實驗動物學概論精選(九篇)

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第1篇：實驗動物學概論范文

關鍵詞：胃卡他；胃腸炎；腺炎；灌腸療法；喂養(yǎng)護理要點

中圖分類號：S858.292 文獻標識碼：A

1.緒論

犬的消化系統(tǒng)疾病是最常見而最重要的犬類疾病，而這其中大多疾病都是由于其主人缺乏科學合理的營養(yǎng)、喂養(yǎng)、護理知識而引起的。尤其是在愛犬患病或病愈恢復過程中，犬的消化功能。必然受到了很大的削弱。由于胃腸功能的削弱及紊亂，犬機體所攝入的營養(yǎng)必然減少，容易對機。體產(chǎn)生各種不利的影響。

2.犬易發(fā)的三種消化系統(tǒng)疾病

犬病門診中，消化系統(tǒng)疾病最為多見，現(xiàn)結合臨床實踐，介紹犬易發(fā)的胃卡他、胃腸炎、腺炎三種疾病。

2.1胃卡他

胃卡他是指胃粘膜表面的炎癥，臨床以嘔吐、胃痛、脫水為特征，常呈急性經(jīng)過。

2.1.1病因

多因一次性過食難以消化的食物或采食了污穢、腐敗的食物，或食物過冷過熱，或喂給刺激性藥物引起。也可繼發(fā)于某些傳染病、寄生蟲病等。

2.1.2癥狀

病犬精神沉郁，食欲減退或廢絕，飲欲增加，但喝后即吐，嘔吐頻繁，初吐食糜，以后吐出帶泡沫的粘液。弓背，觸壓腹前部胃區(qū)敏感疼痛，常伸展前肢臥于冷暗處，眼淚增加，舌苔黃白，口臭。嘔吐嚴重時出現(xiàn)眼球凹陷、皮膚彈性降低等脫水癥狀。

2.1.3治療

保護胃粘膜，消除炎癥，糾正脫水及酸堿平衡紊亂。

①禁食。由食物原因引起的胃卡他，應禁食24小時并限制飲水，24小時后，只給少量溫水、稀飯、溫奶等。

②對癥治療。維持消化機能可肌注維生素B100毫克/次，止吐可肌注胃復安2～4毫升/次，解痙止痛可肌注鹽酸山莨菪堿（654-2）1毫克/公斤體重。脫水嚴重者，靜脈注射5%葡萄糖生理鹽水50～80毫升/公斤體重，維生素C 0.5克/次，維生素B2毫升，每天1～2次。

③抗菌消炎。肌注慶大霉素或氨芐青霉素1萬～2萬單位/公斤體重，地塞米松2～4毫克/次。也可并用犬病消，0.3～0.4毫升/公斤體重。

④健胃。病情好轉后，可口服多酶片1～2片/次，中藥保和丸1～2丸/次。

2.2胃腸炎

胃腸炎為胃和小腸粘膜及粘膜下組織的重劇炎癥，以腹瀉、腹痛、發(fā)熱、毒血癥為特征。臨床上多見粘液性、出血性胃腸炎。

2.2.1病因

原發(fā)性胃腸炎由單純的胃腸卡他發(fā)展而來，如采食了發(fā)霉變質的肉類、魚類，很快發(fā)生腹痛、腹瀉、發(fā)熱等癥狀。B族維生素缺乏，機體抵抗力降低，外感風寒也可引起。繼發(fā)性胃腸炎可見于某些病毒?。ㄈ缛翢?、犬細小病毒?。⒓毦。ㄈ绱竽c桿菌病、沙門氏桿菌?。?、寄生蟲病（如絳蟲、蛔蟲感染）以及濫用抗生素等。

2.2.2癥狀

病初呈急性胃腸卡他癥狀，以后呈胃腸炎癥狀。病犬精神不振，食欲廢絕，嘔吐喜飲，飲后即吐。發(fā)展為腸炎時，表現(xiàn)頻繁水樣下痢，并混有粘液、血液，體溫升高到40～40.5℃，松弛，排便失禁。隨腹瀉的發(fā)展，病犬眼球下陷，皮膚彈性降低，結膜發(fā)紺，出現(xiàn)脫水和酸中毒癥狀。

2.2.3治療

排除病因，采取綜合治療措施。

①飲食療法。禁食24小時，只給少量口服補液鹽飲水，配方為氯化鈉3.5克、碳酸氫鈉2.5克、氯化鉀1.5克、葡萄糖20克、水1000毫升，混合溶解，每次每公斤體重50～100毫升，飲服或灌服。

②對癥治療。止吐：胃復安10毫克/次，肌注；止血：止血敏15～20毫克/公斤體重，肌注；增強抵抗力：維生素B100毫克/次，維生素C0.5克/次，肌注；久瀉不止：口服復方苯乙哌啶片2.5毫克/次，一日2～3次。

③強心，補液，防止酸中毒。5%葡萄糖生理鹽水50毫升/公斤體重，50%葡萄糖10～20毫升，維生素C0.5克，鹽酸山莨蓉堿1毫克/公斤體重，混合靜注。心衰時加入10%安鈉咖0.5～2毫升。伴隨酸中毒時，可將5%碳酸氫鈉注射液按3～5毫升/公斤體重用5%葡萄糖稀釋至1.25%，靜脈注射。

2.3腺炎

是犬腺排泄管阻塞，分泌物積聚，發(fā)生感染而引起的炎癥。

2.3.1病因

犬腺位于內(nèi)外括約肌之間的腹側，呈球形，直徑約1厘米，左右各1個。腺以2～4厘米長的管道開口于粘膜與皮膚交界處，相當于時鐘4點和8點的位置，將犬尾提起易看到。其分泌物為灰色或褐色油脂狀，具強烈臭味。當腺過度分泌時，腺導管阻塞或括約肌功能不良，均易致腺體內(nèi)分泌物滯留，引起感染、發(fā)炎、腫脹。

2.3.2癥狀

早期患犬表現(xiàn)不安，食欲減少或廢絕，不斷回頭試圖啃、舔部位，或后軀坐地有擦肛動作。有的病犬排糞困難，不時努責但僅能排出少量干硬糞便。日久則紅腫，向外突出，流灰褐色液體，附近有多量灰褐色分泌物附著。擠壓腺，可從中排出多量灰褐色液體，有的呈化膿性感染，形成膿腫，易破潰與外界相通。

2.3.3治療

徹底擠出腺內(nèi)液體，并用生理鹽水或0.1%高錳酸鉀溶液反復沖洗，然后注入青霉素溶液10萬～20萬單位。也可用慶大霉素8萬單位、2%鹽酸普魯卡因4毫升混合注入腺內(nèi)。配合肌注清開靈、犬病康等，效果更好。

3、巧用灌腸療法治療犬消化系統(tǒng)疾病

在寵物治療中最多碰到是犬的消化系統(tǒng)疾病,針對病情采用的簡單的灌腸法可收到了不錯的效果。

3.1灌腸療法的適用范圍

①犬表現(xiàn)為上吐下瀉,糞便帶血腥臭等腸胃炎癥狀時,可以應用灌腸療法進行治療,排除稀糞,清空腸道,直腸直接給藥。

②犬發(fā)生大便干燥，排便困難等糞便秘結時，可應用灌腸治療軟化糞便，腸道。

③犬表現(xiàn)強烈的嘔吐，食欲廢絕，按壓腹壁可以摸到香腸狀的有彈性的硬物等腸套疊癥狀時，可以用深部灌腸法來治療。

④在犬口服給藥困難的情況下，可以用直腸灌腸進行給藥。

3.2具體操作方法

取輸液空瓶一只，內(nèi)裝溫熱[35度左右]的灌腸液，安裝上輸液器，把輸液器下方的連接頭剪去，將塑料管的端插入人用14號導尿管中。打開輸液開關，檢查插頭處是否漏水，如有漏水，可將塑料管再向內(nèi)插緊，關上輸液開關。

將犬俯臥保定在治療臺上，把治療臺的后兩只腿墊起，使犬呈前低后高的。如果犬較為馴服，可讓其站立進行灌腸。剪去犬周圍的污濁被毛，把導尿管的圓頭端從插入，邊插邊放液，以腸道易于插入。盡量多地插入導尿管，尤其是作保留灌腸時，利于藥物深入腸管。如發(fā)現(xiàn)堵塞，可來回抽動導尿管，或讓犬將積糞排除后再繼續(xù)灌腸。

作用是通便驅氣和清潔腸道。灌腸溶液較大，一般一次用量250-1000毫升[根據(jù)犬體形大小而定]，常將溶液瓶抬高，使罐入壓力增大，灌腸速度較快。灌完后立即讓犬排泄。

3.2.1留液灌腸法

作用是輸入治療藥物，補充營養(yǎng)物質或軟化硬結的糞便，灌腸速度不宜過快，溶液量不宜過大，灌完后仍保持前低后高的，并用犬尾根堵塞一段時間。在做輸入藥物和補充營養(yǎng)物質的保留灌腸之前，最好先用溫水進行洗腸，將積糞排出。

3.2.2常用的灌腸溶液

①生理鹽水刺激性輕，可用于腸道有疾患的清腸通便。

② 0.1%-0.2%肥皂水（在開水中加入肥皂至乳白色為止），用于手術前清腸或分娩前催產(chǎn)，同時可起驅氣作用。

③松節(jié)油溶液（松節(jié)油4毫升加入500毫升肥皂水攪勻），可以驅出腸內(nèi)積氣。

3.2.3留液灌腸的灌腸液

①在生理鹽水中加入抗菌消炎藥物，可以治療急慢性腸炎。

②30-60毫升甘油或植物油，加溫水至100-200毫升[盛和林等編著：哺乳動物學概論，華東師范出版社，1985]；用5%硫酸鎂30毫升、甘油60毫升，加入90毫升溫水配制成1：2：3灌腸液；用食鹽10克溶于100毫升溫水中，配制成10%高滲鹽水，可以用來軟化糞便，腸道，促使積糞排出。

③5毫升地塞米松、10毫升安痛定、40毫升魚腥草，加生理鹽水100毫升，配制成混合溶液，可以用來治療犬的各種高熱，能起到迅速退熱的作用。

④生理鹽水200毫升加入安乃近5毫升或加入0.5%阿托品1毫升，深部灌腸，可治療早期的腸套疊，緩解腸痙攣，減輕疼痛，充盈腸管，可使套疊的腸管復位。

4、預防犬消化系統(tǒng)疾病的常識

犬的消化系統(tǒng)疾病是最常見而最重要的犬類疾病，而這其中大多疾病都是由于其主人缺乏科學合理的營養(yǎng)、喂養(yǎng)、護理知識而引起的。尤其是在愛犬患病或病愈恢復過程中，犬的消化功能 必然受到了很大的削弱。由于胃腸功能的削弱及紊亂，犬機體所攝入的營養(yǎng)必然減少，容易對機 體產(chǎn)生各種不利的影響。因此，主人在平時的喂養(yǎng)管理、患病期間及恢復過程應注意以下幾點：

4.1健康犬只平時的喂養(yǎng)管理要點

4.1.1幼犬（出生-8月齡）

剛出生的幼犬由于其消化器官還未完全發(fā)育成熟，其消化能力極其有限，胃腸只能消化母乳。因而1月齡以內(nèi)的幼犬最好喂母乳。在喂乳時可加入少許酵母片的水溶液，以幫助幼犬更好地消化吸收母乳。同時，喂母乳宜分多次進行，一般每天可以分6~8次喂食。

為了你的幼犬健康，請堅持母 乳哺乳幼犬原則。小犬斷乳后，其身體的生長發(fā)育，尤其是自身骨骼、牙齒的生長形成往往需要充足而均衡的營養(yǎng)。特別是對蛋白質、脂肪、碳水化合物、微量元素及維生素等的需求較迫切，這些物質需求的滿足與否會直接關系其日后能否長成一條健康體美的成犬。

普通的食物則很難完全搭配滿足到幼犬的營養(yǎng)需要，這就需要給你的愛犬提供專門配置的優(yōu)良犬糧了。因此，市面提供的各種專業(yè)特制的幼犬糧不妨用間隔搭配的方法喂給犬。這對減少幼犬胃腸道疾病和日后更好、更快的生長發(fā)育產(chǎn)生極為重要的作用。

此外，該時期幼犬的胃腸道疾病也可能由體內(nèi)腸道寄生蟲和感染外界的細菌、病毒引起。最常見的腸道寄生蟲是蛔蟲、鉤蟲和鞭蟲，因而每月定期預防性驅蟲是必要的。而細菌性胃腸道病則多是在機體勞累、衰弱、抵抗力下降時，被致病性菌種經(jīng)污染的食物、呼吸道等途徑入侵感染而致病的。因而，在日常喂養(yǎng)管理上應盡量保持犬食的清潔衛(wèi)生，喂食時要做到定時、定量、定質的原則。對于病毒性胃腸道疾病，免疫接種是最安全和有效的預防解決辦法。一般確認有效的免疫 程序是在小犬滿2個月齡的時候進行首次免疫接種疫苗，必要時可以21日的間隔時段再注射2針，以確保幼犬獲得足夠的機體保護力。

許多其它因素也會直接或間接地誘發(fā)消化道的疾病，因而主人應盡量避免犬只受到這些因素的影響。最常見是因天氣突然變化、洗澡或吹冷氣等引起的受凍感冒，又或者是食物轉變過快引發(fā)的胃炎。幼犬的食物應盡量煮熟后方可食用，食用時 可加入些許含碘食鹽，以幫助其調(diào)節(jié)胃口。切記不要讓犬吃生雞蛋、生肉、生肝及油膩的食物。

4.1.2成犬（8月齡-5歲）

對于生長的犬來說，其消化功能日趨完善，有較強的消化吸收能力，故其消化道疾病發(fā)病率也逐漸降低，但犬主也不應因此而放松對愛犬的護理。這個時期的胃腸道疾病多是繼發(fā)于一些傳 染病或內(nèi)科病，例如：由于主人粗心喂了大塊骨頭而導致便秘或腸梗塞，犬細小病毒病引起出血 性腸食炎，過引起反復性胃腸炎等。

4.1.3老年犬（5歲以上）

當你的伴侶動物進入了老年期，它的消化、吸收能力將大大減退。同時伴隨其牙齒的磨損、脫落，食物若過難咀嚼完全則會對其消化系統(tǒng)增加負擔而導致胃腸道疾病的發(fā)生。老年犬易發(fā)生 便秘和消化不良等胃腸道功能紊亂疾病。為了避免這些疾病，對老年犬的喂養(yǎng)宜定時、少量，食 物要保證衛(wèi)生干凈、易消化。特別要注意多吃一些富含維生素及微量元素的物質，例如水果、鈣 片、肝臟等。尤其要注意的是讓老年犬多些運動和提供充足的飲水。

4.2患有消化道疾病或病愈恢復期的犬只的喂養(yǎng)護理要點

①給予容易消化的流體食物，如：稀肉粥，肝臟拌稀飯，菜肉湯等。

②適當在犬食中加入少量健胃消食的保健性藥物或一些維生素，如：酵 母片、維生素 C片、魚肝油丸等。

③盡量避免過食，不要給予高脂肪、高蛋白，難以消化和加重胃腸負擔的食物。

④每天喂食要少量多餐，同時要努力做到定時、定量、定質的大原則。

⑤患病期間應盡量減少洗澡的次數(shù)，以及加強保溫護理工作。

⑥患便秘的犬只應給予充足的飲水和運動，以促進胃腸的蠕動、排空，減少食物在胃 腸內(nèi)的積壓負擔。

⑦主人要多留意患病犬的飲食次數(shù)、食量、飲食欲，以及排便或尿的次數(shù)及其性狀。

參考文獻

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第2篇：實驗動物學概論范文

關鍵詞　Mef2；原核表達；多克隆抗體

中圖分類號　R39211 文獻標識碼　A 文章編號　10002537（2012）05006404

Mef2屬于MADS家族轉錄因子基因，MADS家族是指其蛋白質結構域含有高度保守的MADS結構域的一類轉錄因子的總稱［1］．MADS結構域是一種DNA結合結構域，由55～63個氨基酸組成，所識別并結合的DNA保守序列為CArG框［CC（A/T）6GG］．

Mef2位于果蠅2號染色體上，mRNA全長5　990　bp，編碼501個氨基酸．脊椎動物有4種MEF2蛋白（MEF2AD），而果蠅中只有1種MEF2蛋白（DMEF2）［2］．不管是脊椎動物還是果蠅中的MEF2蛋白都含有一個高度保守的MADS和MEF2結構域，并且由它們來介導DNA結合、二聚作用、蛋白質蛋白質的相互作用［3］．

Mef2最初是在分化的肌肉細胞中作為一個肌肉特異結合的活性因子被鑒定的，1997　年卻發(fā)現(xiàn)Mef2基因在心臟發(fā)育的過程中起重要作用［4］．在果蠅中，Mef2首先在原腸胚形成時在整個中胚層中表達，隨著胚胎的發(fā)育，它的表達逐漸限制在體節(jié)、內(nèi)臟和心肌細胞中［56］．鑒于Mef2基因在果蠅心臟發(fā)育的過程中起著重要的作用［7］，所以制備一個特異性好的多克隆抗體尤其重要，對進一步以果蠅為模型研究Mef2基因具有重要的意義．

1.1　實驗材料和試劑

大腸桿菌Rosseta菌種，pET28a菌種以及coli　DH5α菌種為本實驗室提供；限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ和XhoⅠ，DNA、蛋白質相對分子質量Marker，Tag　DNA聚合酶購自深圳晶美公司；pMD18T載體和連接酶購自大連TaKaRa公司；UNIQ10柱式DNA　膠回收純化試劑盒購自上海生工公司；質粒提取試劑盒購自OMEGA公司；Glutathione　SepharoseTM　4B蛋白純化試劑盒購自PIERCE公司；弗氏佐劑購自Sigma公司；丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、IPTG（異丙基βD硫代半乳糖苷）等購自上海Sangon公司；新西蘭大白兔購自中南大學實驗動物學部．

1.2　引物設計與合成

從NCBI數(shù)據(jù)庫（http：//ncbi.nlm.nih.gov）檢索出果蠅Mef2基因的序列，根據(jù)巢式PCR的原理利用Primer　Premier　5．0　軟件設計兩對引物：第一對：DMef2S1：5′CGCCAGCTGCCGGAAATCCA　3′；DMef2A1：5′GCGTCTGCAGCGTGACCACT　3′．第二對（分別加入EcoR?、窈蚗ho?、衩盖形稽c）：DMef2S2：5′GAGAATTCATGGGCCGCAAA　AAAATTCA　3′　EcoR　Ⅰ；DMef2A2：5′GGCTCGAGGTGGACTGGCCTGCAGCAGG　3′　Xho　Ⅰ．

1.3　基因克隆和載體構建

選取30只野生型果蠅，液氮冷凍30　min，用Trizol法提取總RNA［8］，反轉錄PCR擴增，獲得firstchain　cDNA．然后以firstchain　cDNA為模板用第一對引物進行PCR擴增，然后以所得產(chǎn)物為模板，用第二對引物進行PCR擴增，得到目的片段［9］．目的片段經(jīng)純化后克隆入T載體，轉化入DH5α感受態(tài)細胞中，酶切檢測篩選出陽性單克隆，經(jīng)測序鑒定后將DN段從pMD18TMef2質粒上切下，連入pET28a載體（EcoRⅠ和XhoⅠ酶切線性化），得到陽性克隆，經(jīng)EcoRⅠ和XhoⅠ雙酶切鑒定后，得到重組表達質粒pET28aMef2．

1.4　Mef2融合蛋白誘導表達及純化

pET28aMef2重組表達質粒轉化入大腸桿菌菌株Rosseta，篩選出陽性菌落，然后接種于LB　培養(yǎng)基（含100　mg/L　氯霉素，卡那霉素）37　℃　培養(yǎng)12　h左右，以1∶　50轉接擴大培養(yǎng)至OD600達0.6，按0.1　mol/L　加IPTG，25　℃誘導，4、5、6、7　h各取1　mL菌液，確定最佳誘導時間．

收集誘導后大腸桿菌，PBS漂洗后超聲裂解，離心取上清．4　℃下與經(jīng)Binding　Buffer漂洗活化后的NiIDA凝膠柱結合，Washing　Buffer洗去雜蛋白，Elution　Buffer洗脫目的蛋白，獲得純化的HisMef2融合蛋白，-80　℃保存?zhèn)溆茫?/p>

1.5　Mef2多克隆抗體制備

將純化后的HisMef2蛋白與弗氏完全佐劑按體積1∶　1在注射器中推成乳劑，分散約12個點對同一新西蘭大白兔進行背部皮下免疫注射．在第一次注射后14、21、28　d，將HisMef2蛋白按體積比1∶　1與弗氏不完全佐劑在注射器中推成乳劑，進行多次免疫．第35天主動脈取血，靜置過夜（4　℃），3　000　r/min離心處理10　min，取上清分裝保存（-80　℃）．

1.6　效價測定

獲得免疫兔血清后，用誘導的總蛋白進行Western　blot實驗檢測抗體效價．將含pET28aMef2重組子的菌株在LB培養(yǎng)液中37　℃培養(yǎng)，將5　mL接種于200　mL新鮮培養(yǎng)基中，用IPTG在25　℃條件下誘導5　h后，收集細菌，PBS重懸，然后用SDSPAGE電泳分離．將Mef2抗體分別以1∶　100、1∶　500、1∶　1　000和1∶　2　000的體積比稀釋后，以免疫前兔血清作為對照，采用Western　blotting方法檢測抗體的特異性［10］．

2　結果與分析

2.1　重組質粒pET28aMef2的構建與鑒定

將純化后的果蠅Mef2基因片段克隆到pMD18T載體中，經(jīng)測序鑒定與基因理論序列100%匹配，然后用EcoRⅠ和XhoⅠ雙酶切，連入pET28a載體（EcoRⅠ和XhoⅠ酶切線性化），獲得重組質粒pET28aMef2．經(jīng)酶切和測序鑒定重組質粒正確（圖1）．

2.2　Mef2　融合蛋白誘導表達及純化

將重組子轉入Rosseta感受態(tài)細胞中，以0.1　mmol/L　IPTG進行誘導，30　℃條件下進行時間梯度誘導1，2，3，4，5，6　h分別取樣檢測蛋白的表達，結果（如圖2）顯示Mef2蛋白在誘導1　h后就開始表達，隨著時間推移表達量增加，在3　h后趨于穩(wěn)定．

3　討論

為了以果蠅為模型進一步研究Mef2基因的功能，本文通過試驗獲得了Mef2原核表達融合蛋白，制備了高效價和特異性好的兔抗Mef2血清．在獲得融合蛋白的過程中，先通過軟件分析選取了親水性好而又含結構域少的一段序列，為獲得特異性好的抗體提供了前提條件［12］．在誘導蛋白的過程中，IPTG　的終濃度選取的是0.1　mmol/L　，蛋白表達量相對高，又不至于因IPTG　濃度太高對細胞的生長產(chǎn)生毒性作用，試驗相對容易成功．

pET28a（+）載體是一種常用的原核表達載體，具有Kan抗性，質粒大小為5.3　kb．載體的N端攜帶His標簽、凝血酶基因及T7啟動子標簽序列；在C端具有His標簽序列，　pET28a（+）載體可在BL21（DE3）、Rosstea等表達菌株中高表達融合有His標簽的蛋白，便于下游蛋白純化．pET28a這種載體沒有本身溶解性高的多肽融合蛋白，也沒有催化二硫鍵形成的酶融合蛋白，而且不含信號肽序列，所以同一種蛋白用這個載體，形成包涵體的可能性更大些［13］．

本試驗中，作者通過構建pET28aMef2重組質粒、誘導表達HisMef2融合蛋白獲得了高純度的蛋白并免疫新西蘭大白兔制備了Mef2抗體．通過效價檢測證明制備的Mef2多克隆抗體具有較好的特異性，能滿足試驗要求．　因此，它為將來運用染色質免疫沉淀、免疫共沉淀、免疫組化等手段深入研究Mef2基因的功能奠定了基礎．

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