藥品微生物研究精選(九篇)

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第1篇：藥品微生物研究范文

【關(guān)鍵詞】 　微生物限度；藥物；誤差影響因素

微生物限度檢查是國家食品藥品監(jiān)督管理部門為管理和規(guī)范藥品生產(chǎn)企業(yè)提出規(guī)定，以及相關(guān)檢測(cè)部門提供的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化方法，以促進(jìn)藥品市場(chǎng)化的健康發(fā)展和保證藥品的臨床療效，造?；颊?。在工作中充分了解微生物限度檢驗(yàn)的誤差因素，本文對(duì)誤差因素進(jìn)行了總結(jié)分析，研究結(jié)果如下所示：

1　資料與方法

1.1　藥物資料

以2010 年4月～2011 年4 月1300種藥品為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行微生物限度檢驗(yàn)。檢驗(yàn)的藥品主要為以下幾種藥物類型：膠囊、散劑、顆粒劑、片劑和丸劑。膠囊231 種，散劑237種，顆粒劑256、片劑262 種、水丸劑314種

1.2　方法

以藥物微生物檢驗(yàn)中發(fā)生的誤差數(shù)目和誤差率，對(duì)1300 種藥品進(jìn)行微生物限度檢驗(yàn)，記錄下藥物微生物檢驗(yàn)中發(fā)生的誤差例目及誤差率。觀察發(fā)生誤差的影響因素并對(duì)誤差產(chǎn)生的原因進(jìn)行總結(jié)分析。

1.3　微生物限度檢驗(yàn)方法與誤差因素觀察

以2010 年版《中國藥典》對(duì)藥品微生物限度檢驗(yàn)為準(zhǔn)，對(duì)于無菌室的要求有著嚴(yán)格的規(guī)定:微生物限度檢驗(yàn)應(yīng)在無菌室內(nèi)環(huán)境潔凈度10000 級(jí)下、局部潔凈度100 級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行[3]。在無菌室測(cè)定無菌方法是：取普通肉湯瓊脂平板、琥紅瓊脂平板各3 個(gè)，放置于無菌室內(nèi)的相應(yīng)工作臺(tái)面上，開蓋使其暴露30 min，在30～35℃條件下培養(yǎng)細(xì)菌48 h。計(jì)算霉菌和酵母菌在25～28℃條件下培養(yǎng)72 h 后的菌落數(shù)。各板上的菌落數(shù)不得超過10 個(gè)為宜。在對(duì)誤差因素分析中，其中單因素122例占29.2%，多因素296 例占70.8%；具體誤差影響因素和分布見表1。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

Spass16.0分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

在對(duì)1300種藥品進(jìn)行微生物限度檢驗(yàn)工作中發(fā)現(xiàn)誤差例418，誤差發(fā)生率為32.16%；誤差發(fā)生影響因素如表1所示。

3　討論

在臨床用藥中，由于輸液劑和注射劑是直接進(jìn)入血液的，因此必須有嚴(yán)格的藥品微生物限度檢驗(yàn)。對(duì)418 例藥物微生物限度檢驗(yàn)誤差影響因素進(jìn)行總結(jié)分析，結(jié)果表明進(jìn)行藥品微生物限度檢驗(yàn)應(yīng)做好一下幾個(gè)方面：第一無菌室消毒工作，雖然一些實(shí)驗(yàn)用具并不會(huì)在檢驗(yàn)中用到，但是為了保證整體環(huán)境的潔凈度，應(yīng)對(duì)無菌室全面進(jìn)行消毒。室內(nèi)環(huán)境的潔凈有利于檢驗(yàn)。第二對(duì)于微生物限度檢驗(yàn)中所有適用的器具要進(jìn)行徹底滅菌，這些器具都是實(shí)驗(yàn)中直接要接觸到的，不進(jìn)行滅菌必然會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致檢驗(yàn)誤差的產(chǎn)生。第三防止培養(yǎng)基質(zhì)量變質(zhì)、控制培養(yǎng)基的存放時(shí)間、謹(jǐn)防供試液制備供試液的污染。第三了解被檢測(cè)藥物性質(zhì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響，對(duì)于一些含水的劑型如丸劑應(yīng)注意防止霉變，陰涼密封存放。一些容易受潮的劑型如散劑、顆粒劑應(yīng)放在干燥的地方貯存，或者在貯存的地方放一些干燥劑。第四在給菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)應(yīng)按照統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，減少人為誤差，消除主觀因素對(duì)試驗(yàn)造成的影響；不同人對(duì)同一藥品的菌落計(jì)算不能差別很大。以上四點(diǎn)是筆者為消除誤差影響因素分析總結(jié)的主要因素，在藥品微生物限度檢驗(yàn)中是較為關(guān)鍵的注意點(diǎn)，可防止誤差的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)

[1]袁惠德,毛偉利,劉建國,等.對(duì)《中國藥典》(1990 年版第二增補(bǔ)本)“微生物限度檢查法”的修訂意見[J].中國藥業(yè),2009,33(7):21.

[2]陳萬勝.藥品微生物限度檢驗(yàn)誤差影響因素分析[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥,2011,18(4):121.

第2篇：藥品微生物研究范文

2006年“齊二藥”、“欣弗”事件接連發(fā)生，注射劑產(chǎn)品的安全性問題引起了全社會(huì)的高度關(guān)注。作為藥品生產(chǎn)企業(yè)和藥品監(jiān)管部門，如何找出影響注射劑安全性的一些關(guān)鍵因素，從藥品生產(chǎn)工藝的研發(fā)和藥品注冊(cè)審評(píng)的源頭就嚴(yán)把產(chǎn)品安全關(guān)，是值得我們共同思考的問題。

本文以對(duì)上海市最終滅菌的小容量注射劑滅菌和除菌工藝的調(diào)查結(jié)果為切入點(diǎn)，嘗試進(jìn)行分析和思考，以期引起有關(guān)藥品生產(chǎn)企業(yè)和藥品監(jiān)管部門的重視，使注射劑的安全性得到進(jìn)一步的保證。

1調(diào)查結(jié)果

對(duì)最終滅菌的小容量注射劑而言，產(chǎn)品的無菌是一個(gè)不言而喻的、非常重要的安全性指標(biāo)。通常在最終滅菌的小容量注射劑的生產(chǎn)過程中，可使產(chǎn)品達(dá)到無菌的工藝方法有除菌過濾和濕熱滅菌。然而，在對(duì)小容量注射劑生產(chǎn)企業(yè)的檢查過程中，筆者發(fā)現(xiàn)不少過濾和濕熱滅菌的工藝過程不能足以確保產(chǎn)品的無菌，企業(yè)對(duì)于如何確保滅菌的有效性認(rèn)識(shí)不足，缺乏必要的管理措施。此外，原國家藥品監(jiān)管部門批準(zhǔn)的部分小容量注射劑產(chǎn)品的過濾和滅菌工藝亦有值得商榷之處。

為此，上海市食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)證審評(píng)中心GMP部曾于2003年對(duì)上海市生產(chǎn)濕熱滅菌小容量注射劑的14家藥品生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行了專項(xiàng)調(diào)查。該次調(diào)查的藥品生產(chǎn)企業(yè)既有國有企業(yè)，也有外資企業(yè)，調(diào)查的品種既有化學(xué)藥品，也有中藥制劑，制備工藝中包括過濾和濕熱滅菌，但除菌過濾后不經(jīng)濕熱滅菌的品種不在該次調(diào)查范圍內(nèi)。該調(diào)查共涉及154種產(chǎn)品224個(gè)規(guī)格 (以被調(diào)查企業(yè)所生產(chǎn)的小容量注射劑品種之和計(jì)算，未扣除相同的品種數(shù)量)，旨在了解這些小容量注射劑產(chǎn)品的企業(yè)現(xiàn)行的和經(jīng)國家批準(zhǔn)的過濾和滅菌工藝條件。調(diào)查結(jié)果如表1至表6所示。

本文從調(diào)查的結(jié)果入手，重點(diǎn)探討如何從除菌過濾和濕熱滅菌工藝上確保小容量注射劑安全性的問題。本文中所述的安全性僅限定在與注射劑產(chǎn)品無菌有關(guān)的范圍之內(nèi)，即因除菌過濾和濕熱滅菌條件不合理而不能確保產(chǎn)品的無菌，從而造成對(duì)患者身體的損害或損傷。

2調(diào)查結(jié)果的分析

2.1采用企業(yè)現(xiàn)行過濾和濕熱滅菌條件的小容量注射劑產(chǎn)品的安全性存在較大隱患

《中華人民共和國藥典》（2000年版）推薦使用的滅菌條件是：115.5 ℃暴露30 min、121.5 ℃暴露20 min或126.5 ℃暴露15 min。采用上述滅菌條件，還必須經(jīng)過驗(yàn)證，證明其F0值不低于8才可認(rèn)為符合滅菌要求。

該次調(diào)查中，采用115.5 ℃暴露30 min以上滅菌的小容量注射劑產(chǎn)品有25個(gè)品種35個(gè)規(guī)格，采用121 ℃暴露20 min以上滅菌的產(chǎn)品有12個(gè)品種19個(gè)規(guī)格，采用126.5 ℃暴露15 min以上滅菌的產(chǎn)品有1個(gè)品種1個(gè)規(guī)格（參見表2）。

采用《中華人民共和國藥典》（2000年版）推薦的滅菌條件進(jìn)行濕熱滅菌的小容量注射劑產(chǎn)品僅有38個(gè)品種55個(gè)規(guī)格，分別僅占全部被調(diào)查產(chǎn)品的品種和規(guī)格的24.68％和24.56％（參見表1）。

《中華人民共和國藥典》（2000年版）還要求：由于無菌保證值與污染菌耐熱性及污染量有關(guān)，在藥品生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)均應(yīng)采取各種有效的手段（包括除菌過濾等措施）來降低待滅菌產(chǎn)品的微生物污染。

根據(jù)上述要求，針對(duì)采用《中華人民共和國藥典》（2000年版）推薦的滅菌條件進(jìn)行濕熱滅菌的小容量注射劑產(chǎn)品，再進(jìn)一步考察其除菌過濾的條件，發(fā)現(xiàn)其中有20個(gè)品種40個(gè)規(guī)格采用不大于0.22 μ除菌過濾器進(jìn)行過濾，分別占全部被調(diào)查產(chǎn)品的品種和規(guī)格的16.23％和17.86％，而有13個(gè)品種15個(gè)規(guī)格未采用0.22 μ除菌過濾器進(jìn)行過濾，分別占全部被調(diào)查產(chǎn)品的品種和規(guī)格的8.44％和6.70％（參見表3）。

這也就表明，被調(diào)查企業(yè)中僅有16.23％的小容量注射劑品種和17.86％的規(guī)格完全符合《中華人民共和國藥典》（2000年版）關(guān)于濕熱滅菌和除菌過濾條件的基本要求，如果假定企業(yè)在除濕熱滅菌和除菌過濾以外的其他方面，如配液、灌裝等，處于理想受控狀態(tài)，則這部分產(chǎn)品可以被認(rèn)為是安全的。

其余小容量注射劑產(chǎn)品中有112個(gè)品種164個(gè)規(guī)格采用的是100 ℃暴露15～45 min不等的濕熱滅菌條件進(jìn)行滅菌。

采用這樣的條件生產(chǎn)的小容量注射劑產(chǎn)品，假如人們對(duì)微生物的知識(shí)稍加了解就不難判斷其安全性如何了。以往的微生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌芽孢比其繁殖體具有更強(qiáng)的耐熱性。炭疽桿菌的繁殖體在80 ℃只能存活2-3 min，而其芽孢在濕熱120 ℃需10 min才能殺滅，肉毒桿菌芽孢在濕熱120 ℃可存活4 min，而在100 ℃需330 min才能殺滅。所以要?dú)缪堪?，濕熱滅菌的溫度?yīng)大于100 ℃。

Warth研究了細(xì)菌最適和最高生長溫度與其芽孢耐熱性之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)隨著細(xì)菌繁殖體最適生長溫度的增高，其芽孢的耐熱性就增強(qiáng)。適宜于較高溫度（55～67 ℃）生長的微生物，如嗜熱脂肪芽孢桿菌（B.stearothermophilus）等對(duì)濕熱的抵抗力最強(qiáng)。因此，嗜熱脂肪芽孢桿菌已成為濕熱滅菌過度殺滅法的生物指示劑，即通常以是否能殺滅嗜熱脂肪芽孢桿菌作為指標(biāo)之一來評(píng)估滅菌工藝的效果。

100 ℃暴露15～45 min的濕熱滅菌條件，其滅菌過程的F0值不能達(dá)到8，也不能完全殺滅嗜熱脂肪芽孢桿菌生物指示劑。此外，筆者在對(duì)生產(chǎn)上述產(chǎn)品的企業(yè)進(jìn)行GMP認(rèn)證等各類檢查中，極少見到有企業(yè)按照《中華人民共和國藥典》（2000年版）的要求，除用生物指示劑進(jìn)行濕熱滅菌工藝的驗(yàn)證外，還在生產(chǎn)過程中連續(xù)地對(duì)微生物進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控，證明滅菌后無菌保證值不低于設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)。大部分企業(yè)不知道應(yīng)如何對(duì)這樣的濕熱滅菌條件進(jìn)行有效的驗(yàn)證，不清楚檢測(cè)滅菌前藥液中的微生物污染量的重要性和必要性，仍然采用過度殺滅法滅菌的驗(yàn)證方法計(jì)算F0值或使用嗜熱脂肪芽孢桿菌生物指示劑。

因此，這部分小容量注射劑產(chǎn)品的無菌保證值未經(jīng)有效驗(yàn)證證實(shí)可達(dá)到6，即滅菌后微生物存活的概率不大于10-6，從這個(gè)意義上來說，這部分產(chǎn)品的安全性是值得懷疑的。

針對(duì)100 ℃暴露15～45 min濕熱滅菌的被調(diào)查產(chǎn)品，再進(jìn)一步考察其過濾的條件，發(fā)現(xiàn)滅菌前采用0.22 μ除菌過濾器進(jìn)行過濾的有70個(gè)品種和104個(gè)規(guī)格，分別占全部被調(diào)查產(chǎn)品的品種和規(guī)格的45.45％和46.43％，而未采用0.22 μ除菌過濾器進(jìn)行過濾的有42個(gè)品種和60個(gè)規(guī)格，分別占全部被調(diào)查產(chǎn)品的品種和規(guī)格的27.27％和26.78％（參見表4）。

這表明，超過1/4的小容量注射劑產(chǎn)品完全不能符合《中華人民共和國藥典》（2000年版）關(guān)于除菌過濾和濕熱滅菌條件的基本要求，再加上企業(yè)對(duì)滅菌工藝驗(yàn)證的不完善，因此，這部分產(chǎn)品嚴(yán)格地說是不安全的。

2.2國內(nèi)的藥品主管部門對(duì)小容量注射劑產(chǎn)品的過濾和濕熱滅菌條件的控制不嚴(yán)

由于被調(diào)查企業(yè)中有不少產(chǎn)品的注冊(cè)申報(bào)資料遺失，無法對(duì)被調(diào)查的所有產(chǎn)品品種和規(guī)格做一個(gè)全面的分析，但僅從已知國家批準(zhǔn)的濕熱滅菌工藝的128個(gè)品種和185個(gè)規(guī)格的產(chǎn)品來看，完全符合《中華人民共和國藥典》（2000年版）推薦的濕熱滅菌條件的產(chǎn)品品種和規(guī)格分別僅有21個(gè)和30個(gè)，分別僅占16.41％和16.22％；而采用100 ℃暴露15～45 min濕熱滅菌條件的產(chǎn)品品種和規(guī)格分別有98個(gè)和145個(gè)之多，分別占76.56％和78.38％；采用其他滅菌條件的產(chǎn)品品種和規(guī)格分別有5個(gè)和6個(gè)，分別占3.91％和3.24％；未作明確規(guī)定的產(chǎn)品品種和規(guī)格均有4個(gè)，分別占3.12％和2.16％（參見表5）。這說明有75％以上的小容量注射劑產(chǎn)品獲得國家批準(zhǔn)的濕熱滅菌條件不符合《中國藥典》(2000年版)推薦的要求。

再從已知國家批準(zhǔn)的過濾工藝的128個(gè)品種和182個(gè)規(guī)格的產(chǎn)品來看，使用0.22 μ除菌過濾器或等同的濾器進(jìn)行過濾的品種和規(guī)格分別僅有16個(gè)和27個(gè)，分別占12.50％和14.84％；使用0.45～1.2 μ的過濾器進(jìn)行過濾的產(chǎn)品品種和規(guī)格分別有102個(gè)和140個(gè)，分別占79.69％和76.92％；未作明確規(guī)定的產(chǎn)品品種和規(guī)格分別有10個(gè)和15個(gè)，分別占7.81％和8.24％（參見表6）。這說明有75％以上的小容量注射劑產(chǎn)品獲得國家批準(zhǔn)的過濾工藝不符合《中國藥典》(2000年版)除菌過濾的要求。

這樣的狀況使得GMP檢查員即使發(fā)現(xiàn)了企業(yè)生產(chǎn)的小容量注射劑產(chǎn)品存在過濾和濕熱滅菌工藝上的缺陷，也無法制止企業(yè)的不合理行為，因?yàn)?，在未獲得藥品主管部門正式批準(zhǔn)重大工藝改變之前，企業(yè)必須嚴(yán)格按照已批準(zhǔn)的生產(chǎn)工藝進(jìn)行生產(chǎn)，不得擅自更改，這既是《中華人民共和國藥品管理法》的規(guī)定，也是中國《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（1998年修訂）的要求。在此，合理性與合法性產(chǎn)生了嚴(yán)重的沖突和矛盾。

2.3出口的小容量注射劑產(chǎn)品比內(nèi)銷的產(chǎn)品在濕熱滅菌條件上更嚴(yán)格

該次被調(diào)查的企業(yè)中有一家企業(yè)同時(shí)生產(chǎn)出口和內(nèi)銷的小容量注射劑產(chǎn)品，對(duì)同一品種和規(guī)格，這家企業(yè)針對(duì)出口和內(nèi)銷的產(chǎn)品分別設(shè)定不同的濕熱滅菌條件，出口產(chǎn)品的滅菌條件是121 ℃暴露20 min，而內(nèi)銷產(chǎn)品的滅菌條件是100 ℃暴露30 min。

這種內(nèi)外有別的做法提示我們：國內(nèi)對(duì)于小容量注射劑產(chǎn)品的安全性要求已經(jīng)落后于國際標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)，這種國際標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于國內(nèi)的企業(yè)而言是可以達(dá)到的，而不是遙不可及的。

該次調(diào)查還發(fā)現(xiàn)，由外國人直接管理的合資企業(yè)生產(chǎn)的小容量注射劑產(chǎn)品在濕熱滅菌和除菌過濾的條件上全部能符合《中華人民共和國藥典》（2000年版）的要求甚至更為嚴(yán)格。例如，有一家合資企業(yè)規(guī)定的濕熱滅菌條件是121℃（F0＝24）。這同時(shí)也印證了國際上對(duì)于小容量注射劑產(chǎn)品的安全性要求比我們國內(nèi)更嚴(yán)。

3思考與討論

通過對(duì)該次專項(xiàng)調(diào)查結(jié)果的分析，筆者在此提出一些問題予以思考和討論：

1)為什么會(huì)出現(xiàn)為數(shù)不少的被調(diào)查的小容量注射劑產(chǎn)品的濕熱滅菌和除菌過濾工藝的無菌保證程度不足，安全性令人懷疑？究其原因，是落后的、不科學(xué)的傳統(tǒng)觀念在作祟。

在對(duì)藥品生產(chǎn)企業(yè)的檢查中，筆者時(shí)常發(fā)現(xiàn)部分企業(yè)人員對(duì)于消毒和滅菌的概念模糊，將兩者混為一談，因此，有必要在此進(jìn)行澄清。

消毒是指清除或殺滅外環(huán)境中的病原微生物及其它有害微生物。在對(duì)“消毒”一詞含義的理解上，有兩點(diǎn)需要強(qiáng)調(diào)：消毒是針對(duì)病原微生物及其它有害微生物的，并不要求清除或殺滅所有微生物；消毒是相對(duì)的而不是絕對(duì)的，它只要求將有害微生物的數(shù)量減少到無害的程度，而并不要求把所有有害微生物全部殺滅。

滅菌是指用物理或化學(xué)的方法清除或殺滅一切活的微生物，包括致病性微生物和非致病性微生物。滅菌的概念是絕對(duì)的而不是相對(duì)的。滅菌方法通常有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、化學(xué)滅菌法、除菌過濾法和輻射滅菌法等。

由于種種原因，要做到完全無菌是困難的。國際上，一般用無菌保證值來表示物品被滅菌后的無菌狀態(tài)，其定義為滅菌產(chǎn)品經(jīng)滅菌后微生物殘存概率的負(fù)對(duì)數(shù)值，數(shù)值越大，無菌狀態(tài)越完全，但滅菌后微生物殘存的概率不可能為零。按國際標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，濕熱滅菌法的無菌保證值不得低于6，即滅菌后微生物存活的概率不得大于10-6。

消毒和滅菌的定義清楚地說明，對(duì)于小容量注射劑產(chǎn)品而言，要達(dá)到無菌只能采用滅菌的方法而不是消毒的方法。在調(diào)查結(jié)果的分析中所提到的100 ℃暴露15～45 min的濕熱滅菌條件在未經(jīng)驗(yàn)證證實(shí)其無菌保證值可達(dá)到6之前，只能視作是消毒。但在企業(yè)甚至監(jiān)督管理部門中，仍有不少人錯(cuò)誤地認(rèn)為它就是滅菌，長期以來國內(nèi)的小容量注射劑產(chǎn)品的生產(chǎn)都是采用這種傳統(tǒng)方法進(jìn)行“滅菌”，并覺得其安全性是沒有問題的。因此，這也就很好地解釋了為什么有不少產(chǎn)品在待“滅菌”前不進(jìn)行除菌過濾。

當(dāng)然，需要指出的是，對(duì)于不適用除菌過濾的產(chǎn)品應(yīng)例外，可采取其他的方法。

有些人可能會(huì)認(rèn)為，盡管從理論上講，100 ℃暴露15～45 min的條件不足以確保無菌，但為什么經(jīng)過這種“滅菌”處理的小容量注射劑產(chǎn)品都能通過無菌檢驗(yàn)？

其實(shí)，這些人對(duì)無菌檢驗(yàn)的局限性缺乏認(rèn)識(shí)。從統(tǒng)計(jì)學(xué)角度考察，如果采用抽樣檢驗(yàn)的方法，那么，含有少量微生物污染的產(chǎn)品批次也有可能“通過”無菌檢驗(yàn)；而且，一批產(chǎn)品的染菌率越低，根據(jù)無菌檢驗(yàn)的結(jié)果來判定整批產(chǎn)品的無菌，其風(fēng)險(xiǎn)就越大。從非統(tǒng)計(jì)學(xué)角度考察，無菌檢驗(yàn)的結(jié)果實(shí)際上還與微生物生長的條件有關(guān)。到目前為止，沒有一種培養(yǎng)基能使所有的細(xì)菌、酵母菌和霉菌都能生長，所以如果要保證這些微生物適宜地存活和生長，就必須使用多種培養(yǎng)基，但究竟用多少種培養(yǎng)基才合適呢？迄今沒有定論。另外，培養(yǎng)溫度和時(shí)間也會(huì)影響到微生物的生長。因此，僅憑無菌檢驗(yàn)合格的結(jié)果就判定整批產(chǎn)品無菌是難以讓人完全信服的，只有對(duì)滅菌的過程進(jìn)行有效的驗(yàn)證并在實(shí)際生產(chǎn)中嚴(yán)格控制，才能確保小容量注射劑產(chǎn)品有足夠的無菌保證程度和安全性。

針對(duì)這些錯(cuò)誤的、不科學(xué)的傳統(tǒng)觀念，建議藥品主管部門加強(qiáng)宣傳與小容量注射劑有關(guān)的國內(nèi)外先進(jìn)的制藥科學(xué)知識(shí)，幫助人們盡快更新觀念，跟上科技發(fā)展和時(shí)代進(jìn)步的步伐。

2)正是由于監(jiān)管部門中有些監(jiān)管人員也有這些錯(cuò)誤的觀念，致使在小容量注射劑產(chǎn)品的注冊(cè)審批中，藥品主管部門未對(duì)濕熱滅菌和除菌過濾等會(huì)影響產(chǎn)品安全性的因素提出嚴(yán)格的審評(píng)要求，設(shè)立嚴(yán)格的審評(píng)標(biāo)準(zhǔn)。

在國際上，無論是美國FDA還是歐盟都要求注射劑產(chǎn)品的申請(qǐng)人應(yīng)提交滅菌工藝研究方面的資料。例如，美國FDA的《人用和獸用藥品申請(qǐng)時(shí)提交滅菌工藝驗(yàn)證文件的指導(dǎo)原則》（1994年）就詳細(xì)說明了需最終濕熱滅菌的藥品申報(bào)時(shí)所需提交的滅菌程序資料,其中包括：對(duì)產(chǎn)品及滅菌程序的說明；滅菌程序的熱力學(xué)確認(rèn)；滅菌程序的功效；環(huán)境的微生物檢測(cè)；容器－膠塞系統(tǒng)及包裝的完好性；細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)及其方法；制訂及遵循正式書面規(guī)程的證據(jù)。

通過要求企業(yè)提交上述資料，實(shí)際上也就是要求申報(bào)企業(yè)必須對(duì)產(chǎn)品的濕熱滅菌事先進(jìn)行深入、細(xì)致、嚴(yán)密的研究，從產(chǎn)品申報(bào)之初就對(duì)其安全性進(jìn)行嚴(yán)格把關(guān)。

但在國內(nèi)，藥品主管部門尚未針對(duì)注射劑產(chǎn)品的注冊(cè)申請(qǐng)制定出專門的詳細(xì)的申報(bào)資料要求，也就是說，申報(bào)企業(yè)未被要求提交注射劑產(chǎn)品滅菌程序的詳細(xì)資料?？v覽2002年10月15日頒布的《藥品注冊(cè)管理辦法》（試行）及其5個(gè)附件，未發(fā)現(xiàn)其中包含這種要求，而這正是對(duì)注射劑產(chǎn)品的安全性進(jìn)行源頭監(jiān)管的一個(gè)盲點(diǎn)。

為此，建議國家食品藥品監(jiān)督管理局從完善藥品監(jiān)管系統(tǒng)的角度出發(fā)，在對(duì)國內(nèi)注射劑產(chǎn)品調(diào)研的基礎(chǔ)上，結(jié)合研究國外注射劑產(chǎn)品的注冊(cè)管理要求，確定專門的、詳細(xì)的注射劑產(chǎn)品申報(bào)資料要求，包括需企業(yè)提交滅菌程序資料等，設(shè)定嚴(yán)格的、科學(xué)的、合理的審評(píng)標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)已有藥品批準(zhǔn)文號(hào)的注射劑品種重新按照新的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行審查，推動(dòng)和促使企業(yè)盡快對(duì)注射劑產(chǎn)品的安全性進(jìn)行充分的研究，改進(jìn)小容量注射劑產(chǎn)品的除菌過濾和濕熱滅菌工藝。

一旦小容量注射劑產(chǎn)品確定了嚴(yán)格的、科學(xué)的、合理的除菌過濾和濕熱滅菌工藝，并經(jīng)過藥品主管部門批準(zhǔn)后，GMP的檢查就有了合法、合理的依據(jù)，也不會(huì)在檢查過程中陷入合理性與合法性彼此沖突和矛盾的兩難境地，GMP檢查員也就可以理直氣壯地要求企業(yè)對(duì)小容量注射劑產(chǎn)品的除菌過濾和濕熱滅菌過程進(jìn)行有效的驗(yàn)證并嚴(yán)加控制。否則，即使國家食品藥品監(jiān)督管理局早在2002年底就限期生產(chǎn)小容量注射劑產(chǎn)品的企業(yè)必須通過GMP認(rèn)證，即使注射劑的GMP認(rèn)證劃歸國家食品藥品監(jiān)督管理局負(fù)責(zé)的范圍，即使國家食品藥品監(jiān)督管理局對(duì)生產(chǎn)注射劑的企業(yè)進(jìn)行GMP認(rèn)證后的跟蹤檢查，小容量注射劑的安全性問題仍然不可能從根本上得到解決，也不可能將GMP認(rèn)證的工作引向深入，引向更高的層次。

3)小容量注射劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)如何確保除菌過濾和濕熱滅菌工藝的有效性，如何嚴(yán)格控制其工藝？建議企業(yè)根據(jù)產(chǎn)品的特性，科學(xué)設(shè)計(jì)除菌過濾和濕熱滅菌的工藝，針對(duì)不同的濕熱滅菌方式，制定相應(yīng)的、必要的控制措施。

濕熱滅菌按照驗(yàn)證方式的不同可分為過度殺滅法、生物負(fù)載／生物指示劑（聯(lián)合使用）滅菌法和生物負(fù)載滅菌法。

對(duì)于熱穩(wěn)定性強(qiáng)的小容量注射劑產(chǎn)品，建議采用過度殺滅濕熱滅菌法。該法不管待滅菌的物品中微生物污染的數(shù)量和耐熱性如何，都力求達(dá)到無菌保證值為6，通?？捎檬笵121.1℃至少為1 min的微生物數(shù)量的對(duì)數(shù)值最少降低12來證實(shí)。只有最耐熱的微生物其D121.1℃才會(huì)大于0.5～1.0min，耐熱性較差的微生物理所當(dāng)然會(huì)被殺滅從而達(dá)到更高的無菌保證值。挑戰(zhàn)用的微生物的D值和最少降低12個(gè)對(duì)數(shù)值的最低目標(biāo)是用來計(jì)算滅菌時(shí)間的，用于計(jì)算被滅菌物品的F0值。過度殺滅法不要求對(duì)待滅菌物品上的微生物數(shù)量進(jìn)行日常監(jiān)控，只要定期進(jìn)行監(jiān)控即可。但是，在驗(yàn)證期間應(yīng)全面檢測(cè)是否出現(xiàn)耐熱細(xì)菌芽孢，并與挑戰(zhàn)用的微生物比較其耐熱性。

例如，歐洲藥典中要求的過度殺滅的標(biāo)準(zhǔn)程序是121.1℃暴露15 min，采用這種滅菌程序可以不必使用生物指示劑。但即便是采用過度殺滅法，對(duì)小容量注射劑的藥液在灌裝前進(jìn)行微生物污染水平的控制仍然是WHO要求采用的措施之一，而除菌過濾可以有效地達(dá)到降低微生物污染水平的目的。

對(duì)于只有中等強(qiáng)度熱穩(wěn)定性的小容量注射劑產(chǎn)品，可用生物負(fù)載／生物指示劑（聯(lián)合使用）滅菌法。該法在無菌保證值達(dá)到6時(shí)，允許部分生物指示劑未被殺滅，但所使用的生物指示劑的D值應(yīng)大于待滅菌產(chǎn)品中所含有的普通微生物的D值。在對(duì)熱穩(wěn)定性較差的產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)，使用有耐熱性的生物指示劑通常是有必要的，可通過允許生物指示劑的部分存活從而避免被滅菌物品過度受熱。這種方法提供了可以與生物負(fù)載比較的無菌保證值，盡管仍需使用生物指示劑，但所做的驗(yàn)證比生物負(fù)載滅菌法更簡單。

例如，如果滅菌前的生物負(fù)載不大于100 CFU／個(gè)容器，D121.1℃為0.2 min，采用使有耐熱性的生物指示劑（D121.1℃為0.5 min）芽孢數(shù)量降低4個(gè)對(duì)數(shù)值的濕熱滅菌程序可使無菌保證值不小于6。

對(duì)于熱穩(wěn)定性差的小容量注射劑產(chǎn)品，可采用生物負(fù)載滅菌法。該方法應(yīng)足以殺滅待滅菌物品上的微生物，又不致于造成產(chǎn)品的降解。生物負(fù)載滅菌法是在對(duì)產(chǎn)品中微生物的數(shù)量和耐熱性進(jìn)行詳細(xì)研究的基礎(chǔ)上建立的。一般說來，只有生成芽孢的細(xì)菌需要測(cè)定D值，對(duì)產(chǎn)品在80～100 ℃進(jìn)行熱休克處理10～15 min可以剔除不耐熱的微生物。一旦已知生物負(fù)載的耐熱性后，就可以確定滅菌程序，使微生物存活的可能性不大于10-6。對(duì)生物負(fù)載滅菌法而言，分離出來的最耐熱的微生物應(yīng)作為生物指示劑，且通常在滅菌前應(yīng)對(duì)每批產(chǎn)品的生物負(fù)載進(jìn)行檢測(cè)和評(píng)估。由于生物負(fù)載／生物指示劑（聯(lián)合使用）滅菌法可達(dá)到同樣的無菌保證程度而不需要企業(yè)自制挑戰(zhàn)用的生物指示劑，所以生物負(fù)載滅菌法未在制藥企業(yè)中廣泛使用。

除過度殺滅法以外，使用生物負(fù)載／生物指示劑（聯(lián)合使用）滅菌法或生物負(fù)載滅菌法都必須制定生物負(fù)載監(jiān)控的計(jì)劃，并從下列幾個(gè)方面予以考慮：環(huán)境的季節(jié)變化、從配液到滅菌的時(shí)限（應(yīng)包括預(yù)定的最大時(shí)限）、樣品的均一性、產(chǎn)品批量的變化，還應(yīng)測(cè)定每個(gè)容器或每升產(chǎn)品內(nèi)微生物的數(shù)量和種類。根據(jù)這些數(shù)據(jù)，可建立暫時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)作為內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，直至收集到其它數(shù)據(jù)后再制定最終的警戒限和行動(dòng)限。生物負(fù)載監(jiān)控的計(jì)劃還應(yīng)有明確的取樣頻率、取樣數(shù)量、取樣方法、檢驗(yàn)方法和可接受的標(biāo)準(zhǔn)。

WHO對(duì)采用過度殺滅法滅菌的小容量注射劑藥液仍然建議在灌裝前進(jìn)行微生物污染水平的控制，因此用生物負(fù)載／生物指示劑（聯(lián)合使用）滅菌法或生物負(fù)載滅菌法生產(chǎn)的小容量注射劑，其藥液在灌裝前更應(yīng)進(jìn)行微生物污染水平的控制（如采用除菌過濾），這對(duì)于保證產(chǎn)品的安全性而言，其重要性更是不言自明了。

4結(jié)語

長期以來，人們都熟悉這樣的說法：要是生了病，可以吃藥的不要打針，可以打針的不要輸液。這種說法雖是用藥的一個(gè)基本法則，但從另一個(gè)側(cè)面反映了人們對(duì)注射劑產(chǎn)品的安全性無法徹底放心的心態(tài)。

第3篇：藥品微生物研究范文

［關(guān)鍵詞］ 生物測(cè)定；藥理；藥品

藥品是特殊商品，藥品質(zhì)量直接關(guān)系到用藥者的安全和療效。藥品檢測(cè)方法和檢測(cè)水平隨著制藥工業(yè)的發(fā)展不斷改進(jìn)提高。由于現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，相鄰學(xué)科之間的相互滲透，分析化學(xué)的發(fā)展經(jīng)歷了三次巨大的變革，使分析化學(xué)發(fā)展成為以儀器分析為主的現(xiàn)代分析化學(xué)。面對(duì)生命科學(xué)中復(fù)雜的分離分析任務(wù)，發(fā)展了色譜分析方法。結(jié)構(gòu)分析、價(jià)態(tài)分析、晶體分析等方面的研究又促進(jìn)了光譜分析的發(fā)展。以計(jì)算機(jī)應(yīng)用為主要標(biāo)志的信息時(shí)代的來臨，儀器分析迅速發(fā)展，為藥物檢測(cè)提供各種非常靈敏、準(zhǔn)確而快速的分析方法［1］。生物測(cè)定受到了極大的挑戰(zhàn)，其發(fā)展前景令我們從事藥品生物測(cè)定工作者所關(guān)注。

1 藥品生物的特點(diǎn)與業(yè)務(wù)范圍

1.1 藥品生物測(cè)定的定義與特點(diǎn) 藥品生物測(cè)定（簡稱生測(cè)）是利用藥品（或藥品中的有害雜質(zhì)）對(duì)生物（或離體器官及組織）所引起的反應(yīng)來測(cè)定藥品的含量或安全性的一種方法。

生測(cè)法的優(yōu)點(diǎn)是測(cè)定的結(jié)果與醫(yī)療要求基本一致，能直接反映藥品的效果或毒副作用，這是其他物理學(xué)方法或化學(xué)方法所不能達(dá)到的。因此，目前各國藥典仍大都采用這一方法。

生測(cè)法的缺點(diǎn)是檢驗(yàn)周期長，微生物有生長繁殖過程，動(dòng)物有生理代謝過程，觀察分析時(shí)間一般在2~7天，有些試驗(yàn)會(huì)更長。影響因素多，有生物差異性，也有系統(tǒng)操作誤差和環(huán)境條件等造成的影響。用品用具、動(dòng)物質(zhì)量、儀器設(shè)備都會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響［2］。所以，以生測(cè)主檢的品種在中國藥典中逐版減少。

1.2 藥品生物測(cè)定的業(yè)務(wù)范圍 中國藥典是法定的藥品標(biāo)準(zhǔn)，它將藥品質(zhì)量控制項(xiàng)目歸為四類：性狀、鑒別、檢查和含量。生測(cè)的業(yè)務(wù)主要涉及到中西藥品的檢查類和含量類。

其中作為藥品安全性檢查項(xiàng)目最多，包括：無菌、熱原、細(xì)菌內(nèi)毒素、異常毒性、安全試驗(yàn)、急性全身毒性、過敏物質(zhì)、刺激性、溶血、降壓物質(zhì)、微生物限度等。含量（或效價(jià)）測(cè)定包括：抗生素微生物檢定法，胰島素、硫酸魚精蛋白、縮宮素、卵泡刺激素、黃體生成素、升壓素等生物檢定法。

2 藥品生物測(cè)定的現(xiàn)狀

由于現(xiàn)代化檢測(cè)儀器的廣泛應(yīng)用，藥品生物測(cè)定的品種和范圍，方法和要求，也發(fā)生了很大變化。

2.1 品種和范圍的變化 抗生素的含量測(cè)定，最初大部分抗生素用微生物法測(cè)定含量。隨著制藥工業(yè)發(fā)展，提純方法不斷改進(jìn)，有效組分更加明確，許多品種檢測(cè)方法不斷改為儀器測(cè)定和化學(xué)測(cè)定。例如：2000年版中國藥典收載約219個(gè)抗生素品種，其中有15個(gè)原料藥及其制劑從1995年版的化學(xué)法和微生物法改為高效液相色譜法（簡稱HPLC），使該法達(dá)到97種，微生物法僅有24個(gè)，其中9個(gè)品種是新增加的。有人預(yù)計(jì)本世紀(jì)初，HPLC法會(huì)發(fā)展成為中國藥典使用頻率最高的一種儀器分析法［3］。規(guī)定取消抗生素過期檢驗(yàn)，抗生素微生物效價(jià)測(cè)定的業(yè)務(wù)工作量更是明顯減少。

藥品注射劑的熱源檢查。1942年美國首先將家兔法收入藥典，相繼世界各國藥典均規(guī)定用該法。中國藥典從1953年開始收載。自1973年以來，鱟試劑被證明是一種檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素（熱原）存在的靈敏試劑。用鱟試劑要比家兔試驗(yàn)迅速、經(jīng)濟(jì)，所需樣品量少，操作過程工作量小，每天可進(jìn)行許多樣品檢測(cè)。1980年美國藥典20版首載“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”，1985年USP21版收載5種注射用水及40種放射性藥品。1991年11月執(zhí)行的USP22版第五增補(bǔ)版公布了185種藥品刪除家兔法，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替。1995年USP23版注射劑的熱源項(xiàng)幾乎都被細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替［4］。

我國從20世紀(jì)70年代開始研究制備鱟試劑，1988年衛(wèi)生部頒布細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，1993年中國藥典第二增補(bǔ)本收載該法，但未涉及任何品種，1995年中國藥典二部正式收載，并規(guī)定了注射用水、氯化鈉注射液和二十多種放射性藥品并刪除熱源檢查，以內(nèi)毒素代替。2000年版中國藥典進(jìn)一步擴(kuò)大到68種。預(yù)計(jì)2005年版中國藥典還要繼續(xù)增加品種，熱源項(xiàng)都將被內(nèi)毒素代替。動(dòng)物試驗(yàn)改為生化試驗(yàn)。

2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 生測(cè)離不開實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在實(shí)驗(yàn)中，為了減少生物差異，提高動(dòng)物反應(yīng)敏感性，以最少的動(dòng)物達(dá)到最滿意的結(jié)果。國家非常重視實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，1988年國務(wù)院頒布了《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l件》，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼管、管理、使用等做出了明確規(guī)定，實(shí)行達(dá)標(biāo)認(rèn)證制度，嚴(yán)格管理。按微生物控制程度把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四級(jí)：普通動(dòng)物、清潔動(dòng)物、無特殊病原體動(dòng)物和無菌動(dòng)物［5］。一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn)必須達(dá)到清潔動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)，種系清楚，不雜亂，無規(guī)定指出的疾病。動(dòng)物級(jí)別越高，飼養(yǎng)管理?xiàng)l件越嚴(yán)，設(shè)施投資越大。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是實(shí)驗(yàn)研究的活試劑，既要有純度，也要有數(shù)量，背景明確，來源清楚，符合要求才能使用。（隨著藥品純度的提高，凡是有準(zhǔn)確的化學(xué)和物理方法或細(xì)胞學(xué)方法能取代動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行藥品和生物制品質(zhì)量檢測(cè)，應(yīng)盡量采用，以減少動(dòng)物的使用。）

2.3 藥品生物測(cè)定在方法上的改進(jìn)與變化 為了縮短操作時(shí)間，減少實(shí)驗(yàn)誤差，近年來生測(cè)方面也研制并投入使用了部分儀器設(shè)備，如：抗生素抑菌圈測(cè)定儀、微機(jī)熱原測(cè)溫儀、集菌儀、細(xì)菌數(shù)測(cè)定儀等，減輕了工作強(qiáng)度，提高了工作效率，檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。

3 藥品生物測(cè)定的發(fā)展趨勢(shì)

生測(cè)作為經(jīng)典方法沿用至今，表明它有其他方法不能替代的特點(diǎn)，在藥品檢驗(yàn)中發(fā)揮了重要作用。不少老產(chǎn)品改為其他方法控制質(zhì)量，也會(huì)不斷有新產(chǎn)品離不開生測(cè)法，我們應(yīng)當(dāng)充分發(fā)揮它的優(yōu)點(diǎn)，盡量克服它的不足，開拓新的業(yè)務(wù)范圍。

3.1 微生物限度檢查工作量大 為了控制藥品染菌限度，1975年美國藥典19版首載微生物限度檢查，1980年英國藥典收載，我國在1990年由衛(wèi)生部頒布了藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)及檢驗(yàn)方法，1995年版中國藥典正式收載［6］。2000年版中國藥典按劑型規(guī)定了微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，執(zhí)行范圍除注射劑和中藥飲片外幾乎包括中西藥的所有制劑和原料。該項(xiàng)檢查成為藥典品種適用最多的檢查項(xiàng)目，占當(dāng)前地市級(jí)藥品檢驗(yàn)所生測(cè)室業(yè)務(wù)工作量的80%以上。在這項(xiàng)檢查中，有大量的業(yè)務(wù)技術(shù)需要我們進(jìn)一步研究，改進(jìn)試驗(yàn)條件，使數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，探討快速檢測(cè)的新方法。藥包材的檢查，國家藥監(jiān)局已經(jīng)試行標(biāo)準(zhǔn)，業(yè)務(wù)范圍將更加擴(kuò)大，這是我們進(jìn)一步做好工作，努力探討研究的新領(lǐng)域。

3.2 藥品生物測(cè)定在中藥開發(fā)中的作用 我國是中藥王國，2000年版中國藥典一部共收載920種，其中中成藥398種。有含量測(cè)定的157種，僅占總數(shù)的17%，中藥成分多，雜質(zhì)和干擾物質(zhì)很多。復(fù)方制劑，尤其大復(fù)方制劑專屬性的檢出處方中所含藥材很困難，有大量的研究工作需要做。中成藥中的雜質(zhì)如重金屬、殘留農(nóng)藥等達(dá)到一定水平會(huì)產(chǎn)生毒副作用，影響藥物安全性［7］。要讓中藥制劑打進(jìn)國際市場(chǎng)，我們?cè)跈z查類的控制項(xiàng)目和含量類的方法探討方面有大量工作要做，生物測(cè)定可以在毒理、藥理方面進(jìn)行研究、探討，逐步完善質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，提高制劑質(zhì)量發(fā)揮更大的作用。

3.3 新藥研制開發(fā)與安全性評(píng)價(jià) 新藥研制開發(fā)是多學(xué)科合作的系統(tǒng)工程。在獲得一個(gè)具有生物活性的化合物后，研究開發(fā)組織者要在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域進(jìn)行藥物評(píng)價(jià)研究，首先必須組織藥理學(xué)、毒理學(xué)、病理學(xué)、獸醫(yī)學(xué)、遺傳學(xué)、生物化學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)方面的專家進(jìn)行合作研究，按藥物非臨床研究管理規(guī)范GLP進(jìn)行管理。組織藥理、毒理（包括一般毒理和特殊毒理）、病理、藥代動(dòng)力學(xué)和毒代動(dòng)力學(xué)、藥物分析、臨床化學(xué)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、生物統(tǒng)計(jì)、質(zhì)量保證等部門有關(guān)人員進(jìn)行討論，分階段

做出評(píng)價(jià)［8］。生測(cè)在這方面可以參

加開發(fā)研究或進(jìn)行技術(shù)指導(dǎo)。

藥物動(dòng)力學(xué)研究，通常需要從動(dòng)物體液或組織器官勻漿中分離、鑒定和檢測(cè)代謝后的原粉及其他代謝產(chǎn)物。但是，將服藥動(dòng)物按指定時(shí)間間隔處死，測(cè)定隨時(shí)間變化的血藥濃度，不僅動(dòng)物用量大，而且常因動(dòng)物個(gè)體差異無法得到可靠結(jié)果，也無法在同一動(dòng)物重復(fù)實(shí)驗(yàn)確證。處死動(dòng)物的代謝產(chǎn)物也只能反映被處死時(shí)的結(jié)果，無法了解藥物代謝的全過程。有學(xué)者報(bào)道，采用微透析取樣技術(shù)，可在活的動(dòng)物不同部位重復(fù)取樣，用微柱液相色譜［9］或毛細(xì)管電泳［10］進(jìn)行分析，測(cè)定藥物的吸收、分布、代謝和排泄情況［11］。

自動(dòng)進(jìn)取樣裝置和計(jì)算機(jī)工作站應(yīng)用于藥理實(shí)驗(yàn)的探討，使藥品生物測(cè)定趨向微量、靈敏、專屬、簡便、快速和自動(dòng)化的方向發(fā)展。

綜上所述，藥品生物測(cè)定是藥物分析的重要組成部分，是不可缺的檢測(cè)專業(yè)，現(xiàn)代儀器的大量使用，不僅不會(huì)影響其發(fā)展，而是如虎添翼，讓藥品生物測(cè)定展示出新的前景。

［參考文獻(xiàn)］

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9 Chen AQ，Lunte CE.Microdialysis sampling coupled on-line to fast microbore liquid chromatography.J Chromatogr，1995，691（1-2）:29.

第4篇：藥品微生物研究范文

關(guān)鍵詞 藥品不良反應(yīng) 回顧性分析 合理用藥

近年來，隨著《藥品不良反應(yīng)報(bào)告和監(jiān)測(cè)管理辦法》等法律法規(guī)在醫(yī)療機(jī)構(gòu)的貫徹實(shí)施，醫(yī)院領(lǐng)導(dǎo)和臨床醫(yī)護(hù)人員對(duì)藥品不良反應(yīng)的重視程度不斷提高，不良反應(yīng)報(bào)告和監(jiān)測(cè)工作呈良好發(fā)展趨勢(shì)。為進(jìn)一步探討我院藥品不良反應(yīng)發(fā)生規(guī)律和特點(diǎn)，研究不良反應(yīng)發(fā)生的因素，尋求避免或減少不良反應(yīng)的方法，切實(shí)保障患者用藥安全、有效，本文對(duì)我院收集的41 例不良反應(yīng)報(bào)告進(jìn)行回顧性分析和討論。

1 資料來源與方法

1.1 資料來源

所有資料來源于2006年我院藥劑科收集并呈報(bào)上海市藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心的報(bào)告41例。

1.2 方法

2006年度收集的不良反應(yīng)報(bào)告，按性別、年齡、藥品類別、不良反應(yīng)臨床表現(xiàn)類型、給藥途徑及不良反應(yīng)結(jié)果等進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 病例資料

在 41例的報(bào)告中，男性18例，女性23例，女性比例略高于男性（1.277 8∶1）。在各年齡段患者分布情況中，年齡最小為31歲，最大為92歲。

2.2 不良反應(yīng)涉及的藥品種類

按照藥品的作用、用途分類，對(duì)不良反應(yīng)涉及的藥物進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)（表1）。

2.3 不良反應(yīng)涉及的抗微生物藥品種類

從表1可以看出，許多藥物都會(huì)引起不良反應(yīng)，其中以抗微生物藥病例報(bào)告居多，占總報(bào)告數(shù)的46.35%。對(duì)不良反應(yīng)涉及的抗微生物藥品種類及構(gòu)成比進(jìn)行的分類統(tǒng)計(jì)見表2。

注：由于有些病例報(bào)告同時(shí)涉及兩個(gè)藥品，故大于總數(shù)19

2.4 不良反應(yīng)累及系統(tǒng)(器官)及其臨床表現(xiàn)

藥品不良反應(yīng)累及系統(tǒng)(器官)及其臨床表現(xiàn)見表3。

*有些病例的藥品不良反應(yīng)同時(shí)累及多個(gè)系統(tǒng)(器官)，所以總計(jì)例數(shù)為46例

2.5 不同給藥途徑引起不良反應(yīng)的例數(shù)及其構(gòu)成比

各種給藥途徑引起的不良反應(yīng)如下：靜脈滴注14例(34.15%)；口服26例(63.42%)；肌內(nèi)注射1例(2.44%)。

2.6 藥品不良反應(yīng)的結(jié)果

不良反應(yīng)的結(jié)果有治愈、好轉(zhuǎn)、后遺癥及死亡等情況。絕大多數(shù)不良反應(yīng)病例在停用可疑藥品并接受對(duì)癥治療后會(huì)有好轉(zhuǎn)或治愈，只有極少數(shù)嚴(yán)重的不良反應(yīng)可能導(dǎo)致后遺癥甚至死亡。對(duì)本組41例報(bào)告結(jié)果進(jìn)行的統(tǒng)計(jì)分析見表4。

3 討論

3.1 性別、年齡對(duì)藥品不良反應(yīng)的影響

從統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)來看，41例不良反應(yīng)報(bào)告中女性高于男性。因?yàn)槲以簽槔夏曜o(hù)理醫(yī)院，老年人由于肝、腎功能減退，藥品代謝速率慢、血漿蛋白含量低等，同時(shí)還患有多種慢性疾病，合并用藥增多。因此不良反應(yīng)的發(fā)生率一般較高，而且一旦發(fā)生，情況相對(duì)比較嚴(yán)重，再加上原患疾病的影響，往往使病程延長甚至造成嚴(yán)重后果。因此，在臨床實(shí)踐中應(yīng)考慮年齡因素對(duì)不良反應(yīng)的影響，加強(qiáng)對(duì)老年病人的用藥監(jiān)護(hù)。

3.2 不同給藥途徑對(duì)藥品不良反應(yīng)的影響

在41例不良反應(yīng)中，14例是由靜脈滴注引起(占34.15%)，26例由口服引起(占63.42%)，1例由肌注引起。這可能與老年人用藥習(xí)慣有關(guān)。盡管口服占的比例比靜脈滴注高，但是不應(yīng)忽視靜脈滴注引起的藥品不良反應(yīng)。因?yàn)殪o脈給藥可使藥品直接進(jìn)入人體，且靜脈給藥產(chǎn)生的不良反應(yīng)的直接誘因較多，如內(nèi)毒素、pH值、滲透壓等，因此在臨床上應(yīng)引起充分重視［1］。

3.3 抗微生物藥的合理使用

在41例不良反應(yīng)報(bào)告中，抗微生物藥引起的有19例，占總數(shù)的46.35%。不良反應(yīng)臨床表現(xiàn)有過敏反應(yīng)、高熱、頭痛等全身性損害，皮疹、瘙癢等皮膚及其附件的損害，惡心、嘔吐等胃腸道損害，頭痛、頭暈、失眠等神經(jīng)系統(tǒng)損害，還有肝酶升高等?？刮⑸锼幤返亩喾N不良反應(yīng)臨床表現(xiàn)與其在臨床上廣泛應(yīng)用有著密切的關(guān)系［1］。41例不良反應(yīng)病例涉及抗微生物藥品以喹諾酮類、抗結(jié)核病藥、頭孢菌素類、硝基咪唑類、青霉素類為主。

不良反應(yīng)的發(fā)生與藥品的使用頻率高、劑量大有關(guān)。大量使用抗菌藥品，使患者體內(nèi)菌群失調(diào)，增加了疾病治療的難度。在此提醒廣大的臨床醫(yī)師：必須嚴(yán)格按照《抗菌藥物臨床應(yīng)用指導(dǎo)原則》使用抗菌藥物，減少或避免無明顯指征用藥、預(yù)防用藥、聯(lián)合用藥、用藥劑量過大、療程過長等情況出現(xiàn)。以降低不良反應(yīng)的發(fā)生率。

參考文獻(xiàn)

第5篇：藥品微生物研究范文

【關(guān)鍵詞】 硝酸咪康唑搽劑；微生物限度檢查；方法學(xué)驗(yàn)證

微生物限度檢查法是檢查非規(guī)定制劑及原料、輔料受微生物污染程度的方法，檢查項(xiàng)目包括細(xì)菌數(shù)、真菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查[1]。但具有抑菌成分的藥品由于其抑菌活性的干擾，常規(guī)檢查結(jié)果不能真實(shí)地反映出藥品中污染微生物的情況，必須先消除供試品中的抑菌活性，再根據(jù)《中國藥典》規(guī)定的方法進(jìn)行檢查，并必須對(duì)所采取的檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證，以確認(rèn)抑菌活性的消除和檢查方法的可靠性。具有抑菌作用的藥品，每個(gè)品種抑菌效果不同，因此適合各個(gè)品種的微生物限度檢查法也不同。

1材料

1.1菌種大腸埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B） 44 102]， 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B） 26 003]， 枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）[CMCC（B）63 501]， 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B） 26 003]，銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC（B）10 104]白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC（F） 980011]， 黑曲霉（Asperg illus niger）[CMCC（F） 98003]，由廣東生物研究所提供，菌種代數(shù)均為第3代。

1.2培養(yǎng)基及試劑pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液、0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液、營養(yǎng)肉湯、改良馬丁培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、虎紅培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、溴化十六烷基三甲銨瓊脂、二鹽酸二甲基對(duì)苯二胺試劑、PDP瓊脂培養(yǎng)基、三氯甲烷、甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基和革蘭氏染色劑。

1.3樣品硝酸咪康唑搽劑，阿特維斯（佛山）制藥有限公司，批號(hào)：0606950，成分：硝酸咪康唑、玫瑰麝香香精、乙醇、二甲基亞砜。

2方法與結(jié)果

2.1菌液制備[1]

2.1.1取經(jīng)37 ℃ 培養(yǎng)18～24 h的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌與大腸埃希菌的肉湯培養(yǎng)物1 mL，加入9 mL 0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋并制成每1 mL中含菌數(shù)50～100 cfu的菌懸液，做活菌計(jì)數(shù)。

2.1.2取經(jīng)25 ℃培養(yǎng)18～24 h的白色念珠菌液體培養(yǎng)物1 mL，加入9 mL 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋并制成每1 mL中含菌數(shù)50～100 cfu的菌懸液，做活菌計(jì)數(shù)。

2.1.3接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5～7 d，加入3～5 mL 0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1 mL含孢子數(shù)50～100 cfu的孢子懸液，做活菌計(jì)數(shù)。

2.2供試液的制備[2]取本品10 mL，加pH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液至100 mL，混勻，作為1∶10的供試液。

2.3驗(yàn)證方法

①試驗(yàn)組：取供試液10 mL到薄膜過濾器中，用無菌的0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖溶液沖洗3次，每次100 mL， 并在最后1次沖洗液中加入1 mL的試驗(yàn)菌液（50～100 cfu/mL）沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于預(yù)先制備好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或虎紅培養(yǎng)基平板上，置30～35 ℃培養(yǎng)48 h或23～28 ℃培養(yǎng)72 h。記錄菌落數(shù)。試驗(yàn)組的菌回收率=（試驗(yàn)組平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)）÷菌液組的平均菌落數(shù)×100%。

②菌液組：在過濾器中預(yù)先加入大約20 mL的無菌0.9%氯化鈉溶液，再吸取1 mL的試驗(yàn)菌液（50～100 cfu/mL）到過濾器中，過濾。再用100 mL無菌的0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗1次，取出濾膜，菌面朝上貼于預(yù)先制備好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或虎紅培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，培養(yǎng)方法同試驗(yàn)組。

2.3.2控制菌檢查方法驗(yàn)證

①試驗(yàn)組：取供試液10 mL到薄膜過濾器中， 用無菌的0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗3次，每次100 mL， 并在最后一次沖洗液中加入50～100 cfu的試驗(yàn)菌（驗(yàn)證銅綠假單胞菌時(shí)，試驗(yàn)菌為銅綠假單胞菌），沖洗后取出濾膜放入預(yù)先制備好的相應(yīng)培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查法檢查。

②陰性菌對(duì)照組：方法同試驗(yàn)組，試驗(yàn)菌改為50～100 cfu陰性對(duì)照菌（2個(gè)控制菌驗(yàn)證的陰性對(duì)照菌均為大腸埃希菌）。

③菌液組 ：在過濾器中預(yù)先加入約20 mL的無菌0.9%氯化鈉溶液，在吸取50～100 cfu試驗(yàn)菌到薄膜過濾器中，用100 mL 0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗1次。沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于預(yù)先制備好營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，置（36±1）℃培養(yǎng)48 h，記錄活菌數(shù)。

3討 論

硝酸咪康唑搽劑為廣譜抗真菌藥，主要含有硝酸咪康唑、乙醇和二甲基亞砜等成分，對(duì)皮膚癬菌、念珠菌等有抗菌作用，對(duì)某些細(xì)菌也有一定抑制作用。《中國藥典》2005版規(guī)定，對(duì)藥品在微生物限度檢查時(shí)，其方法應(yīng)通過驗(yàn)證，以確認(rèn)供試品的抑菌活性已被消除而保證檢查方法的可靠性。從本品的微生物限度檢查法的建立研究可見，選用薄膜過濾法聯(lián)用0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液作沖洗劑來檢查本品的細(xì)菌數(shù)、真菌、酵母菌數(shù)及控制菌（銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌）的方法有效，在細(xì)菌總數(shù)、真菌及酵母菌計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，試驗(yàn)菌回收率均能達(dá)到70%以上；銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌檢查實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)組呈陽性反應(yīng)，陰性菌對(duì)照組呈陰性反應(yīng)。本文結(jié)果可為同類產(chǎn)品的微生物限度檢查方法驗(yàn)證提供科學(xué)的依據(jù)。

【參考文獻(xiàn)】

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥：二部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄XIJ.

第6篇：藥品微生物研究范文

[關(guān)鍵詞]口服抗菌感染藥；利用分析

口服抗感染藥物以其方便、快捷、經(jīng)濟(jì)而受到廣大患者及醫(yī)護(hù)人員的青睞，成為在臨床中使用范圍最廣、使用頻數(shù)最高的藥品，因其絕大多數(shù)為醫(yī)保品種目錄，在各類承擔(dān)醫(yī)保的醫(yī)院使用率更高。而近年來抗感染藥物及各類抗生素的濫用導(dǎo)致了嚴(yán)重的后果，最近印度等地出現(xiàn)的超級(jí)細(xì)菌就是最好的例證，因此，臨床合理使用各類抗生素不僅關(guān)系到患者個(gè)體的健康利益，同時(shí)也關(guān)系到整個(gè)世界的環(huán)境利益。我們采用藥物利用指數(shù)（DUI）、藥物日均費(fèi)用（DDDc）、用藥頻數(shù)（DDDs）、平均治療日數(shù)（ATD）等指標(biāo)[1-2]對(duì)我院2010年1月至12月的門診口服抗感染藥物的利用情況進(jìn)行分析，總結(jié)其存在的問題，為臨床合理用藥提供參考，以促進(jìn)臨床更合理、經(jīng)濟(jì)、有效地使用抗菌藥物。

1資料與方法：

抽取我院2010年1月至12月的門診抗感染藥物處方共計(jì)6685份進(jìn)行分析，設(shè)計(jì)抗感染藥物利用調(diào)查表，每張?zhí)幏叫枰y(tǒng)計(jì)的內(nèi)容包括：藥品名稱、用量、使用時(shí)間、價(jià)格等內(nèi)容。將抽取出的處方按照上述表格內(nèi)容逐項(xiàng)填寫，最后總計(jì)出各種抗感染藥物的用藥人數(shù)、用藥量、用藥天數(shù)及金額，進(jìn)行綜合分析。根據(jù)以上數(shù)據(jù)計(jì)算下列指標(biāo)：1限定日劑量（DDD）依次參考世界衛(wèi)生組織推薦的限定日劑量、中國藥典、藥品說明書以確定；2用藥頻數(shù)（DDDs）=用藥量／DDD、藥物日均費(fèi)用（DDDC）＝金額／DDDs、DUI=DDDs／用藥天數(shù)、ATD=DDDs／實(shí)際用藥人數(shù)。

2結(jié)果：

見表1

3討論

微生物感染性疾病是臨床較為常見的疾病，抗感染藥物即成為臨床使用較為廣泛、且品種繁多的一大類藥物。因?yàn)橛辛烁鞣N各樣的抗菌藥物，在臨床治療中，感染類疾病的預(yù)防和治療就有了更多的選擇，這有利于救治嚴(yán)重感染及提高感染治療水平。隨著抗菌藥物的使用日益廣泛，抗菌藥物的濫用所導(dǎo)致的細(xì)菌耐藥性及耐藥菌株也以驚人的速度發(fā)展著。成為了一個(gè)世界性的難題[3]。因此，合理使用抗感染藥物成為了每個(gè)醫(yī)務(wù)工作者所必須掌握的基本知識(shí)，同時(shí)醫(yī)院亦應(yīng)建立建全抗菌藥物的管理制度。本組資料中，DUI小于1的藥品有11種，大于1的有4種，等于1的無，這說明門診用口服抗感染藥的藥量普遍偏低，但在合理范圍之內(nèi)；但是采用ATD值衡量用藥合理性則出現(xiàn)了較大的偏差，大于4.5的藥品有2種，小于3.0的有12種。大多數(shù)藥物的ATD值明顯低于藥品本身所規(guī)定的療程日數(shù)，顯示抗感染藥物用藥不合理[4]。當(dāng)然這一情況的出現(xiàn)與門診接診特點(diǎn)有關(guān)。但是抗菌藥物量和療程較藥品本身規(guī)定的量和療程低應(yīng)該是比較普遍的現(xiàn)象。我們要認(rèn)識(shí)到抗菌藥物的使用量和療程和其產(chǎn)生耐藥性有很大的關(guān)系，微生物有自己的生活習(xí)性及生長發(fā)育周期，用藥劑量以及用藥療程的確定是根據(jù)微生物的生長發(fā)育周期來制定的，如果在臨床使用過程中，擅自減少用量及使用療程，會(huì)讓微生物有更多的機(jī)會(huì)發(fā)生再次繁殖使患者病情復(fù)發(fā)，同時(shí)給微生物產(chǎn)生耐藥性提供機(jī)會(huì)。因此，臨床醫(yī)生要對(duì)這個(gè)問題引起足夠的重視，同時(shí)要教育患者一定要按照用量和療程服用抗感染藥物，切不可癥狀緩解就停止服藥，以免造成微生物感染的復(fù)發(fā)及增加微生物產(chǎn)生耐藥性的幾率。

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第7篇：藥品微生物研究范文

【關(guān)鍵詞】微生物學(xué);自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn);教學(xué)改革

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)是微生物學(xué)教學(xué)的重要組成部分，通過微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)，不僅能使學(xué)生了解和掌握微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本方法、基本操作技能，而且也為學(xué)生深入學(xué)習(xí)微生物學(xué)及相關(guān)學(xué)科奠定了基礎(chǔ)。同時(shí)，對(duì)培養(yǎng)學(xué)生的動(dòng)手能力、創(chuàng)新思維能力及理論聯(lián)系實(shí)際的能力起著非常重要的作用[1]。所以，微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)是培養(yǎng)優(yōu)秀生命科學(xué)人才的一個(gè)重要環(huán)節(jié)[2]。以往我校開設(shè)的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)主要包括顯微鏡技術(shù)、微生物染色技術(shù)等微生物學(xué)基本實(shí)驗(yàn)技能。由于這些傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)多以教師為中心，學(xué)生沒有參與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備，課堂上只是很機(jī)械地模仿和驗(yàn)證，極大的束縛了學(xué)生的創(chuàng)造性思維，不利于學(xué)生獨(dú)立思考、綜合分析問題和創(chuàng)新意識(shí)的培養(yǎng)[3]。為了改善微生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)的效果，提高學(xué)生的自主能動(dòng)性，筆者在完成微生物基本操作技能的教學(xué)后，嘗試開設(shè)了自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。所謂自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)，是指學(xué)生自己選題，自行設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案、準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)儀器和藥品，獨(dú)立進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，獨(dú)立書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告，總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的實(shí)驗(yàn)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程由學(xué)生獨(dú)立設(shè)計(jì)和操作，實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問題由學(xué)生自己設(shè)法解決。因此，大大提高了學(xué)生的積極性和能動(dòng)性，提高學(xué)了生分析問題和解決問題的能力，同時(shí)也培養(yǎng)了學(xué)生的創(chuàng)新意識(shí)和團(tuán)隊(duì)合作意識(shí)。經(jīng)過幾年的教學(xué)實(shí)踐，取得了良好的效果?，F(xiàn)將開展學(xué)生自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)的一些做法和體會(huì)報(bào)告如下。

1、自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的實(shí)施過程

1.1學(xué)生分組、選題

根據(jù)學(xué)生的學(xué)號(hào)和實(shí)驗(yàn)座次進(jìn)行分組，每組3～5人[4]。實(shí)驗(yàn)以小組為單位，小組成員通過討論確定感興趣的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。在這個(gè)環(huán)節(jié)，教師應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的條件和學(xué)生的能力水平，結(jié)合學(xué)生所學(xué)專業(yè)，對(duì)學(xué)生的選題進(jìn)行指導(dǎo)，既保證所選擇的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目不能過大過難，超出學(xué)生的基本操作能力和知識(shí)水平，使學(xué)生喪失信心，也不能過小過于簡單，難以達(dá)到“設(shè)計(jì)性”實(shí)驗(yàn)的目的。選題的一般原則是以學(xué)生已經(jīng)掌握的基本知識(shí)為基礎(chǔ)，有利于學(xué)生將已學(xué)過的知識(shí)系統(tǒng)化和實(shí)用化，有利于啟發(fā)學(xué)生探究學(xué)科理論。

1.2查閱文獻(xiàn)、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案

每個(gè)小組在確定實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目后，通過圖書館、網(wǎng)絡(luò)等查閱有關(guān)資料、文獻(xiàn)等，對(duì)所查閱的文獻(xiàn)資料進(jìn)行歸納總結(jié)，制定詳細(xì)的實(shí)施方案。在完成實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)后，教師組織學(xué)生在教室中利用多媒體向全班同學(xué)展示實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，包括實(shí)驗(yàn)的目的、原理、步驟、可能遇到的問題及解決的措施等，與全班同學(xué)進(jìn)行交流和溝通，使每個(gè)同學(xué)了解各個(gè)組的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、原理和方法，拓展自己的知識(shí)面。

1.3實(shí)驗(yàn)操作

學(xué)生按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，獨(dú)立進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。微生物實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基、染色劑、藥品等較多，且一般要進(jìn)行微生物培養(yǎng)，時(shí)間跨度比較大。因此，實(shí)驗(yàn)時(shí)要求小組成員科學(xué)安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間，合理分工、通力合作，同時(shí)在使用公共儀器設(shè)備和藥品等方面與其他組及時(shí)溝通，以免引起不必要的麻煩影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。在實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)意外或遇到困難，盡量獨(dú)立地處理、解決，必要時(shí)指導(dǎo)教師給予適當(dāng)?shù)闹笇?dǎo)。在實(shí)驗(yàn)的同時(shí)，小組成員要做好各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的原始記錄，已備出現(xiàn)問題時(shí)查找原因和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

1.4總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)對(duì)所記錄的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、歸納和分析，并按照科研論文的要求和格式撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。如時(shí)間允許，教師可組織學(xué)生在多媒體教室內(nèi)進(jìn)行論文答辯。

1.5考核評(píng)價(jià)

自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)考核評(píng)價(jià)應(yīng)該對(duì)學(xué)生的設(shè)計(jì)思路、操作能力、綜合處理問題和分析問題的能力等做重點(diǎn)考察。在實(shí)驗(yàn)之前就應(yīng)該向?qū)W生公布考評(píng)要求，考評(píng)指標(biāo)要量化。

2、開設(shè)學(xué)生自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)應(yīng)該注意的問題

自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)要求學(xué)生獨(dú)立的設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，調(diào)動(dòng)了學(xué)生的積極性和能動(dòng)性，提高了學(xué)生分析問題和解決問題的能力，同時(shí)也培養(yǎng)了學(xué)生的創(chuàng)新意識(shí)和團(tuán)隊(duì)合作精神。然而，自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)的開設(shè)也需要注意一些問題：

首先，自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間往往比較長，且不同組同學(xué)的實(shí)驗(yàn)時(shí)間一般不同，很多實(shí)驗(yàn)可能會(huì)安排到周末或晚上。所以，為了保證自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的教學(xué)效果，保證實(shí)驗(yàn)室的安全，維持實(shí)驗(yàn)室的正常運(yùn)轉(zhuǎn)，要求實(shí)驗(yàn)教師跟蹤每一組學(xué)生的實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，這要比普通的實(shí)驗(yàn)付出更多的時(shí)間和精力。

其次，自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)時(shí)間較長，同時(shí)同學(xué)們還要兼顧其他課程，所以只能利用課余時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，這就要求實(shí)驗(yàn)室必須向?qū)W生完全開放。實(shí)驗(yàn)室的開放提高了實(shí)驗(yàn)室及其儀器設(shè)備的利用率[5]，但也提高了實(shí)驗(yàn)教師的工作量，增加了實(shí)驗(yàn)室的安全隱患，這就需要對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行規(guī)范化的管理，以保證實(shí)驗(yàn)的順利完成。

第三，在學(xué)生分組時(shí)，盡量避免自愿分組。自愿分組往往會(huì)出現(xiàn)學(xué)習(xí)好的一組、關(guān)系好的一組、被剩下的一組等現(xiàn)象，導(dǎo)致小組之間的水平相差較大，實(shí)驗(yàn)效果參差不齊。所以，應(yīng)采用按座次分組的原則，如每一排4個(gè)同學(xué)為一組，實(shí)現(xiàn)了不同學(xué)習(xí)成績的同學(xué)隨機(jī)搭配，同時(shí)規(guī)定自己的物品放自己的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)用品的科學(xué)管理，避免了物品被誤用等混亂現(xiàn)象。

第四，自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)是以小組為單位進(jìn)行的，但實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)有的學(xué)生不動(dòng)手不動(dòng)腦只作旁觀者，更有個(gè)別學(xué)生鉆了自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)難以考勤的空子干脆不來實(shí)驗(yàn)。這些都背離了開展自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)的初衷。因此，需建立一套科學(xué)有效的實(shí)驗(yàn)過程評(píng)價(jià)體系。

盡管自主設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)在實(shí)施中存在一些不足，但我校多年的實(shí)踐證明，它有利于學(xué)生創(chuàng)新意識(shí)和創(chuàng)新能力的培養(yǎng)，有利于培養(yǎng)學(xué)生的動(dòng)手能力和實(shí)際應(yīng)用能力，有利于學(xué)生綜合素質(zhì)的提高，應(yīng)該是實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革的一個(gè)方向。我們今后將繼續(xù)開展微生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法的研究，不斷嘗試設(shè)計(jì)性和綜合性實(shí)驗(yàn)教學(xué)，緊密結(jié)合學(xué)生專業(yè)和社會(huì)生活的實(shí)際，以增強(qiáng)知識(shí)的實(shí)用性，從而提高學(xué)生的綜合能力。

參考文獻(xiàn)：

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第8篇：藥品微生物研究范文

前言：如今，醫(yī)院的醫(yī)療水平隨著我國醫(yī)院各種醫(yī)療設(shè)備的不斷完善以及醫(yī)務(wù)工作人員素質(zhì)的不斷提高正呈現(xiàn)日益向好的態(tài)勢(shì)，但是有一個(gè)問題，卻不容忽視，而且正變得日益嚴(yán)峻，那就是醫(yī)院的關(guān)于感染方面的檢測(cè)問題，醫(yī)院作為病人進(jìn)進(jìn)出出的公共場(chǎng)所，而且大的醫(yī)院的每天的人流量很多，如果對(duì)病人以及病人家屬之間造成了相互之間的傳染，這樣無論是對(duì)醫(yī)院，還是對(duì)病人家屬來說，都造成了一定的困擾，所以，這樣的情況對(duì)于醫(yī)院的感染檢測(cè)方面就提出了巨大的考驗(yàn)，那么如何解決這一棘手的問題呢？

從醫(yī)院的發(fā)展以及如今面臨的情況來說，現(xiàn)在的各個(gè)醫(yī)院都會(huì)面臨許多難題值得思考，而且有些問題從醫(yī)學(xué)的角度上來說都解釋困難，如近就有這樣的一個(gè)人們關(guān)注的問題需要解決，那就是如何做好醫(yī)院的感染檢測(cè)工作，雖然，各大醫(yī)院的管理者也知道這個(gè)事情的嚴(yán)重性，而且在工作中也對(duì)這一工作進(jìn)行了強(qiáng)調(diào)和安排，但是現(xiàn)實(shí)的情況卻是運(yùn)用傳統(tǒng)的醫(yī)院感染檢測(cè)方法雖然也可以在一定程度上對(duì)于醫(yī)院的檢測(cè)工作起到一定的效果，但是，醫(yī)院偶爾還是會(huì)出現(xiàn)病毒傳染的現(xiàn)象，那么如何才能有效的解決這一難題呢，有一種現(xiàn)代的醫(yī)院感染檢測(cè)技術(shù)可以解決這個(gè)難題，并且通過臨床微生物學(xué)進(jìn)行醫(yī)院感染檢測(cè)是已經(jīng)被證明了的一種科學(xué)的現(xiàn)代化的感染檢測(cè)方式，它的出現(xiàn)對(duì)于醫(yī)院的感染檢測(cè)工作可以說是效果明顯，下面，我們就深刻的解剖臨床微生物學(xué)，具體的來闡釋臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的內(nèi)容和作用，以供大家參考。

1.臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的概念和特點(diǎn)

臨床微生物學(xué)作為現(xiàn)在醫(yī)學(xué)的一個(gè)重要組成部分，其在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中也是扮演著一個(gè)重要的角色，牧俅參⑸物學(xué)的本質(zhì)上來說，臨床微生物學(xué)具體又包括細(xì)菌學(xué)、真菌學(xué)以及病毒學(xué)等，但是無論是具體到哪門學(xué)科，臨床微生物學(xué)的主要作用是通過對(duì)微生物的外形、生命組成結(jié)構(gòu)、以及活動(dòng)規(guī)律等特點(diǎn)進(jìn)行研究和總結(jié)，然后通過總結(jié)的規(guī)律，利用其微生物的特點(diǎn)，用來對(duì)感染性的疾病進(jìn)行預(yù)防和治療，所以說，臨床微生物學(xué)對(duì)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)之間的聯(lián)系和運(yùn)用構(gòu)成了一個(gè)紐帶的作用，為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展也是注入了新的力量。

2.臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)在醫(yī)院感染檢測(cè)中的運(yùn)用和發(fā)揮的作用

臨床微生物學(xué)如今已被各個(gè)醫(yī)院認(rèn)識(shí)并把臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)已實(shí)際的應(yīng)用于醫(yī)院的感染檢測(cè)中，那么臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)對(duì)與醫(yī)院的感染檢測(cè)到底能發(fā)揮多大的作用呢，而且臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)又是在感染檢測(cè)的那個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮作用呢，下面，我們就這些問題進(jìn)行詳細(xì)的講解和說明，使得這些問題可以迎刃而解。

2.1 臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)在病原體診斷上的作用

當(dāng)前，我國開始愈加的重視臨床微生物學(xué)的發(fā)展，而且也有研究發(fā)現(xiàn)，臨床微生物學(xué)對(duì)于病原體的診斷上發(fā)揮著非常重要的作用，由于在臨床治療時(shí)，包括藥物的抗菌素和各種激素等，在給病人治療結(jié)束時(shí)，由于當(dāng)時(shí)的衛(wèi)生處理的不到位，或者說從治療本身上來講，為病人注入抗菌藥品的方法不對(duì)等方面的因素，導(dǎo)致抗菌藥品沒有被徹底的處理掉，這樣就為醫(yī)院的感染埋下了隱患，所以從傳統(tǒng)的病原體診斷方式來說，這種方法有許多的不確定性，而通過臨床微生物學(xué)的檢驗(yàn)，因?yàn)檫@種方式從源頭上著手醫(yī)院感染的檢測(cè)，所以，這種方式可以有效的對(duì)醫(yī)院的感染檢測(cè)提供源頭上的支持，雖然，我國在這方面的技術(shù)還沒有成熟，但是以后運(yùn)用臨床微生物學(xué)進(jìn)行病原體的檢測(cè)，是大勢(shì)所趨，有一種現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的方式方法。

2.2 臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)在檢測(cè)細(xì)胞耐藥性時(shí)發(fā)揮的作用

經(jīng)過對(duì)醫(yī)院進(jìn)行細(xì)致的調(diào)查和分析，我們的多收醫(yī)院存在這樣一種亂象，病人在通過抗菌藥物進(jìn)行治療時(shí)，由于抗菌藥物使用不當(dāng)，導(dǎo)致細(xì)胞在耐藥性方面的檢測(cè)時(shí)，存在諸多解釋不了的情況，這樣對(duì)于病人的合理治療又提出了相應(yīng)的挑戰(zhàn)，因此合理的使用抗菌藥物，對(duì)于病人恢復(fù)健康很重要，但是正是由于醫(yī)生在抗藥性方面沒有把握好，所以目前的這種問題如果從傳統(tǒng)的角度去解決，實(shí)際上是困難重重的，因此，利用臨床微生物學(xué)進(jìn)行檢測(cè)，倒是一個(gè)非常合理的解決辦法，臨床微生物學(xué)進(jìn)行檢驗(yàn)，可以從病人的組織細(xì)胞出發(fā)，及時(shí)準(zhǔn)確的找到病原體的病變結(jié)果，然后再對(duì)病原體分析其病變的原因，從而有效的解決細(xì)胞在耐藥性方面的錯(cuò)誤判斷，對(duì)于病人恢復(fù)健康提供了理論上的依據(jù)，從而行之有效的進(jìn)行治療，很好的解決了這一難題。

2.3 臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)在檢測(cè)醫(yī)務(wù)人員感染情況的作用

通過研究，我們發(fā)現(xiàn)，在醫(yī)院的感染群體中，不只是局限于病人的傳染途徑，醫(yī)務(wù)人員也有傳染的可能，因?yàn)殚L期和病人進(jìn)行接觸，所以有些病原體通過空氣或者其他途徑附上了醫(yī)務(wù)人員的物品中，從一個(gè)事例，我們不難發(fā)現(xiàn)，因?yàn)橛幸粋€(gè)科室經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)醫(yī)院感染病毒的情況，后來才知道，是病毒通過科室里醫(yī)務(wù)人的辦公桌為傳染途徑的，因此，利用臨床微生物檢測(cè)的方法，對(duì)各個(gè)科室進(jìn)行細(xì)致的檢驗(yàn)是很有必要的，從而從傳播途徑上有效的遏制這一傳播源的滋生，很好的解決了這一難題。

總結(jié)

通過上文的敘述和說明，我們不難發(fā)現(xiàn)，臨床微生物學(xué)在醫(yī)院感染檢測(cè)中發(fā)揮的作用不容小覷，臨床微生物學(xué)不僅在病原體的診斷上還是在細(xì)胞耐藥性的判斷包括及病原體的傳播途徑上都可以利用其特點(diǎn)，有效的對(duì)醫(yī)院感染的各個(gè)方面進(jìn)行檢驗(yàn)和判斷，所以臨床微生物檢驗(yàn)無論是對(duì)病人還是對(duì)醫(yī)院的醫(yī)務(wù)人員來說，對(duì)他們的健康都有一定的保障作用，所以，相信在不僅的將來，當(dāng)我國的臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)成熟的時(shí)候，可以有效的加以利用，保障人們身體的健康，保障醫(yī)院的健康運(yùn)行。

參考文獻(xiàn)

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第9篇：藥品微生物研究范文

微生物限度檢查法及其方法驗(yàn)證的主要特點(diǎn)在于檢驗(yàn)對(duì)象本身的特殊性。其特殊性為：（1）能繁殖的活細(xì)胞生物。該活細(xì)胞處于不穩(wěn)定狀態(tài)，可隨存放時(shí)間延長而亡，也可在適宜條件下大量繁殖。而檢測(cè)條件的狀況不一可使其生長情況各異，因而常出現(xiàn)同批樣品在不同條件下檢測(cè)，有不同的結(jié)果。但在保存條件相對(duì)穩(wěn)定時(shí)，微生物在一定時(shí)間內(nèi)處于動(dòng)態(tài)平衡，在標(biāo)準(zhǔn)化的條件下操作結(jié)果仍可予與正確評(píng)估。（2）不確定性。藥品受微生物的污染，其種類可以多樣，污染情況依生產(chǎn)、設(shè)備、原料、管理、劑型等條件而定，非藥品本身固有。被污染批次中的不合格品是一個(gè)隨機(jī)變量。（3）分布的不均勻性。這種不均勻性源于污染源的復(fù)雜性，如原輔料污染，工藝污染，空間污染和操作人員污染。再者，微生物具有簇團(tuán)性，簇團(tuán)大小，緊密程度是可遺傳的，簇團(tuán)的分散性差異極大，該特點(diǎn)無疑強(qiáng)化了不均勻性。

除了上述檢驗(yàn)對(duì)象本身的特殊性外，微生物限度檢查法及其方法驗(yàn)證程序繁瑣，檢驗(yàn)周期長，干擾因素多，容易造成檢驗(yàn)結(jié)果誤差，現(xiàn)將主要原因分析如下。

1 標(biāo)準(zhǔn)菌株的選擇和保存不當(dāng)引起的實(shí)驗(yàn)誤差

實(shí)驗(yàn)中的對(duì)照菌株必須為標(biāo)準(zhǔn)菌株，其生物學(xué)特性應(yīng)典型穩(wěn)定，其細(xì)胞群應(yīng)具有相似性和合適的培養(yǎng)，儲(chǔ)存條件。如形態(tài)變異、菌落變異、耐藥性變異或受損等均可使平板中細(xì)菌呈叢集、分散不均或死亡。2005版藥典[1]要求所用標(biāo)準(zhǔn)菌株的傳代次數(shù)不得超過五代。

實(shí)驗(yàn)中所用對(duì)照菌均為無芽孢桿菌，以菌液狀態(tài)存活的時(shí)間都不長。有研究表明[2]，分別用0.9%無菌氯化鈉溶液和氯化鈉-蛋白胨緩沖液制備的不同濃度菌液，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌在3天內(nèi)活菌數(shù)下降約40%，5天內(nèi)下降約70%，用0.9%無菌氯化鈉溶液和氯化鈉-蛋白胨緩沖液作為稀釋液結(jié)果無明顯差異（冰箱4℃保藏）。建議采用新鮮培養(yǎng)物。

2 不同供試液制備方法造成的實(shí)驗(yàn)誤差

應(yīng)按供試品的理化特性與生物學(xué)特性采取適宜的方法制備供液，制備供試液時(shí)，力求均勻分散。測(cè)定結(jié)果與勻質(zhì)方式及條件極為有關(guān)。如有菌，分散充分時(shí)菌落生長數(shù)多，反之則少。通常藥品都有一定的pH值，分散度不同導(dǎo)致供試液不同的pH值而影響微生物的生長，可得到不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。應(yīng)按藥典首選勻漿儀法，并注意轉(zhuǎn)速和時(shí)間，確保制備均勻的供試液。轉(zhuǎn)速4000 r/min，時(shí)間2分鐘。試驗(yàn)證明[3]，對(duì)8批水丸分別用勻漿儀和振蕩器處理后，測(cè)定細(xì)菌數(shù)，其結(jié)果后者比前者少一半，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)分析，差異有顯著性（P

3 培養(yǎng)基的影響

培養(yǎng)基是培養(yǎng)檢測(cè)微生物的營養(yǎng)物，其質(zhì)量的好壞，穩(wěn)定與否直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。通過對(duì)電爐直火加熱融化培養(yǎng)基及用剩余培養(yǎng)基包扎冷藏后融化再使用的陽性對(duì)照實(shí)驗(yàn)[5]，發(fā)現(xiàn)這兩種操作對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成的誤差達(dá)21%和18%。多次反復(fù)加熱培養(yǎng)基，可使其中糖、微生物和氨基酸受破壞，影響質(zhì)量。而pH值的改變影響更為嚴(yán)重，因各種微生物皆有其適宜生長繁殖的pH值。霉菌和酵母菌的培養(yǎng)基的pH是偏酸性的，而細(xì)菌和放線菌的培養(yǎng)基的pH為中性或微堿性的注皿時(shí)溫度應(yīng)控制在45℃，過高細(xì)菌易受損或致死。注皿量約15 ml，厚度約4 mm，薄水分易散失，不利于微生物生長，過厚需氧菌不利于生長。

一些選擇性培養(yǎng)基加入膽鹽作為抑菌劑，抑制革蘭陽性菌，使革蘭陰性菌能良好生長，但有試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)[6]，膽鹽用量過大對(duì)大腸埃希菌也有抑制作用，且當(dāng)加菌量較大時(shí)，革蘭陽性菌也能生長。針對(duì)金黃葡萄球菌能耐高鹽而其他菌無此特性，對(duì)卵黃高鹽培養(yǎng)基中不同濃度的氯化鈉作了測(cè)試[7]。結(jié)果，試驗(yàn)濃度均不能抑制大腸桿菌、枯草桿菌生長，其菌落數(shù)未見明顯差異。而一些對(duì)大腸桿菌抑制作用較強(qiáng)的藥品[8]，可將增菌液由膽鹽乳糖改為硫乙醇酸鹽，結(jié)果陽性檢出率為88%，大大高于膽鹽乳糖25%的檢出率。應(yīng)注意大腸埃希菌MUG培養(yǎng)基其pH值滅菌后不得過7.4，否則pH值偏高，MUG自行分解，產(chǎn)生熒光。

一般情況下[9]，濕熱滅菌時(shí)，含有糖分的培養(yǎng)基溫度需控制在115 ℃ 15～20分鐘，不含糖分的培養(yǎng)基溫度需控制在121 ℃15～20分鐘?；⒓t培養(yǎng)基滅菌溫度在10℃以內(nèi)的改變，可造成檢驗(yàn)結(jié)果判斷錯(cuò)誤[10]。

干粉培養(yǎng)基，易吸潮，如存放不當(dāng)出現(xiàn)凝塊，則其凝固性較差，應(yīng)避免使用。試驗(yàn)用培養(yǎng)基，需經(jīng)過質(zhì)量鑒定，用已知典型反應(yīng)菌株進(jìn)行測(cè)試，其靈敏度及特征性反應(yīng)應(yīng)符合要求。新鮮配制的培養(yǎng)基應(yīng)在2～20 ℃避光保存，但不得凍結(jié)，保存時(shí)間不得超過2周。分離平板在使用前應(yīng)置36 ℃溫箱內(nèi)倒置孵育1～2小時(shí)，使其表面溫暖濕潤，利于分離。培養(yǎng)基最好現(xiàn)用現(xiàn)配。

4 計(jì)數(shù)、觀察的誤差

當(dāng)細(xì)菌生長小而密集時(shí)，極易發(fā)生計(jì)數(shù)誤差。菌落計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)仔細(xì)觀察，必要時(shí)借助放大鏡或低倍顯微鏡觀察，以排除藥渣，培養(yǎng)基沉淀物和小氣泡等的干擾。如仍難區(qū)別，可適當(dāng)延長培養(yǎng)時(shí)間。

菌落蔓延生長成片或發(fā)生重疊影響計(jì)數(shù)。藥典規(guī)定菌落如蔓延生長成片，不宜計(jì)數(shù)。這是由于平皿表面濕度過大，有利于動(dòng)力菌泳動(dòng)，促使菌落蔓延。某些劑型如密丸、水丸最易成片狀菌。防止的方法有: 0.001%TTC瓊脂法、開蓋干燥法或換陶瓦蓋法[11]。

不同的培養(yǎng)時(shí)間對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果的影響。樣品經(jīng)24小時(shí)培養(yǎng)后，細(xì)小菌落容易漏掉，培養(yǎng)48小時(shí)后，菌落變大且有很多新生菌落，培養(yǎng)72小時(shí)后，菌落數(shù)增加不多，但菌落明顯變大。如細(xì)菌平皿有混雜的霉菌，因其生長旺盛，影響細(xì)菌的觀察計(jì)數(shù)。而霉菌在培養(yǎng)72小時(shí)后蔓延重疊生長嚴(yán)重，應(yīng)于培養(yǎng)48小時(shí)后觀察標(biāo)記，并且觀察時(shí)應(yīng)輕拿輕放，忽反復(fù)翻轉(zhuǎn)，以免早期形成的孢子散落在平皿的其他部位，又萌生新的菌落，導(dǎo)致計(jì)數(shù)誤差。

控制菌生化反應(yīng)均需按照規(guī)定的試驗(yàn)要求進(jìn)行，如大腸埃希菌、沙門菌的三糖鐵瓊脂斜面反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)在（24±2）小時(shí)，時(shí)間過長過短，都可能出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果判斷。所以應(yīng)在規(guī)定的培養(yǎng)環(huán)境下，嚴(yán)格遵守培養(yǎng)時(shí)間，以便真實(shí)的反映計(jì)數(shù)結(jié)果。

5 設(shè)備及人員的影響

微生物的生長對(duì)溫度的要求也較為嚴(yán)格。在實(shí)際工作中盡管使用的都是恒溫培養(yǎng)箱，但大多數(shù)的培養(yǎng)腔內(nèi)都沒有內(nèi)置電扇，這樣便帶來溫度差異/分層，這種差異帶來的結(jié)果變化是顯著的。

玻璃儀器、容量儀器須效驗(yàn)，保證取樣量的一致性，特別在陽性菌加入時(shí)顯得更為重要。

所用器械應(yīng)洗滌干凈，不殘留酸堿及抑菌物質(zhì)。對(duì)實(shí)驗(yàn)所用器具根據(jù)材料的性質(zhì)，采取相應(yīng)的干熱滅菌、濕熱滅菌或消毒劑擦拭滅菌，且滅菌時(shí)間和溫度均有明確規(guī)定[1]。有實(shí)驗(yàn)[12]對(duì)市售的12批75%酒精用薄膜過濾法進(jìn)行微生物限度檢查，其中9批檢出微生物，經(jīng)革蘭染色為陽性芽孢桿菌。經(jīng)考證該濃度的乙醇均為供應(yīng)商采用自制純化水稀釋高濃度醫(yī)用乙醇而成。由于75%乙醇本身含有細(xì)菌，作為消毒劑就會(huì)成為新的微生物污染源，建議采用0.2 μm的疏水濾膜過濾，棉球濕熱滅菌。

操作環(huán)境不合要求也會(huì)帶來誤差，應(yīng)定期檢查無菌室的空氣是否符合規(guī)定。嚴(yán)格無菌操作，操作馬虎、隨便易造成供試品再污染及已污染微生物的繁殖或死亡，從而不能真實(shí)反映試驗(yàn)結(jié)果。

6 抽樣、取樣誤差

微生物污染的不均勻性，勢(shì)必影響試驗(yàn)結(jié)果[13]。遵循隨機(jī)原則的概率抽樣可以保證抽選出代表性較高的樣本，使樣品具有代表性，保證樣本推論總體的可靠性。

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