使用的是滅活的脊髓灰質(zhì)炎疫苗，是注射劑型，接種后絕對(duì)不會(huì)感染小兒麻痹癥，安全性更高。

正在發(fā)熱，特別是高熱或伴有明顯的全身不適的急性癥狀時(shí)，應(yīng)暫緩接種疫苗，以免接種后加劇發(fā)熱性疾病。帶兒童接種疫苗前，家長(zhǎng)需要觀(guān)察兒童的健康狀況。

如果兒童身體不適或與平時(shí)表現(xiàn)異常，如突然食欲不佳、咳嗽、異常的哭鬧，家長(zhǎng)應(yīng)推遲疫苗接種時(shí)間。除了接種疫苗前須先就診，家長(zhǎng)還須主動(dòng)與護(hù)士一同檢查疫苗的包裝是否完整，核對(duì)疫苗的名稱(chēng)、生產(chǎn)廠(chǎng)家、生產(chǎn)日期、保質(zhì)期，在確保以上信息正確無(wú)誤的情況下再接種疫苗，保障孩子的安全。

器官有性別

最新的研究表明，我們的身體除了性器官，其他的器官也存在著性別的差異。我們的器官可能是“男性”或“女性”的，這可能意味著女性和男性在疾病治療的過(guò)程中需要區(qū)別對(duì)待。這個(gè)研究還可以解釋為什么有些癌癥多見(jiàn)于女性，而其他則多見(jiàn)于男性。這項(xiàng)研究發(fā)表在《Nature》雜志上，由英國(guó)倫敦國(guó)王學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)中心（CSC）的科學(xué)家在果蠅中進(jìn)行研究。

CSC團(tuán)隊(duì)檢查了果蠅腸道干細(xì)胞。他們使用的遺傳學(xué)工具，使他們能夠打開(kāi)或者關(guān)閉這些細(xì)胞中的某些基因。這允許他們改造這些干細(xì)胞變得更“雌性化”或者更“雄性化”。然后他們?cè)噲D擴(kuò)增這些細(xì)胞。他們發(fā)現(xiàn)，“雌性化”的細(xì)胞能更好地增殖。

這種增強(qiáng)的能力似乎允許雌蠅在繁殖期間腸道的增長(zhǎng)。先前的研究已經(jīng)表明，后，雌蠅腸道尺寸重新調(diào)整，和改變代謝來(lái)維持再生產(chǎn)。在目前的研究中，研究小組發(fā)現(xiàn)，“雌性化”的腸道干細(xì)胞的影響是可逆的。取出雌果蠅腸道干細(xì)胞并將其“雄性化”改造，三周后發(fā)現(xiàn)，這些細(xì)胞出現(xiàn)“雄性化”的傾向，細(xì)胞會(huì)變小。

該小組還發(fā)現(xiàn)，雌性腸道更容易出現(xiàn)腫瘤。他們對(duì)此的解釋是，因?yàn)樵诖菩灾心c道需要在繁殖期有一定的可塑性，這也導(dǎo)致了其更容易遭受癌細(xì)胞侵襲。據(jù)了解，脊椎動(dòng)物的性腺或性器官保留相當(dāng)?shù)目伤苄裕撼赡曷殉埠偷募?xì)胞在小鼠體內(nèi)可以轉(zhuǎn)分化為其相反性別的細(xì)胞，而只需要單一的基因變化。所以性腺細(xì)胞必須在胚胎出生后不斷強(qiáng)化自己的性別特征。

這是第一次證明了性腺外成年細(xì)胞被證明有著性別可塑性。在這個(gè)研究過(guò)程中，研究小組發(fā)現(xiàn)這種性別轉(zhuǎn)換背后潛在的重要的新機(jī)制，他們認(rèn)為人體內(nèi)也有著更多的器官存在著性別差異。

進(jìn)一步的研究需要將果蠅中的研究成果轉(zhuǎn)化為人類(lèi)的研究。如果干細(xì)胞持有這種內(nèi)在的具有兩性發(fā)育的潛能，這表明了大多數(shù)器官或者組織都會(huì)有性別的“標(biāo)記”，即存在性別差異，因此未來(lái)的治療可能要針對(duì)性別給出不同的解決方案。

石墨烯電極有助修復(fù)感知功能

英國(guó)劍橋大學(xué)的一項(xiàng)研究成果顯示，研究人員成功將石墨烯電極植入小鼠腦部，并直接與神經(jīng)元連接，這項(xiàng)技術(shù)未來(lái)可用于修復(fù)截肢、癱瘓甚至帕金森氏癥患者的感知功能，協(xié)助他們更好地康復(fù)。

石墨烯是從石墨材料中剝離出來(lái)、由碳原子組成的二維晶體，厚度與一層原子差不多。這種材料無(wú)論是彈性、強(qiáng)韌度以及拉伸性能方面都遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于鋼材等材料，被譽(yù)為“新材料之王”。

劍橋大學(xué)研究人員與意大利和西班牙的同行利用小鼠腦部細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，利用石墨烯材料制造的電極能安全地與腦部神經(jīng)元連接，且連接后這些神經(jīng)元可正常傳遞電波信號(hào)，不會(huì)產(chǎn)生不良反應(yīng)。

這些與神經(jīng)元直接連接的電極能把腦電波信號(hào)傳遞給外界，讓外界更清晰地了解腦部活動(dòng)并修復(fù)感知功能。例如，機(jī)械臂如果能接收腦電波信號(hào)，就會(huì)按照截肢患者的想法去抓取物體；通過(guò)對(duì)這些腦電波信號(hào)的干預(yù)也會(huì)有助于帕金森氏癥患者更好地控制病情。但此前使用其他材料制作的電極效果并不理想，信號(hào)傳遞很不穩(wěn)定。

據(jù)介紹，石墨烯的導(dǎo)電性能非常優(yōu)異，測(cè)試中這一材料制作的電極實(shí)現(xiàn)了穩(wěn)定的腦電波信號(hào)傳遞，神經(jīng)元的一些特性也沒(méi)有因?yàn)榕c電極連接發(fā)生改變。

第7篇：基因工程疫苗范文

1葉綠體基因工程概述

1.1葉綠體簡(jiǎn)介

葉綠體是植物進(jìn)行光合作用的重要器官,是一種半自主型的細(xì)胞器,能夠進(jìn)行自我復(fù)制,含有雙鏈環(huán)狀DNA。葉綠體DNA分子一般長(zhǎng)120~160kb。葉綠體DNA有IRA和IRB2個(gè)反向重復(fù)序列(分別位于A鏈和B鏈),兩者基因大小完全相同,只是方向相反,它們之間有1個(gè)大的單拷貝區(qū)(大小約80kb)和1個(gè)小的單拷貝區(qū)(大小約20kb)。

1.2葉綠體基因組轉(zhuǎn)化優(yōu)點(diǎn)

葉綠體基因具有分子量小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、便于遺傳的特點(diǎn),故相對(duì)于傳統(tǒng)的細(xì)胞核遺傳更能高效表達(dá)目的基因,這是因?yàn)槿~綠體基因本身?yè)碛芯薮蟮目截悢?shù)。葉綠體基因可實(shí)現(xiàn)外源基因的定點(diǎn)整合,避免位置效應(yīng)和基因沉默;遺傳表達(dá)具有原核性;安全性好,葉綠體屬于母系遺傳,后代材料穩(wěn)定;目的基因產(chǎn)物對(duì)植物的影響小。利用葉綠體基因轉(zhuǎn)化的這些優(yōu)點(diǎn),可以加快育種速度和效率,節(jié)約育種時(shí)間。

1.3葉綠體轉(zhuǎn)化的主要過(guò)程

葉綠體轉(zhuǎn)化過(guò)程通常分4步:一是轉(zhuǎn)化載體攜帶外源目的基因通過(guò)基因槍法或其他轉(zhuǎn)化體系導(dǎo)入葉綠體;二是將外源表達(dá)框架整合到葉綠體的基因組里;三是篩選具有轉(zhuǎn)化的葉綠體細(xì)胞;四是繼代繁殖得到穩(wěn)定的葉綠體轉(zhuǎn)化植物。

1.4葉綠體轉(zhuǎn)化的主要方法

依據(jù)葉綠體轉(zhuǎn)化的主要過(guò)程,生物學(xué)家相應(yīng)地研究若干種葉綠體基因轉(zhuǎn)化的方法,其中常用的葉綠體轉(zhuǎn)化方法:一是微彈轟擊法。將鎢粉包裹構(gòu)建完整的質(zhì)粒載體,用基因槍轟擊植物的各種組織、器官,然后對(duì)重組葉綠體進(jìn)行連續(xù)篩選,不斷提高同質(zhì)化水平,最后獲得所需的轉(zhuǎn)基因植株。二是農(nóng)桿菌T-DNA介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法。將外源目的基因、選擇標(biāo)記基因等構(gòu)建到農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上,然后通過(guò)與植物組織或器官共培養(yǎng),最后把所需外源基因轉(zhuǎn)化到葉綠體并獲得表達(dá)。三是PEG處理法。只需將構(gòu)建好的質(zhì)粒(含外源基因、標(biāo)記基因、同源片斷、啟動(dòng)子、終止子等)在一定的PEG濃度下與植物原生質(zhì)體共培養(yǎng)。

2葉綠體基因工程的應(yīng)用

2.1提高植物光合效率

植物的光合效率非常有限,太陽(yáng)能的很小一部分可以轉(zhuǎn)化為植物所需要的能量,從而轉(zhuǎn)變?yōu)槿祟?lèi)需要的產(chǎn)品。植物光合效率取決于Rubisco酶的豐富度。Rubisco酶一方面可以制造可溶性蛋白,另一方面也可以限制CO2合成。人們可以通過(guò)2種直接的方法提高光合速率:一是加速酶催化的循環(huán)過(guò)程;二是提高酶的特性,減少光呼吸浪費(fèi)的能量。很多科學(xué)家正試圖通過(guò)提高Rubisco酶來(lái)提高植物的光合效率,而其中擬南芥和水稻的定點(diǎn)整合試驗(yàn)取得了重大突破,證明葉綠體基因工程是生產(chǎn)高光合效率作物植物的最有價(jià)值的方法。

2.2合成有機(jī)物質(zhì)

由于葉綠體型轉(zhuǎn)基因植物具有環(huán)境安全性好、底物豐富、產(chǎn)物區(qū)域化等優(yōu)點(diǎn),已被越來(lái)越多的人關(guān)注,并成為工業(yè)化生產(chǎn)特定有機(jī)物質(zhì)的可靠場(chǎng)所。例如,有科學(xué)家已發(fā)明了用葉綠體基因工程表達(dá)聚3-羥基丁酸酯合成相關(guān)基因的方法。聚3-羥基丁酸酯及其他類(lèi)型的聚3-羥基鏈烷酸酯同屬于聚酯類(lèi)物質(zhì),是自然界中多種細(xì)菌的碳源及能源儲(chǔ)備物。具有生物可降解性,如取代化學(xué)合成塑料將能從源頭解決塑料廢棄物引起的“白色污染”。其通過(guò)構(gòu)建了含phbB、phM、phbC和aadA基因表達(dá)盒的葉綠體整合及表達(dá)載體,通過(guò)基因槍轟擊法轉(zhuǎn)化煙草。Northem點(diǎn)雜交、RT-PCR分析結(jié)果表明,葉綠體型轉(zhuǎn)基因植株中目的基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)明顯高于核轉(zhuǎn)化植株中相應(yīng)基因。

2.3生產(chǎn)疫苗

人類(lèi)治療用蛋白質(zhì)可以在葉綠體中實(shí)現(xiàn)表達(dá),表達(dá)效率取決于外源基因的整合位點(diǎn),增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄和翻譯的調(diào)控元件以及外源蛋白的穩(wěn)定性等。人類(lèi)已經(jīng)在用葉綠體基因生產(chǎn)疫苗方面開(kāi)展了卓有成效的工作。例如,范國(guó)昌等將甲型肝炎病毒VP3P1區(qū)和丙型肝炎病毒C區(qū)融合,并導(dǎo)入到衣藻葉綠體基因組中,融合蛋白得到高效表達(dá),且具有雙抗原活性。而霍亂病毒蛋白B(CTB)抗原CTB已經(jīng)在葉綠體中轉(zhuǎn)化成功,預(yù)示著轉(zhuǎn)基因植物疫苗的可商業(yè)化前景。Tregoning等將TetC基因在煙草葉綠體基因組進(jìn)行表達(dá),為了增加mRNA的穩(wěn)定性及在煙草葉片內(nèi)表達(dá)的可行性,他們將基因進(jìn)行了密碼子優(yōu)化,分別表達(dá)了未經(jīng)改造的富含AT(72.3%AT)和人工合成的富含GC(52.5%AT)的基因,TetC-AT和TetC-GC的表達(dá)量分別為總可溶蛋白的25%和10%。

2.4在植物抗性方面的研究

在抗蟲(chóng)性方面,Kota和Cosa分別于1999年、2001年將BTCryZAaZ基因轉(zhuǎn)入煙草葉綠體,前者可100%殺死4000多倍抗性的抗性蟲(chóng),后者報(bào)道BT表達(dá)量達(dá)46.1%。在抗逆性方面,人們通過(guò)編碼SOD、APx等酶的基因已經(jīng)轉(zhuǎn)入到煙草、苜蓿、馬鈴薯、棉花的葉綠體中,提高了植物的耐氧化能力,從而提高了植物對(duì)環(huán)境脅迫的耐受能力。

2.5葉綠體基因組在系統(tǒng)發(fā)育學(xué)上的應(yīng)用

葉綠體在系統(tǒng)發(fā)育學(xué)上的優(yōu)點(diǎn):一是葉綠體基因組是僅次于核基因組的第二大基因組,為比較研究提供了一個(gè)較大的數(shù)據(jù)基礎(chǔ);二是葉綠體DNA的核酸置換率適中,在應(yīng)用上很有價(jià)值。然而,用葉綠體DNA研究系統(tǒng)發(fā)育也存在著明顯的不足:一是葉綠體基因組是母性遺傳的,因此并不能單靠葉綠體基因組來(lái)解釋居群間的雜交現(xiàn)象;二是雖然有越來(lái)越多的葉綠體DNA被用作分子標(biāo)記來(lái)研究類(lèi)群間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,但只有將這些分子片段提供的信息與其他的分子片段信息、傳統(tǒng)的形態(tài)及生理特征結(jié)合起來(lái)獲得更多的信息,才能更接近系統(tǒng)發(fā)育的本來(lái)面目。

2.6葉綠體基因在消除環(huán)境憂(yōu)慮問(wèn)題上的前景

當(dāng)今最為普遍的問(wèn)題就是外源基因從轉(zhuǎn)基因作物到雜草的逃逸,這一逃逸主要是通過(guò)花粉的擴(kuò)散,產(chǎn)生超級(jí)雜草或產(chǎn)生和其他作物之間的基因污染,對(duì)環(huán)境極為不利。葉綠體基因工程產(chǎn)生的基因逃逸現(xiàn)象的風(fēng)險(xiǎn)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于核轉(zhuǎn)化作物,因?yàn)榇蠖鄶?shù)作物中的質(zhì)體DNA都是母系遺傳,這樣就可以避免作物和作物、作物和雜草之間的雜交,消除人們對(duì)基因污染的憂(yōu)慮。

3葉綠體基因工程存在的問(wèn)題

3.1葉綠體基因轉(zhuǎn)化在雜合體上的穩(wěn)定性問(wèn)題

由于高等植物的每個(gè)細(xì)胞中有10~100個(gè)葉綠體,每個(gè)葉綠體內(nèi)有10~100個(gè)葉綠體基因組拷貝,因此轉(zhuǎn)化的葉綠體和未轉(zhuǎn)化的野生型葉綠體同時(shí)存在于轉(zhuǎn)基因植株中,造成這種雜合體在遺傳上是不穩(wěn)定的。在轉(zhuǎn)化外源基因之前,目前可采用降低葉綠體拷貝數(shù)、高壓篩選和選用致死突變體作為外源基因的受體等方法使轉(zhuǎn)基因植株易于同質(zhì)化。

3.2植物的種類(lèi)有待擴(kuò)展

可能是由于大多數(shù)植物的葉綠體基因組序列不清楚,因此無(wú)法確定用于載體構(gòu)建的同源重組片段和外源基因的插入位點(diǎn)。目前,已成功轉(zhuǎn)化的植物種類(lèi)很少,只有番茄和煙草通過(guò)有性生殖使外源基因獲得穩(wěn)定遺傳,而番茄卻是唯一能有高的外源蛋白積累的可食用果實(shí)的植物。

第8篇：基因工程疫苗范文

[中圖分類(lèi)號(hào)]R-331 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B [文章編號(hào)]1673-7210（2008）05（c）-118-03

酶聯(lián)免疫吸咐試驗(yàn)（ELISA）具有靈敏度高、特異性好的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于各種傳染性疾病的篩查，如肝炎、HIV，也可應(yīng)用優(yōu)生優(yōu)育等。優(yōu)質(zhì)的試劑、良好的儀器和正確的操作是保證ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠的必要條件。試驗(yàn)中若不做好相關(guān)控制，易出現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽(yáng)性等現(xiàn)象。尤其是花板現(xiàn)象（空白、陰性、陽(yáng)性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常，而標(biāo)本孔的OD值卻明顯偏高）是各級(jí)臨床實(shí)驗(yàn)室常遇到的問(wèn)題?，F(xiàn)將ELISA實(shí)驗(yàn)操作中的影響因素總結(jié)如下：

1標(biāo)本因素

以辣根過(guò)氧化物酶（HRP）為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過(guò)氧化物酶樣活性，催化底物顯色造成假陽(yáng)性；混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈；如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)；標(biāo)本凝固不全，在臨床試驗(yàn)中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間而快速檢測(cè)，常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結(jié)果；采血試管洗滌不徹底、反復(fù)使用易交叉污染；塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。

因此血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)，禁用嚴(yán)重溶血的標(biāo)本。一般說(shuō)來(lái)，在5 d內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于2～8℃，標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)易導(dǎo)致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深。超過(guò)1周測(cè)定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾，澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存做多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存；最好使用一次性玻璃試管或真空采血管；并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值，可能與高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷，能吸附酶標(biāo)記物，不易洗脫有關(guān)；EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過(guò)氧化物酶活性；血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠或一次性真空促凝采血管。

2試劑因素

ELISA診斷試劑經(jīng)歷了從合成肽向基因工程抗原的過(guò)渡。由于歷史的原因，人們往往以反應(yīng)本底的好壞來(lái)衡量ELISA反應(yīng)試劑盒。因此，有些廠(chǎng)家為了保持較好的本底而采用了單片段基因工程抗原及合成肽包被，該類(lèi)試劑盒的流行病學(xué)敏感度不夠，穩(wěn)定性也成問(wèn)題。也有廠(chǎng)家堅(jiān)持試劑盒高的流行病學(xué)敏感度，科學(xué)地對(duì)待反應(yīng)結(jié)果?；蚬こ炭乖^合成肽抗原有無(wú)抗原決定簇的肽片段；第二代產(chǎn)品包被的抗原既有基因工作抗原又有合成肽，只是當(dāng)時(shí)的基因工程抗原不全，僅包括了HCV的核心區(qū)片段；第三代產(chǎn)品基本上采用了基因工程抗原，而且這些抗原包括更多、更穩(wěn)定、純度更高的HCV特異性抗菌素原。第三代試劑的敏感度大大提高了?；蚬こ炭乖c合成肽抗原的區(qū)別如下：

基因工程抗原是抗菌素原基因在質(zhì)粒載體中原核或真核表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原，多以大腸桿菌或酵母為表達(dá)系統(tǒng)。該類(lèi)抗原與合成肽相比具有以下特點(diǎn)。①分子量大。合成肽采用化學(xué)方法制備，由于工藝的局限，合成數(shù)量有限，只能達(dá)到數(shù)百個(gè)氨基酸；而利用基因工程制備的抗菌素原，分子量更大。②穩(wěn)定性好。包被抗原的穩(wěn)定性決定試劑盒的有效期，早期以合成肽為包裝抗原的試劑盒有效期只有3～4個(gè)月，改作基因工程抗原后有效期大大延長(zhǎng)了。③基因工程抗原將特異性抗原決定簇基因融合表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物包含更多的抗原決定簇，可提高試劑盒的靈敏度，提高檢出率。④純化難度大?；蚬こ炭乖募兓夹g(shù)難度較大。合成多肽抗原是根據(jù)蛋白質(zhì)抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。合成肽抗原有以下特點(diǎn)：分子量太??；一般只含有一個(gè)抗原決定簇；純度高；穩(wěn)定性差。

國(guó)內(nèi)酶聯(lián)免疫試劑廠(chǎng)家較多；不同廠(chǎng)家出產(chǎn)的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別，資料顯示，不同廠(chǎng)家試劑的特異性和敏感性分別為89.4%，99.3%，78%，89%，存在較大差異。有的廠(chǎng)家酶標(biāo)板孔間A值差大于15%；標(biāo)記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定比較差。使用劣質(zhì)的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽(yáng)性或假陰性。因此，選擇高質(zhì)量的試劑是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵之一。

選擇試劑時(shí)應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差異小、操作方便、省時(shí)的優(yōu)良檢測(cè)試劑，國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室每年對(duì)各廠(chǎng)家的試劑進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估并定期評(píng)估結(jié)果，可作為選擇試劑的主要依據(jù)； 要注意試劑的批號(hào)和出廠(chǎng)日期，雖然試劑的有效期多為1年。最好選擇剛出廠(chǎng)的試劑使用；不同廠(chǎng)家的試劑不能混用。

不同方法學(xué)的檢測(cè)試劑會(huì)使乙肝兩對(duì)半結(jié)果出現(xiàn)一些不同。例如：在實(shí)際工作中，常用ELISA檢測(cè)HBsAg結(jié)果為陰性，而電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)為陽(yáng)性。除方法學(xué)的靈敏度外，還存在使用單抗或多克隆抗體試劑的區(qū)別。單抗對(duì)變異抗原或亞型乙型乙肝標(biāo)志物檢測(cè)存在差異，建議試劑廠(chǎng)家對(duì)試劑的制備應(yīng)該考慮亞型及濃度的問(wèn)題。

3操作技術(shù)

操作過(guò)程的控制：①?lài)?yán)格按照試劑說(shuō)明操作。操作前將試劑在室溫下平衡30～60 min。②加樣后及時(shí)放入孵箱。標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?，難以清洗徹底。③封板溫育時(shí)，各孔一定要封嚴(yán)，防止陽(yáng)性標(biāo)本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“盎”灞的出現(xiàn)。④用洗板機(jī)洗板時(shí)，保證洗液注滿(mǎn)各孔，洗板針暢通，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過(guò)程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象。⑤合理安排檢測(cè)量，以免反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。⑥加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。⑦顯色劑盡量在臨用前配制，不使用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)的TM顯色劑不用。⑧加樣時(shí)保持顯色劑不外流；A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時(shí)要避免產(chǎn)生氣泡。⑨應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔，整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。以上的措施可以得到更準(zhǔn)確、更可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。加樣吸嘴的潔凈與否和吸量的準(zhǔn)確性直接影響檢測(cè)結(jié)果。由于吸嘴構(gòu)造特殊，導(dǎo)致清洗困難，加大了交叉污染的機(jī)會(huì)。建議用一次性吸嘴。加樣器也要經(jīng)常清洗，定期校準(zhǔn)。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出。

溫浴影響。在建立ELISA方法時(shí)做反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究。實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1～2 h，產(chǎn)物的生成可達(dá)頂峰。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔。反應(yīng)板孔、反應(yīng)板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)定控制，特別要注意邊緣位置。96孔酶標(biāo)板結(jié)構(gòu)特別，易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，抗原抗體結(jié)合及酶促反應(yīng)對(duì)溫度有嚴(yán)格要求，酶標(biāo)板周邊孔與內(nèi)部孔升降溫速率不同，造成周邊與內(nèi)部孔結(jié)果差異；干浴與水浴存在明顯的差異，盡可能使用水浴，并要求固相板放入水中，減少受熱不均，貼密封膜，防止污物浸入。

洗滌在ELISA過(guò)程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，但卻決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELISA應(yīng)是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固體相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時(shí)應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)?？梢哉f(shuō)在ELISA操作中，洗滌是最主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌，不得馬虎隨意。

洗滌液多為含非離子性洗滌劑中的中性緩沖液，各種試劑盒的洗液不要混用。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán)，又含親水基團(tuán)，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合，并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用，使蛋白質(zhì)恢復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20，其濃度為0.005%～0.02%，高于0.02%可使包被在固相上的抗原或抗體借吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度。洗液需要稀釋?zhuān)瑧?yīng)按要求稀釋。配制洗液應(yīng)用新鮮的和高質(zhì)量的純化水，電導(dǎo)率小于1.5 μs/cm，洗液如果結(jié)晶應(yīng)待其溶解后配制。手洗條件一致性較差，對(duì)結(jié)果影響較大。半自動(dòng)與全自動(dòng)洗板機(jī)使用不當(dāng)也會(huì)影響結(jié)果，血清中殘留的纖維蛋白絲或洗滌液析出的結(jié)晶易使洗板機(jī)針小孔全阻塞或半阻塞，造成未結(jié)合標(biāo)記酶洗脫不徹底，導(dǎo)致“花板”，造成假陽(yáng)性或假陰性。所以操作洗板機(jī)過(guò)程中要不時(shí)觀(guān)察洗板機(jī)針孔內(nèi)洗液的通暢狀況，及時(shí)糾正，洗板機(jī)不用時(shí)應(yīng)用去離子水清洗幾遍。

保證洗板浸泡時(shí)間為40 s左右，孔內(nèi)液體被洗板機(jī)洗得越干凈越好。

4顯色和比色

TMB經(jīng)HRP作用后，約40 min顯色達(dá)頂峰，隨即逐漸減弱，至2 h后即可完全消退至無(wú)色。TMB的終止液有多種，疊氮納和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類(lèi)終止劑尚能使藍(lán)色維持較長(zhǎng)時(shí)間（12～14 h）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類(lèi)酸性終止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色，此時(shí)可用特定的波長(zhǎng)（450 nm）測(cè)讀吸光值。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測(cè)讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、精確度和可測(cè)范圍、線(xiàn)性等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精確到0.001，使用前先預(yù)熱儀器15～30 min，測(cè)讀結(jié)果更穩(wěn)定。

測(cè)讀A值時(shí)，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如OPD用492 nm波長(zhǎng)。有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)式測(cè)讀，即每孔先后測(cè)讀兩次，第一次在最適波長(zhǎng)（W1），第二在不敏感波長(zhǎng)（W2），兩次測(cè)定間不移動(dòng)ELISA板的位置，最終測(cè)得的A值為兩者之差（W1-W2）。雙波長(zhǎng)式測(cè)讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

肉眼判斷結(jié)果時(shí)，顯色淺不易觀(guān)察，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，必須使用酶標(biāo)儀檢測(cè)，以保結(jié)果一致性。

5 HOOK效應(yīng)

隨著ELISA一步法的應(yīng)用，一些標(biāo)本中抗原含量過(guò)高，產(chǎn)生HOOK效應(yīng)。影響檢測(cè)結(jié)果，采用同步稀釋測(cè)定或使用線(xiàn)性范圍高的兩對(duì)半定量法可以減少HOOK反應(yīng)的發(fā)生。

6干擾物質(zhì)

有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測(cè)結(jié)果。常見(jiàn)的干擾物質(zhì)有：類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)原性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其他物質(zhì)等。如RF因子可與標(biāo)記二抗的Fc段結(jié)合造成假陽(yáng)性，補(bǔ)體從C1q活化，使一抗和酶標(biāo)二抗的抗體分子發(fā)生變構(gòu)，F(xiàn)c的C1q分子結(jié)合點(diǎn)暴露出來(lái)，則補(bǔ)體C1q可將二者連接起來(lái)造成假陽(yáng)性，采用56℃ 30 min滅活補(bǔ)體可降低假陽(yáng)性率，高濃度的AFP（如孕婦）在儲(chǔ)存過(guò)程中可能形成二聚體，會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深，影響檢測(cè)結(jié)果。

7藥物的影響

高效價(jià)的乙肝免疫球蛋白會(huì)與HBsAg形成復(fù)合物，影響HBsAg的檢出，所以一些HBsAg陽(yáng)性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAg檢測(cè)會(huì)呈陰性反應(yīng)，導(dǎo)致乙肝兩對(duì)半少見(jiàn)模式的出現(xiàn)。如我們常遇到乙肝大三陽(yáng)的孕婦，為阻斷乙肝母嬰垂直傳播，在孕第8、9、10月常規(guī)注射200 mg乙肝免疫球蛋白，不僅影響孕婦HBsAg的檢出，而且其所生的新生兒常出現(xiàn)HBsAg陰性、HBeAg陽(yáng)性和HBcAb陽(yáng)性等少見(jiàn)模式，可能是乙肝免疫球蛋白屬I(mǎi)gG抗體與通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒血液中的HBsAg結(jié)合形成復(fù)合物，則新生兒HBsAg檢測(cè)呈陰性，用0.5 mol的鹽酸處理標(biāo)本1 h可提高檢出率。

為預(yù)防乙肝，部分HBsAg陰性人群在接種乙肝疫苗后的12周內(nèi)，血清中可檢出HBsAg成分，形成一過(guò)性HBsAg陽(yáng)性，這可能是乙肝疫苗的主要成分HBsAg，有方法能夠把它檢出，如電化學(xué)發(fā)光法，建議接種乙肝疫苗后1個(gè)月內(nèi)不應(yīng)做HBsAg檢測(cè)。

8 抗原自身因素

融合蛋白對(duì)基因工程抗原特異性的影響以丙肝診斷試劑盒為例，因?yàn)榘坏幕蚬こ炭乖瓰槿诤系鞍?，包含了?lái)自表達(dá)載體的一些序列，可以與血清中抗大腸桿菌的因子發(fā)生反應(yīng)而產(chǎn)生了可疑標(biāo)本。

少數(shù)HBV感染后外周血中不含HBsAg。HBV感染后絕大多數(shù)感染者外周血中可出現(xiàn)HBsAg，含量為5 μg/ml～600 μg/ml。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，到目前為止在獻(xiàn)血員中所發(fā)現(xiàn)的HBsAg攜帶者最低含量為0.2 ng/ml，含量高者可達(dá)2 000 μg/ml以上。但有少部分HBV感染者血清HBsAg測(cè)定為陰性，如暴發(fā)性乙型肝炎、HBV的S基因發(fā)生變異等。急性重癥乙型肝炎，肝細(xì)胞中以合成HBcAg為主，很少或不合成HBsAg，從而使外周血中無(wú)HBsAg。HBV的前S/S基因編碼HBsAg，構(gòu)成病毒外膜，根據(jù)所帶亞型決定簇的不同分為adw、adr、ayw和ayr。a決定簇具有很高的免疫原性，在HBV的自然感染或注射HBsAg疫苗可引起抗HBs應(yīng)答。如S基因145密碼子變異使得其原來(lái)的甘氨酸被精氨酸替代時(shí)，可致a決定簇的抗原性發(fā)生改變，使機(jī)體產(chǎn)生的抗體對(duì)變異株無(wú)作用，且可引起HBV感染患者血清中同時(shí)出現(xiàn)HBsAg和抗HBs。同時(shí)乙肝疫苗接種也不能有效預(yù)防此類(lèi)變異病毒的感染。乙型肝炎病毒S基因的變異有自然變異和逃避免疫變異，變異可發(fā)生在多個(gè)部位，而且?guī)滋幫蛔兛赏瑫r(shí)存在，這些變異有助于病毒攜帶狀態(tài)的持續(xù)存在。最近，有研究表明，前S1區(qū)丟失突變（氨基酸58～118）是引起HBsAg陰性的HBV感染的重要原因，S啟動(dòng)子位于前S1，是合成HBsAg的調(diào)節(jié)元件，前S1的丟失突變則會(huì)影響S啟動(dòng)子的功能，進(jìn)而影響HBsAg的合成。

總之，優(yōu)質(zhì)的試劑、狀態(tài)良好的儀器、排除各種影響因素的干擾和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。

[參考文獻(xiàn)]

[1]李金明. 臨床酶免測(cè)定技術(shù)[M]. 北京：人民軍醫(yī)出版社，2005.

第9篇：基因工程疫苗范文

乙肝疫苗是預(yù)防并最終控制乙型病毒性肝炎（乙肝）最有效的手段。我國(guó)以往乙肝基因工程疫苗的研究大部分單純以?xún)和騿渭円猿扇搜芯繛橹?，為了獲得乙肝基因工程疫苗的免疫效果和安全性，我們采用重組酵母乙肝疫苗對(duì)869例6~60歲的對(duì)象進(jìn)行了免疫效果觀(guān)察，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象

采用多階段隨機(jī)抽樣的方法，把溫州市鹿城區(qū)人群分成城市和農(nóng)村兩個(gè)層進(jìn)行抽樣，在城市163個(gè)居委會(huì)中隨機(jī)抽取6個(gè)居委會(huì)，在6個(gè)居委會(huì)的12 150人中抽取982人，在128個(gè)村中隨機(jī)抽取6個(gè)村，在6個(gè)村的18 620人中隨機(jī)抽取1 167人,年齡均在6~60歲之間，共計(jì)抽取居民2 149例，經(jīng)過(guò)篩選5項(xiàng)指標(biāo)均為陰性且近期無(wú)感冒發(fā)熱，免疫前體溫正常，無(wú)接種乙肝疫苗史、肝病史及1年內(nèi)無(wú)輸血史者共1120人作為免疫對(duì)象。全程接種3針疫苗者共869人，失訪(fǎng)人群年齡、性別與在訪(fǎng)人群無(wú)差異。

1.2 疫苗

采用衛(wèi)生部北京天壇生物制品股份有限公司生產(chǎn)的重組（酵母）乙肝疫苗，劑量為每次1劑，19周歲及以上對(duì)象接種10 μg×3疫苗，19周歲以下對(duì)象接種5 μg×3疫苗，批號(hào)均為2004060204，均在效期內(nèi)使用。免疫程序?yàn)?、1、6月，接種途徑為上臂三角肌肌肉注射。

1.3 血清檢測(cè)指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)

免疫前篩選時(shí)用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)乙肝表面抗原（HBsAg）、保護(hù)性抗體（HBsAb）、e抗原（HBeAg）、e抗體（HBeAb）、核心抗體（HBcAb），試劑為鄭州安圖綠科工程有限公司生產(chǎn)。免疫后1個(gè)月采血，采用時(shí)間分辨免疫熒光技術(shù)(TRFIA)法進(jìn)行檢測(cè)，抗-HBs診斷試劑盒（IFM法）由上海新波生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，試劑均在效期內(nèi)使用。檢測(cè)由專(zhuān)人負(fù)責(zé)，按照說(shuō)明書(shū)操作。篩選時(shí)為定性檢測(cè)，免后用定量方法檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

資料采用Excel 2003進(jìn)行數(shù)據(jù)二次輸入，核對(duì)后采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 抗-HBs滴度水平

2.1.1 不同性別抗體滴度比較 按照Y=lg10(抗體滴度+0.001)進(jìn)行轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換后抗體滴度見(jiàn)表1。不同性別間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，女性免疫后產(chǎn)生的抗體滴度高于男性。

表1 不同性別的抗體滴度比較

2.1.2 不同年齡組抗體滴度比較 隨著年齡增大，抗體滴度的幾何均數(shù)、中位數(shù)均有下降趨勢(shì)(χ2均＝0.943，n＝6，P＜0.05)(表2)。對(duì)不同年齡組抗體滴度幾何均數(shù)進(jìn)行多元方差分析，不同年齡組之間一元方差分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，二元、三元方差分析中則差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，年齡組與抗體滴度存在一元線(xiàn)性負(fù)相關(guān)，即年齡越低發(fā)生免疫應(yīng)答的抗體滴度越高（P=0.000）。

表2 不同年齡組的抗體滴度比較

對(duì)性別和年齡組與抗體滴度進(jìn)行交互作用分析，結(jié)果表明，性別和年齡差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=7.402 ＞F(1,857)0.01=6.680,F=9.363＞F(5,857)=3.045) 。由而性別和年齡與抗體滴度幾何均數(shù)不存在交互作用（F=1.578＜F(5,857)0.05=2.225)。

2.2 乙肝疫苗的安全性

接種乙肝疫苗后，只有2例對(duì)象出現(xiàn)局部輕微的紅腫,無(wú)發(fā)熱，48 h內(nèi)恢復(fù)正常，未出現(xiàn)嚴(yán)重的局部或全身不良反應(yīng)。

3 討論

3.1 抗體滴度高低的影響因素

本研究中接種對(duì)象發(fā)生免疫應(yīng)答后的抗體滴度女性的幾何均數(shù)、中位數(shù)均高于男性，這與以往報(bào)道相同[1~4]。不同年齡組間的抗體滴度幾何均數(shù)、中位數(shù)有隨著年齡的增高而減低的趨勢(shì)，且存在線(xiàn)性負(fù)相關(guān)，這點(diǎn)與時(shí)景璞等[5]報(bào)道的結(jié)果相一致，可能與年齡增高，人體對(duì)乙肝的免疫應(yīng)答敏感性減低有關(guān)，因此建議易感人群盡早接種乙肝疫苗。

3.2 性別、年齡與抗體滴度關(guān)系

不同性別中均存在抗體滴度隨著年齡升高而下降的趨勢(shì)，性別和年齡與抗體滴度的關(guān)系是獨(dú)立關(guān)系，兩者不存在交互作用，這點(diǎn)以前的文獻(xiàn)報(bào)道較少。兩者單個(gè)因素與抗體滴度關(guān)系與王昕等[2]報(bào)道的抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率類(lèi)似。

3．3乙肝疫苗的安全性

接種血源型乙肝疫苗可以發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)[6]，但較少見(jiàn)。乙肝重組（酵母）基因工程疫苗接種后不良反應(yīng)一般較輕微[2]，重組（漢遜酵母）乙肝疫苗接種引起不良反應(yīng)較少見(jiàn)[7]，本研究未出現(xiàn)任何嚴(yán)重的不良反應(yīng)，說(shuō)明國(guó)產(chǎn)重組（酵母）乙肝疫苗具有良好的安全性。

（課題組成員在現(xiàn)場(chǎng)采樣和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中做了很多工作，特此致謝）

4 參考文獻(xiàn)

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［2］王昕,孫樹(shù),時(shí)景璞,等.成人接種重組酵母乙肝疫苗后免疫效果的評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2002,31（2）：121-122.

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［6］梁爭(zhēng)論,李河民,吳小音,等.中國(guó)乙型肝炎疫苗免疫效果和免疫機(jī)理的研究進(jìn)展［J］.中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,2002,16（1）:91-93.