基因多態(tài)性分析的意義精選(九篇)

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第1篇：基因多態(tài)性分析的意義范文

1 自殺相關(guān)基因

很多研究結(jié)果說明自殺行為具有遺傳傾向，從地域水平來講，某些有著不同政治文化背景的國(guó)家卻有著同樣高的自殺率[5]。從家庭水平來看，具有自殺病史的家庭成員更具有自殺的危險(xiǎn)[6]；另外，對(duì)雙生子和寄養(yǎng)子的研究表明，自殺行為具有家族聚集特征[7]。研究表明，5羥色胺能（5-HT）、去甲腎上腺能（NA）以及多巴胺神經(jīng)遞質(zhì)（DA）在自殺行為中扮演重要角色，參與調(diào)節(jié)這些神經(jīng)遞質(zhì)的基因也成了研究的重點(diǎn)[8-10] 。目前發(fā)現(xiàn)的與自殺相關(guān)的基因包括色胺酸羥化酶基因、5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因、單胺氧化酶基因、多巴胺受體2和4基因、兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶基因等。最近的研究涉及到調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)代謝方面的因素，兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶（COMT）作為參與兒茶酚胺降解的主要酶，COMT基因成為新的自殺候選基因。本研究就COMT基因與自殺行為的近期研究進(jìn)展做簡(jiǎn)要綜述。

2 COMT與自殺行為

COMT是多巴胺代謝過程中的重要調(diào)節(jié)酶，其編碼基因位置在22q 11．2[11]，有6個(gè)外顯子，2個(gè)啟動(dòng)子和2個(gè)開放閱讀框架（ORFs），短的ORF編碼可溶性的COMT形式(S-COMT)，長(zhǎng)的ORF編碼S-COMT和膜結(jié)合的COMT (MB-COMT)。MB-COMT形式主要在腦部，可存在于許多區(qū)域，如皮質(zhì)前沿和基底神經(jīng)中樞[12]。在S-COMT的108位密碼子和MB-COMT的158位密碼子的單核苷酸替代 (G-A) ，可產(chǎn)生纈氨酸到甲亮氨酸的替換，導(dǎo)致COMT 活性出現(xiàn)3～4倍的差異。Met (158/108) 由低活性編碼（L等位基因），而Val（158/108）由高活性編碼（H等位基因）[12-13]。一些研究發(fā)現(xiàn)，自殺與兒茶酚胺能神經(jīng)傳遞的功能失常有關(guān)，而COMT因其在兒茶酚胺代謝中的作用也被發(fā)現(xiàn)與多種精神紊亂疾病相關(guān)。

Rujescu等[14]對(duì)149位德國(guó)自殺未遂者和328名德國(guó)健康對(duì)照者的COMT多態(tài)性研究發(fā)現(xiàn)，在等位基因/基因型上兩組沒有差異；然而低活性L等位基因和基因型頻率在暴力自殺未遂者較高，LL攜帶者更多地表現(xiàn)為外向易怒個(gè)性，而HH攜帶者則更多表達(dá)為內(nèi)向個(gè)性，提示COMT基因中的功能多態(tài)性可能參與自殺未遂者的表型。Ono等[15]對(duì)163例自殺死亡患者的研究發(fā)現(xiàn)，在男性患者中COMT 158Val/Met的基因型分布與對(duì)照組相比具有明顯的差異，高活性的COMT Val/Val基因型頻率在自殺男性患者中明顯偏低，而在女性自殺患者中并無此差異。筆者認(rèn)為Val/Val基因型在男性中是一個(gè)抑制自殺的保護(hù)性基因。Nolan等[16]對(duì)94例芬蘭精神分裂癥患者和54例美國(guó)精神分裂癥患者的研究發(fā)現(xiàn)，COMT的 L 等位基因常見于采用暴力方式的男性自殺未遂的精神分裂癥和精神情感患者中，并具有顯著性，而在女性中沒有發(fā)現(xiàn)有顯著性，表明COMT等位基因的作用在不同性別中有差別。來自日本的研究發(fā)現(xiàn)COMT的 L等位基因與抑郁癥相關(guān)聯(lián)[17]。在我國(guó)，目前對(duì)于自殺行為與COMT關(guān)系的研究較少，筆者對(duì)205例自殺未遂者與相應(yīng)對(duì)照組 (與病例同性別、年齡相差3歲以內(nèi)、同地區(qū)) 進(jìn)行的COMT 158/108基因型測(cè)定、環(huán)境因素與自殺未遂的關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)，病例組與對(duì)照組在COMT基因型、基因頻率上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；多因素條件Logistic回歸模型分析顯示，COMT 158/108 Val/Val、文化程度低、吸煙、情感沖突、精神障礙、抑郁皆為自殺未遂的危險(xiǎn)因素，支持COMT 158/108 Val/Val為自殺未遂的易感基因型，并提示基因圖譜上116 bp片段可能與COMT高活性相關(guān)[18]。筆者近期對(duì)農(nóng)藥自殺未遂者流行特征以及環(huán)境因素與COMT 158/108基因多態(tài)性的關(guān)系進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)精神障礙、自殺未遂與COMT基因間存在相互關(guān)聯(lián)[19]。最近有筆者對(duì)已有的關(guān)于COMT與自殺行為的研究結(jié)果進(jìn)行了綜合分析，結(jié)果顯示519 例患者和933例正常人相比， COMT158Met多態(tài)性與自殺行為之間存在著明顯的聯(lián)系。結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了COMT與自殺行為之間的聯(lián)系，同時(shí)發(fā)現(xiàn)這聯(lián)系存在著性別上的差異，考慮到大多女性是自殺未遂，而很高比例的男性是自殺身亡，所以COMT有可能與自殺行為的致命程度相關(guān)[20] 。

但是對(duì)于COMT與自殺關(guān)系的研究，也有不同的結(jié)論。Russ等[21]的研究發(fā)現(xiàn)在51例自殺患者與51名正常人中，COMT的功能性基因多態(tài)頻率沒有差別[21]。De Luca等[22]研究了305個(gè)家庭的COMT基因多態(tài)型，這每個(gè)家庭至少有一人具有雙向性精神障礙，結(jié)果發(fā)現(xiàn)COMT Val 158 Met基因多態(tài)性與自殺之間無顯著相關(guān)，實(shí)驗(yàn)提示COMT基因可能不影響雙向性精神障礙患者的自殺行為。

3 展望

自殺相關(guān)基因的定位受到許多因素的影響，如環(huán)境因素的潛在作用，基因型與表型的不一致，以及眾多測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確性的欠缺。雖然有不少科學(xué)家從遺傳學(xué)、流行病學(xué)方面做了大量的研究，提出了一些與自殺相關(guān)的基因，但是還未能明確自殺的易感基因。COMT基因作為一個(gè)有前途的候選基因，目前對(duì)其與自殺關(guān)系的研究還較少。另外我國(guó)漢族人群是一特殊群體，漢族人自殺又有許多不同于其他民族或國(guó)家的自殺現(xiàn)象，該基因多態(tài)性在漢族人自殺未遂中分布情況如何、與自殺未遂的相關(guān)流行因素間是否存在相互作用，目前我國(guó)關(guān)于這方面的研究較少。明確自殺易感基因必將使臨床干預(yù)更具有靶向性，從而更加有效地預(yù)防、干預(yù)此類疾病的發(fā)生。

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第2篇：基因多態(tài)性分析的意義范文

[關(guān)鍵詞] 單核苷酸多態(tài)性；亞甲基四氫葉酸還原酶；甲硫氨酸合成酶還原酶

[中圖分類號(hào)] R715.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2014）08（b）-0008-04

Polymorphisms of MTHFR and MTRR among the Han women in Shouguang City

TANG Hongying1 LU Yanqiang2 LI Ying2 LI Dongqing1 YANG Qi3

1.Department of Clinical Laboratory， Shouguang Women and Children Health Care Hospital， Shandong Province， Shouguang 262700， China； 2.Shanghai Institute of Targeted Therapy and Molecular Medicine， Shanghai 200433， China； 3.Center for Women and Children's Health， Chinese Center for Disease Control and Prevention， Beijing 100101， China

[Abstract] Objective To explore the 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） and 5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase （MTRR） gene polymorphisms among the Han women in Shouguang City. Methods A total of 787 Han women were recruited. And their oral epithelial cells were collected to extract genome DNA in order to detect gene polymorphisms of MTHFR C677T， A1298C and MTRR A66G using fluorescence quantitative PCR. Then the results were compared with those in other cities in China. Results The frequency distribution of MTHFR C677T among Shouguang women was significantly different with Zhengzhou， Yantai， Zhenjiang， Wuhan， Deyang， Kunming， Huizhou， Qionghai （P < 0.05）. The frequency distribution of MTHFR A1298C among Shouguang women was significantly different with Yantai， Zhenjiang， Wuhan， Deyang， Kunming， Huizhou， Qionghai （P < 0.05）. The frequency distribution of MTRR A66G among Shouguang women was significantly different with Qionghai （P < 0.05）. Conclusion The MTHFR C677T， A1298C and MTRR A66G polymorphism distributions of Han women in Shouguang City are different with other regions， which have visible difference.

[Key words] Single nucleotide polymorphism； 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase； 5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase

葉酸在人體的代謝需要大量的酶催化，其中5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶（5，10-methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）和甲硫氨酸合成酶還原酶（5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase，MTRR）是完成葉酸代謝利用的關(guān)鍵酶，其基因多態(tài)性會(huì)影響到酶的活性，進(jìn)而影響體內(nèi)同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）水平。體內(nèi)HCY在甲硫氨酸合成酶的催化下，以維生素B2為輔酶，接受5-甲基四氫葉酸提供的甲基生成甲硫氨酸。5-甲基四氫葉酸由MTHFR催化5，10-亞甲基四氫葉酸還原而來，而維生素B12需要MTRR催化其甲基化維持輔酶的活性，使甲硫氨酸合成酶的催化反應(yīng)正常進(jìn)行。因此，這兩種酶的活性與神經(jīng)管畸形[1]、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)[2]、妊娠期高血壓[3]等疾病的發(fā)生密切相關(guān)，嚴(yán)重影響母嬰健康。

本研究針對(duì)壽光市漢族女性，開展大樣本的分子流行病學(xué)調(diào)查，旨在闡明本地區(qū)人群MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G的遺傳特征，獲取相關(guān)群體遺傳數(shù)據(jù)，為個(gè)體化保健提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年12月～2014年1月到壽光市婦幼保健院進(jìn)行孕前與孕期檢查的漢族女性，排除籍貫非本市者，入組對(duì)象共787名，平均年齡（27.65±3.79）歲。根據(jù)知情同意原則，采集口腔黏膜上皮細(xì)胞。

1.2 方法

樣本的基因組DNA提取采用硅膠吸附方法。MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)采用熒光定量PCR技術(shù)。相關(guān)試劑和儀器均購(gòu)自美國(guó)ABI公司。每個(gè)反應(yīng)體系10 μL，包含1 μL DNA模板（20 ng/μL），5 μL Taqman Universal Master Mix，0.5 μL Taqman-MGB探針和3.5 μL去離子水。反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性10 min，92℃變性15 s，60℃延伸1 min，20個(gè)循環(huán)；89℃變性15 s，60℃延伸90 s，30個(gè)循環(huán)。反應(yīng)完成后，在ABI 7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品孔中的終點(diǎn)熒光，利用分析軟件確定各個(gè)樣本的基因分型結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，應(yīng)用HaploView 4.2軟件分析SNPs的Hardy-Weinberg平衡、LD水平和單倍型結(jié)構(gòu)。計(jì)數(shù)資料采用率表示，對(duì)基因型及等位基因頻率進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg平衡分析

MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因多態(tài)性檢驗(yàn)結(jié)果符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，說明樣本具有本區(qū)域群體代表性。

2.2 MTHFR、MTRR基因型和等位基因頻率在不同地區(qū)漢族女性中的比較

如表1、2所示，MTHFR C677T位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率，壽光市漢族女性與鄭州、煙臺(tái)、鎮(zhèn)江、武漢、昆明、德陽(yáng)、惠州、瓊海等地差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。T等位基因頻率呈現(xiàn)北方高南方低的趨勢(shì)。MTHFR A1298C位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率，壽光市漢族女性與煙臺(tái)、鎮(zhèn)江、武漢、昆明、德陽(yáng)、惠州、瓊海等地差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），與鄭州差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。C等位基因頻率呈現(xiàn)北方低南方高的趨勢(shì)。MTRR A66G位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率，壽光市漢族女性與瓊海的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），與鄭州、煙臺(tái)、鎮(zhèn)江、武漢、昆明、德陽(yáng)、惠州等地差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。

2.3 MTHFR C677T和A1298C兩位點(diǎn)連鎖情況及單倍型分析

MTHFR C677T和A1298C兩位點(diǎn)組合情況顯示，TT/AA組合、CT/AA組合占比最高，分別是38.9%和32.5%；CT/AC組合次之，所占比例為14.9%；未發(fā)現(xiàn)CT/CC和TT/CC組合，其余組合所占比例均在7%以下。單倍型分析表明，4種組合頻率分別為677T-1298A（62.6%）、677C-1298A（25.2%）、677C-1298C（12.1%）、677T-1298C（0.1%）。兩位點(diǎn)間存在高度連鎖不平衡現(xiàn)象（D'=0.989），單倍型以677T-1298A所占比例最高。張婷等[12]報(bào)道貴州布依族、苗族的兩位點(diǎn)間也存在高度連鎖不平衡現(xiàn)象，但單倍型以677C-1298A所占比例最高，表明研究位點(diǎn)在漢族與少數(shù)民族間的分布或存在差異。

3 討論

我國(guó)每年新增出生缺陷約90萬(wàn)，被成為不光彩的“珠穆朗瑪峰”。山東是我國(guó)出生缺陷高發(fā)省份之一，2007～2010年出生缺陷監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，先天性心臟病、多指（趾）、總唇裂、腦積水、神經(jīng)管畸形是排名前5位的出生缺陷種類，并且出生缺陷發(fā)生率逐年上升[13]。出生缺陷的發(fā)生受環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)和遺傳因素的共同影響。作為參與體內(nèi)葉酸代謝的關(guān)鍵酶，MTHFR C677T和A1298C位點(diǎn)的多態(tài)性會(huì)降低酶活性，影響葉酸代謝和利用，與出生缺陷（神經(jīng)管畸形、先天性心臟病、唇腭裂、唐氏綜合征等）以及孕產(chǎn)婦疾病（復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、妊娠期高血壓等）密切相關(guān)。C677T和A1298C存在協(xié)同作用，雙雜合子個(gè)體與僅含C677T突變的個(gè)體相比，同型半胱氨酸濃度顯著升高。本研究顯示雙雜合子占14.9%，與Benrahma等[14]報(bào)道的結(jié)果一致。

本研究顯示，壽光市漢族女性MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性與其他地區(qū)漢族女性的情況存在差異。其中，MTHFR C677T位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率，壽光市漢族女性與鄭州、煙臺(tái)、鎮(zhèn)江、武漢、昆明、德陽(yáng)、惠州、瓊海等地差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；MTHFR A1298C位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率，壽光市漢族女性與煙臺(tái)、鎮(zhèn)江、武漢、昆明、德陽(yáng)、惠州、瓊海等地差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），與鄭州差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；MTRR A66G位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率，壽光市漢族女性與瓊海的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），與鄭州、煙臺(tái)、鎮(zhèn)江、武漢、昆明、德陽(yáng)、惠州等地差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。此外，MTHFR基因C677T和A1298C兩位點(diǎn)在研究人群中存在連鎖不平衡現(xiàn)象，單倍型以677T-1298A所占比例最高。

這種地域分布差異可能與人群對(duì)多種疾病的群體易感性有關(guān)。MTHFR 677T等位基因頻率呈現(xiàn)北方高南方低的趨勢(shì)，與我國(guó)出生缺陷發(fā)病率北方高南方低的趨勢(shì)一致。有研究表明，T基因型女性在未服用葉酸增補(bǔ)劑及低葉酸飲食的情況下，其胎兒唇腭裂的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)均會(huì)增加，若以上兩種情況同時(shí)存在，則風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)一步增高。反之，如果能夠補(bǔ)服葉酸增補(bǔ)劑、提高飲食中葉酸的含量則可以降低胎兒唇腭裂的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[15]。

目前的孕期保健措施是從孕前3個(gè)月到孕早期3個(gè)月，每天增補(bǔ)葉酸400 μg。對(duì)于那些由于基因多態(tài)性造成葉酸代謝障礙的人群，在補(bǔ)充相同劑量葉酸的情況下，血漿葉酸的濃度較正常人低，HCY水平明顯升高。因此，通過對(duì)育齡女性進(jìn)行遺傳篩查，針對(duì)在遺傳上存在葉酸代謝障礙風(fēng)險(xiǎn)的人群，采取增加葉酸等B族維生素的補(bǔ)充、定期監(jiān)測(cè)紅細(xì)胞葉酸水平、提高產(chǎn)前篩查和孕期管理依從性等干預(yù)措施，是有效達(dá)到出生缺陷及孕期疾病一級(jí)預(yù)防目的的重要方法，也是提高人口素質(zhì)的必要手段。

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第3篇：基因多態(tài)性分析的意義范文

[關(guān)鍵詞] 細(xì)胞色素P450 3A4；細(xì)胞色素P450 3A5，基因多態(tài)性；基因分型； SNPstream

CYP3A是CYP450超家族中表達(dá)最為豐富的酶，在肝臟中占整個(gè)CYP酶系的30%，腸道中占70%，參與40%~60%臨床常用藥物的代謝。特別是參與白血病化療藥物，如依托泊苷（VP16）、長(zhǎng)春新堿、鬼臼噻吩苷、柔紅霉素和移植后抗排斥藥物如環(huán)孢素A、他克莫司、糖皮質(zhì)激素的代謝。為了解天津地區(qū)漢族人群CYP 3A4、3A5基因多態(tài)性，我們采用SNPstream方法，對(duì)300名天津漢族人群外周血DNA進(jìn)行SNP基因分型，以了解天津漢族人群基因分布特點(diǎn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1.材料與方法

1.1 研究對(duì)象

隨機(jī)選取2010年1月至2011 年1月間在天津?yàn)I海協(xié)和基因科技有限公司進(jìn)行基因檢測(cè)的300名無血緣關(guān)系的天津漢族受檢者，年齡23～57歲，均無遺傳病家族史，其中男性172例，女性128例。

1.2 方 法

1.2.1 DNA制備：枸椽酸鈉抗凝外周血， 用TIANGEN血液基因組DNA提取試劑盒提取全血基因組DNA。用NANO-DROP 2000測(cè)量DNA溶液濃度和純度，OD 260/280比值在1.7-2.0之間，將DNA溶液稀釋至15-20 ng/μl。

1.2.2 PCR擴(kuò)增引物和延伸引物的設(shè)計(jì)：根據(jù)dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//ncbi.nlm.nih.gov/SNP/）中的SNP序列信息，由Beckman公司提供的在線設(shè)計(jì)軟件（省略）進(jìn)行 PCR引物和延伸引物的設(shè)計(jì)。

1.2.3 基因分型：利用單堿基延伸接合微陣列芯片法對(duì)位點(diǎn)進(jìn)行分型，采用貝克曼-庫(kù)爾特公司的SNPStream基因分型系統(tǒng)，按照貝克曼-庫(kù)爾特公司提供的標(biāo)準(zhǔn)操作進(jìn)行。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：以χ2檢驗(yàn)檢測(cè)等位基因和基因型分布是否符合 Hardy-Weinberg 平衡；χ2檢驗(yàn)檢測(cè)不同性別間基因多態(tài)性分布的差異；用 LDA 軟件進(jìn)行連鎖不平衡系數(shù)（D＇）的計(jì)算，連鎖不平衡的程度用D＇和r2表示。

2.結(jié) 果

2.1 基因型及等位基因分布頻率（見表1）

天津漢族人群中，rs2242480基因型分布頻率為G/G：61.0%、G/A：35.0、A/A：4.0%，等位基因頻率G：78.5%、A：21.5%，檢測(cè)結(jié)果符合Hardy－Weinberg平衡（χ2＝0.408，p＝0.523）；rs776746的基因型分布頻率為G/G：51.3%、G/A：41.7%、A/A：7.0%，等位基因頻率G：72.2%、A：27.8%，檢測(cè)結(jié)果符合Hardy－Weinberg平衡（χ2＝0.415，p＝0.520）

2.2 性別間基因型及等位基因分布頻率分布特點(diǎn)（見表1）。

rs2242480和rs776746的基因型頻率在性別間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.08、P=0.583；χ2=2.00、P=0.368）；等位基因頻率在性別間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.3、P=0.310；χ2=1.33、P=0.249）。

2.3 連鎖不平衡分析

rs2242480和rs776746兩者之間具有很強(qiáng)的連鎖不平衡關(guān)系（r2＝0.494，D＇＝0.834 ，P ＜0.01）。攜帶有CYP3A5*1 （rs776746 A） 等位基因時(shí)攜帶CYP3A4*1G （rs2242480 A） 等位基因的機(jī)會(huì)要更大一些。

3.討論

CYP3A的基因多態(tài)性主要體現(xiàn)在CYP3A4和CYP3A5基因的多態(tài)性上。CYP3A4和CYP3A5基因位于人類第7號(hào)染色體q21.1-22.1， 編碼CYP3A4 和CYP3A5 的氨基酸有84%的相似性。CYP3A4序列較為保守在中國(guó)人中已發(fā)現(xiàn)的 CYP3A4 等位基因主要CYP3A4*3、*4、*5、*6 和 *18A， 但突變頻率較低，不能解釋酶活性的個(gè)體差異。2004年Fukushima-UesakaHd等在其內(nèi)含子10第12堿基位發(fā)現(xiàn)一個(gè)突變率較高的G/A多態(tài)，命名為*1G[1]。Hu等研究發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)健康志愿者*1G純合子體內(nèi)環(huán)孢素A的清除率顯增高，提示可能與基因突變致酶活性增加有關(guān)[2]。賀寶霞等通過相對(duì)熒光素酶活性的比較的方法證實(shí)*1G能夠顯著增強(qiáng)啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性，提高CYP3A4酶活性[3]。本研究結(jié)果表明，天津漢族人群*1G的發(fā)生率為21.5%，略低于NCBI公布的中國(guó)漢族人群的28.0%；與日本人群的24.9%[1]，和Hu報(bào)道的中國(guó)人群的23.5%[2]數(shù)據(jù)相近；明顯高于歐洲人群的7.3%。CYP3A5的*3和*6多態(tài)性是酶活性差異的最主要原因， 中國(guó)人群中僅存在*3多態(tài)。CYP3A5* 3是內(nèi)含子3中6986位點(diǎn)的A/G突變，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄mRNA插入部分內(nèi)含子片段，提前出現(xiàn)終止密碼子，翻譯出無酶活性的蛋白[4]，*3突變純合子個(gè)體由于無法表達(dá)正常的CYP3A5產(chǎn)物而缺乏相應(yīng)的酶活性。Lin等發(fā)現(xiàn)CYP3A5 *1/*3、*1/*1基因型受試者肝臟和空腸中的CYP3A5表達(dá)量可占整個(gè)CYP3A家族的50％～61％，而CYP3A5*3/*3型受試者CYP3A5在肝臟和空腸表達(dá)量只占2.17％一4.12％[5]。本研究結(jié)果表明，天津漢族人群CYP3A5 *3的發(fā)生率為72.2%.與李洋報(bào)道的76%[6]相近，略高于NCBI公布的66.3%，明顯低于歐洲人群的96.4%。CYP3ACYP3A4與CYP3A5具有緊密連鎖性，尤其以CYP3A4中的*1G與CYP3A5* 3兩個(gè)單核苷酸多態(tài)性最為重要[1]，在我們的研究也發(fā)現(xiàn)兩者存在較強(qiáng)的連鎖性。

近年來基因?qū)騻€(gè)體化治療已在臨床應(yīng)用，該方法必將在大規(guī)模人群個(gè)體化用藥指導(dǎo)中展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景。由CYP3A酶所催化的Ⅰ相反應(yīng)是藥物在體內(nèi)代謝的關(guān)鍵一步，藥物在體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)差異往往是由于參與代謝的CYP3A酶活性存在較大個(gè)體差異所致，了解患者CYP3A4和CYP3A5的基因多態(tài)性可以為指導(dǎo)臨床個(gè)體化用藥提供科學(xué)依據(jù)。為此我們嘗試使用SNPstream技術(shù)進(jìn)行大規(guī)模標(biāo)本的CYP3A多態(tài)性基因分型。SNPstream技術(shù)是一種高通量的SNP檢測(cè)技術(shù)，具有準(zhǔn)確性高、結(jié)果準(zhǔn)確、通量高、操作簡(jiǎn)單、DNA用量低的特點(diǎn)。本研究通過此方法提供了天津漢族人群CYP3A4*1G和CYP3A5 *3基因多態(tài)性的分布特點(diǎn)，為進(jìn)一步研究其與藥物代謝之間關(guān)系提供了基礎(chǔ)資料，同時(shí)摸索運(yùn)用SNPstream技術(shù)為大規(guī)模人群進(jìn)行個(gè)體化用藥基因分型服務(wù)的可行性。

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第4篇：基因多態(tài)性分析的意義范文

【關(guān)鍵詞】 多囊卵巢綜合征； 雄激素受體基因； 性激素結(jié)合蛋白基因

【Abstract】 Objective：To investigate the status of androgen receptor gene and sex hormone binding protein gene in patients with polycystic ovary syndrome（PCOS）.Method：A total of 62 PCOS patients were selected as the observation group from November 2014 to July 2015 in our hospital，the control group were choosed from the same period due to the occurrence of reproductive system abnormalities lead to infertility in 62 patients.DNA gene amplification，agarose gel electrophoresis and capillary electrophoresis were performed to detect the expression of androgen receptor and sex hormone binding protein gene in PCOS patients.Result：SHBG-TAAAA gene type of polymorphic and insulin resistance of the observation group in the study，found that 9/9 genotype distribution in insulin resistance and insulin resistance had a significant difference in two groups（P

【Key words】 Polycystic ovary syndrome； Androgen receptor gene； Sex hormone binding protein gene

First-author’s address：Longgang District Second People’s Hospital of Shenzhen City，Shenzhen 518000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.14.005

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）屬于婦科領(lǐng)域中比較復(fù)雜內(nèi)分泌代謝疾病，主要由于女性體內(nèi)過高的雄性激素及性激素平衡導(dǎo)致不能正常排卵的常見疾病，該病不但會(huì)對(duì)女性的內(nèi)分泌功能造成嚴(yán)重影響，更加增大了女性發(fā)生心血管疾病、糖尿病、宮內(nèi)腫瘤及其他婦科疾病的風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重影響多數(shù)女性患者的健康[1]。所以，近幾年來，關(guān)于研究多囊卵巢綜合征（PCOS）患者的雄激素受體基因（AR）與性激素結(jié)合蛋白基因（SHBG）的相關(guān)性在國(guó)內(nèi)外不斷發(fā)展，但是，這兩基因與該病的具體關(guān)系，至今無一結(jié)論[2]。所以，本研究對(duì)PCOS患者中雄激素受體基因（AR）、性激素結(jié)合蛋白基因（SHBG）的情況進(jìn)行研究觀察，為臨床研究工作提供有力的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年11月-2015年7月本院接診的62例PCOS患者為觀察組，對(duì)照組為同一時(shí)期由于生殖系統(tǒng)發(fā)生異常導(dǎo)致不孕的62例患者。PCOS患者均符合“中華醫(yī)學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科學(xué)分會(huì)內(nèi)分泌學(xué)組及歐洲人類生殖和鹿特丹標(biāo)準(zhǔn)”[3]。對(duì)照組為生理期正常且非內(nèi)分泌性不孕患者，年齡20～36歲，平均（29.4±3.8）歲；觀察組患者年齡21～35歲，平均（31.7±2.4）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有患者均同意參與該研究，簽署知情同意書；（2）患者自身沒有其他內(nèi)分泌系統(tǒng)的疾?。唬?）無嚴(yán)重的器官功能障礙；（4）半年之內(nèi)及以上未用過激素類藥物；（5）無糖尿病等病史。

1.2 方法

1.2.1 PCOS與雄激素受體基因（AR） 所有研究對(duì)象進(jìn)行3 mL靜脈血的抽取，再次加入枸櫞酸鈉進(jìn)行抗凝，將其存貯在-80 ℃的恒溫箱中。將蛋白酶K和200 μL的血液樣本置于離心管中混合均勻，隨后加入緩沖劑反向混合。在55 ℃環(huán)境中，放置混合液10 min，在此期間進(jìn)行5～8次反向混合，液體變?yōu)榍辶習(xí)r為標(biāo)準(zhǔn)。再加入無水乙醇，充分的均勻混合再加吸附柱[4]。經(jīng)過離心、4次漂洗后，靜置于室溫5 min。在無污染的離心管中，加入緩沖劑，靜置離心。收集溶液，測(cè)定DNA純度。對(duì)AR目的基因應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增，對(duì)PCR的產(chǎn)物監(jiān)測(cè)。鑒定CAG序列的多態(tài)性和重復(fù)次數(shù)[5]。

1.2.2 PCOS與性激素結(jié)合蛋白基因（SHBG） 經(jīng)過采樣、提取DNA、擴(kuò)增SHBG、PCR的產(chǎn)物檢測(cè)、分析毛細(xì)管電泳序列進(jìn)行鑒定TAAAA序列多態(tài)性和重復(fù)次數(shù)[6]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用軟件SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用 字2檢驗(yàn)，以P

2 結(jié)果

2.1 PCOS與AR的關(guān)系

2.1.1 兩組AR-CAG片段重復(fù)多態(tài)的分布狀況 統(tǒng)計(jì)分析研究對(duì)象的AR-CAG，重復(fù)數(shù)范圍在11～33。兩組患者的重復(fù)數(shù)主要集中在21、22、23。觀察組患者所占的比例分別為：28.03%、32.49%、30.84%；對(duì)照組患者所占的比例分別為：29.85%、36.66%、28.75%，兩組數(shù)據(jù)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.1.2 AR-CAG重復(fù)多態(tài)性分布情況 按照兩組患者的AR-CAG重復(fù)多態(tài)性分布，22作為分據(jù)點(diǎn)，分為長(zhǎng)、短兩重復(fù)組。短重復(fù)組（n≤22）在觀察組、對(duì)照組中的比例分別為48.39%（30例）、51.61%（32例）；長(zhǎng)重復(fù)組（n>22）在觀察組、對(duì)照組中的分布分別為51.61%（32例）、48.39%（30例），

兩組數(shù)據(jù)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.684、0.497）。

2.1.3 觀察組患者高雄激素血癥與AR-CAG的重復(fù)多態(tài)性關(guān)系 根據(jù)觀察組患者血清中睪酮的濃度值，以0.7 ng/mL為界線點(diǎn)，將其分為高雄激素血癥組34例和雄激素正常組28例。觀察組中，短重復(fù)組在高雄激素血癥組的分布為52.94%（18例），在雄激素正常組分布為42.86%（12例）；而長(zhǎng)重復(fù)組在高雄激素血癥組的分布為61.76%（21例），在雄激素正常組的分布為39.29%（11例），上述數(shù)據(jù)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

2.1.4 觀察組患者胰島素抵抗與AR-CAG的重復(fù)多態(tài)性關(guān)系 根據(jù)血清中的胰島素水平，以空腹血清胰島素水平60 pmol/L作為參考，將觀察組患者分為胰島素抵抗組（>60 pmol/L）36例和非胰島素抵抗組（≤60 pmol/L）26例。短重復(fù)組中胰島素抵抗組分布比例為56.67%（17例），非胰島素抵抗組分布比例為43.33%（13例），比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)統(tǒng)計(jì)意義（P>0.05）。長(zhǎng)重復(fù)組中胰島素抵抗組分布比例為59.38%（19例）、非胰島素抵抗組的分布為40.63%（13例），比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 PCOS與SHBG的關(guān)系

2.2.1 比較兩組患者的SHBG-TAAAA分布情況 通過瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)、毛細(xì)管電泳序列分析，能夠檢測(cè)出SHBG-TAAAA的13種基因型，兩組SHBG-TAAAA基因型的分布情況比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

2.2.2 觀察組患者SHBG-TAAAA重復(fù)多態(tài)性與胰島素抵抗的關(guān)系 根據(jù)以上的分組方式，觀察組患者分別分為胰島素抵抗組（n=36）和非胰島素抵抗組（n=26）。兩組患者的9/9基因型分布情況比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），見表2。

3 討論

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）的致病機(jī)制比較復(fù)雜，導(dǎo)致該病發(fā)生的主要原因?yàn)閮?nèi)分泌不平衡和卵泡發(fā)育出現(xiàn)異常引起的。胰島素抵抗和高雄激素血癥屬于內(nèi)分泌失調(diào)病理基礎(chǔ)，而且卵泡發(fā)育發(fā)生停滯會(huì)減少成熟卵泡的生成量減少，或者成熟卵泡的排出發(fā)生障礙[7-8]。最近幾年來，許多臨床研究表明其與雄激素受體基因（AR）、性激素結(jié)合蛋白基因（SHBG）、卵泡發(fā)生異常及內(nèi)分泌失調(diào)有密切聯(lián)系。

雄激素受體影響著雄激素的發(fā)揮作用，所以AR的表達(dá)會(huì)在雄激素活性中起著關(guān)鍵性作用。在機(jī)體的各個(gè)器官中雄激素均會(huì)有所表達(dá)，生殖器官中該激素的表達(dá)達(dá)到最高[9]。編碼AR的基因主要位于Xq11-12位點(diǎn)上，其中含7個(gè)內(nèi)含子、8個(gè)外顯子。且種族及地域性對(duì)CAG產(chǎn)生不同的影響，例如在歐洲在8～39，美洲在8～30。近年來研究表明，地域相同但不同種族的人CAG的多態(tài)性有著明顯差異[10-12]。所以，AR基因表達(dá)也有相對(duì)穩(wěn)定性。隨著CAG重復(fù)次數(shù)的增長(zhǎng)，AR基因的轉(zhuǎn)錄活性會(huì)減弱。

性激素結(jié)合蛋白在機(jī)體中可起到特異運(yùn)輸功能，能把雄激素和雌激素送達(dá)到器官。且SHBG編碼基因主要位于17p13-12位點(diǎn)，且重復(fù)序列（TAAAA）的重復(fù)次數(shù)與編碼基因的轉(zhuǎn)錄活性有密切聯(lián)系[13-15]。性激素被運(yùn)送各作用器官上，還受血漿SHBG水平的多樣性影響，主要通過體液循環(huán)，或者直接作用等影響方式。所以，根據(jù)近年研究，可以利用血漿中SHBG的水平能夠用來判斷體內(nèi)胰島素水平。

本研究主要對(duì)POCS患者的AR進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示，兩組患者在CAG重復(fù)序列多態(tài)性上比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），且所有患者在短重復(fù)組和長(zhǎng)重復(fù)組的分布狀況比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。研究結(jié)果也表明PCOS的患病率與CAG重復(fù)序列多態(tài)性無直接聯(lián)系，但是也不能排除該基因在PCOS的發(fā)病上有潛在因素的可能[16-19]。另外，對(duì)62例PCOS患者單獨(dú)研究，短重復(fù)組在高雄激素血癥組的分布為52.94%（18例），在雄激素正常組分布為42.86%（12例）；而長(zhǎng)重復(fù)組在高雄激素血癥組的分布為61.76%（21例），在雄激素正常組的分布為39.29%（11例），該結(jié)果表明AR-CAG的多態(tài)性在高雄激素血癥發(fā)生率上起著重要作用，且短重復(fù)組更易引起雄激素血癥的發(fā)生相比于長(zhǎng)重復(fù)組。主要原因由于短重復(fù)序列會(huì)提高雄激素的轉(zhuǎn)錄活性，加速了雄性激素的分泌，機(jī)體的內(nèi)分泌發(fā)生失衡，更加引起高雄激素血癥的發(fā)生[20-22]。所以，AR-CAG的多態(tài)性也是PCOS發(fā)生的另外潛在致病因素。短重復(fù)組中胰島素抵抗組分布比例為56.67% （17例），非胰島素抵抗組分布比例為43.33%（13例），差異無統(tǒng)計(jì)意義（P>0.05）。長(zhǎng)重復(fù)組中胰島素抵抗組分布比例為59.38%（19例）、非胰島素抵抗組的分布為40.63%（13例），進(jìn)一步表明胰島素抵抗與AR-CAG的多態(tài)性無直接相關(guān)性，可能是由于AR-CAG的多態(tài)性是在影響雄激素水平的同時(shí)，間接影響胰島素的分泌。

本研究發(fā)現(xiàn)，與國(guó)外相關(guān)報(bào)道的所有患者的SHBG-TAAAA的13種基因型存在明顯差異相比，本文并未得出相似結(jié)果，這可能與患者的種族、地域不同有關(guān)；也可能與該研究的所選取的患者例數(shù)有關(guān)系，該結(jié)論目前還未被認(rèn)可。在對(duì)62例PCOS患者單獨(dú)研究中發(fā)現(xiàn)，9/9基因型的分布在胰島素抵抗組和非胰島素抵抗組中存在顯著性差異（P

綜上所述，PCOS的發(fā)生與AR、SHBG有一定關(guān)系，可對(duì)PCOS的檢查指標(biāo)、PCOS防治、及早診斷起重要作用。

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第5篇：基因多態(tài)性分析的意義范文

[關(guān)鍵詞] 1型糖尿?。痪S生素D受體基因；多態(tài)性；相關(guān)性

[中圖分類號(hào)] R587.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2012）07（c）-0005-03

Association study between the VDR gene Fok I polymorphism and type 1 diabetes

DU Tao1 LIAO Lan2 LI Wangen1 ZHOU Zhiguang3

1.Department of Endocrinology, the Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, Guangdong Province, Guangzhou 510260, China; 2.Department of Endocrinology, the Xiangya Hospital of Central South University, Hunan Province, Changsha 410008, China; 3.Institute of Metabolism and Endocrinology, the Second Xiangya Hospital of Central South University, Hunan Province, Changsha 410011, China

[Abstract] Objective To explore the association between the VDR gene Fok I polymorphism and type 1 diabetes (T1DM). Methods Two hundred and forty-one T1DM patients and 380 healthy subjects were recruited in the research. Length polymorphism polymerase chain reaction (RFLP-PCR) was performed to identify VDR gene Fok I genotypes. Results No differences were observed between T1DM and controls in VDR Fok I genotype distribution and allele frequencies (P > 0.05). In T1DM group, however, lower levels of fasting C-peptide (FCP) and postprandial C-peptide (PCP) were found in Ff and ff genotypes than FF genotype, the differences were statistical significance (P < 0.05). Conclusion There is no association between the VDR gene Fok I genotype and T1DM. VDR gene Fok I Ff and ff genotypes showe lower FCP and PCP levels, which suggest the VDR gene Fok I genotype is associated with islet cell function in T1DM.

[Key words] Type 1 diabetes; VDR gene; Polymorphism; Association study

1型糖尿?。═1DM）屬自身免疫性疾病，以T淋巴細(xì)胞免疫介導(dǎo)的胰島B細(xì)胞功能破壞為特征[1]。T1DM發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，為遺傳因素和環(huán)境因素交互作用的結(jié)果。研究發(fā)現(xiàn)維生素D受體（VDR）與維生素D復(fù)合物后可抑制T細(xì)胞活性[2]，VDR基因多態(tài)性可能與其與復(fù)合物結(jié)合能力相關(guān)，進(jìn)而影響T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)作用。目前國(guó)外已有研究報(bào)道維生素D受體基因Fok I多態(tài)性與T1DM易感性的關(guān)系，但結(jié)論不一致[3-10]。本研究通過分析380例正常對(duì)照者和241例T1DM患者VDR基因Fok I多態(tài)性分布特點(diǎn)，探討VDR 基因Fok I多態(tài)性與T1DM易感性及胰島細(xì)胞功能的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

第6篇：基因多態(tài)性分析的意義范文

【關(guān)鍵詞】 宮頸癌；p53；基因多態(tài)性；臨床意義

Detection of p53 gene polymorphism in cervical cancer and its clinical implication

LI Canyu,ZHANG Zisen,LIU Jihong.Department of Gynecology and Obstetric,The Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China

【Abstract】 Objective To investigate the expression of p53 polymorphism and its relationship with clinical characters of cervical caner.Methods DNA collected from smear was examined by ASP(allele specific polymorphism chain reaction)in 46 cervical cancer and 84 control groups.SPSS 14.0 software was used to analyze statistical difference.Results Pro/pro genotype frequency showed significant difference between patients of cervical cancer and control group.The difference was found only in HPV negative patients,but not in HPV positive ones after subgroup analysis.p53 polymorphism had no correlation with patients’ age at diagnosis,clinical stage,histopathology types,cell differentiation,tumor sizeand lymph node metastasis.Pro/pro genotype frequency between clinical stage,histopathology types,cell differentiation,tumor size and lymph node metastasis were found no correlation to HPV status.Conclusion Pro/pro genotype of p53 polymorphism may play very important role in HPV negative patients of cervical cancer.p53 gene polymorphim has no correlation with pathological features.

【Key words】 Cervical cancer;p53;Gene polymorphism; Clinical implication

宮頸癌在我國(guó)婦女中的發(fā)病率僅次于乳腺癌，位居第二位。p53基因結(jié)構(gòu)的改變已被發(fā)現(xiàn)與多種腫瘤的發(fā)生有關(guān)，大約50%的惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)有p53基因的突變［1］。p53基因第72密碼子的多態(tài)性與惡性腫瘤發(fā)生的關(guān)系成為近年研究的熱點(diǎn)。Storey A［2］等的研究發(fā)現(xiàn)p53基因72位密碼子Arg/arg基因型是發(fā)生宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)因素，然而在歐洲和亞洲的群體研究結(jié)果中并未得到證實(shí)［36］。最近研究中發(fā)現(xiàn)，p53基因72位密碼子Pro/pro基因型的高頻率可能與乳腺癌、鼻咽癌、結(jié)腸癌、子宮內(nèi)膜癌等惡性腫瘤的發(fā)生相關(guān)［710］。本研究就p53基因72位密碼子 Pro/pro基因型與宮頸癌的關(guān)系作了初步探討。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 取2002年9月至2004年5月經(jīng)中山大學(xué)腫瘤防治中心婦科收治、經(jīng)病理證實(shí)的宮頸癌患者46例作為病例組，良性疾病患者84例為對(duì)照組。病例組中位年齡40.9歲，對(duì)照組中位年齡43.8歲，兩組患者具有可比性。根據(jù)FIGO(2003)分期，宮頸癌組中Ⅰa1期4例，Ⅰb1期24例，Ⅰb2期6例，Ⅱa期10例，Ⅱb期2例；組織類型：鱗癌40例，腺癌3例，腺鱗癌3例；細(xì)胞分化：Ⅰ級(jí)2例，Ⅱ級(jí)8例，Ⅲ級(jí)29例，分級(jí)不明7例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移6例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例；宮頸癌體的平均直徑為3.25 cm。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)本的取材及DNA的提取 于治療前取每個(gè)患者的宮頸涂片，用95％的乙醇固定15 min。每張涂片用裂解液(50 mmol/L TrisHCl pH=8.5,1 mmol/L EDTA,0.5%Tween,100 μg/ml蛋白酶K)約100 μl，溶解涂片上的宮頸分泌物,將其轉(zhuǎn)到500 μl的離心管中，置于37℃的恒溫箱中溫育過夜，95℃加熱8 min滅活蛋白酶K,5000×g離心5 min取上清液存于80℃冰箱中備用，或直接用于PCR檢測(cè)。

1.2.2 p53基因多態(tài)性的檢測(cè) 用等位基因特異性PCR(allele specific PCR，ASP)對(duì)提取的DNA進(jìn)行擴(kuò)增(Gene Amp PCR system 9700),引物序列同Storey A［3］等的研究。以雜合型細(xì)胞DNA為陽(yáng)性對(duì)照，雙蒸水為陰性對(duì)照。對(duì)擴(kuò)增的陽(yáng)性對(duì)照的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，并與Genebank中的人類基因組DNA序列(The Human Genome Reference DNA Sequence)進(jìn)行對(duì)比，證實(shí)陽(yáng)性對(duì)照的擴(kuò)增產(chǎn)物為人p53基因第4外顯子的片段，且符合率為 98％。反應(yīng)的總體積為25 μl,包括雙蒸水14.8 μl,10 mmol/L 10×Buffer(含Mg2+)2.5 μl,10 mmol/L dNTP 0.5 μl,引物 2 μl(0.5U/μl)，Taq DNA聚合酶0.2 μl和模板DNA 5 μl。試劑均購(gòu)自申博生物制品有限公司。PCR的循環(huán)條件為：94℃ 4 min；然后94℃ 1 min、60℃ 1.5 min、72℃ 1 min共30個(gè)循環(huán)；最后72℃ 5 min。

1.2.3 p53基因多態(tài)性產(chǎn)物電泳 含1×TAE的緩沖液的電泳槽內(nèi)，PCR產(chǎn)物在2％瓊脂凝膠(含1％的溴化乙啶)中電泳30 min(100 V,33 mA)，紫外光下觀察。p53基因多態(tài)性檢測(cè)中，引物pro+/p53擴(kuò)增的產(chǎn)物為177 bp,引物p53+/arg擴(kuò)增的產(chǎn)物為141 bp。若擴(kuò)增產(chǎn)物只有一條141 bp的條帶，則基因型為Arg/arg純合子；若擴(kuò)增產(chǎn)物只有一條177 bp的條帶，則基因型為Pro/pro純合子；若擴(kuò)增產(chǎn)物同時(shí)出現(xiàn)上述兩條條帶，則基因型為Arg/Pro雜合子。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)宮頸癌組患者的年齡、p53基因型分布、臨床分期、組織類型、腫瘤細(xì)胞分化、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否。用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用四格表、列聯(lián)表進(jìn)行χ2檢驗(yàn)比較基因型的分布差異，采用t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)比較p53基因多態(tài)性與宮頸癌臨床特征之間的關(guān)系。P

為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 p53基因型在宮頸癌與宮頸良性疾病中的分布 對(duì)宮頸癌組及對(duì)照組的HPV狀態(tài)和Pro/pro基因型進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示宮頸癌組中HPV 陽(yáng)性率為47.8％，對(duì)照組中HPV陽(yáng)性率為20.2％。在所有研究對(duì)象中，宮頸癌組Pro/pro基因型頻率高于良性疾病對(duì)照組，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR,3.056;95%CI,1.0768.678)，而其他基因型的比較未顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。以HPV狀態(tài)進(jìn)行分層分析，結(jié)果顯示在HPV檢測(cè)為陰性的研究對(duì)象中，Pro/pro基因型的頻率在宮頸癌組高于良性疾病對(duì)照組，在兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR:5.250,95%CI:1.33520.646)，而在HPV檢測(cè)為陽(yáng)性的研究對(duì)象中，Pro/pro基因型頻率在宮頸癌和對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR:1.037,95%CI:0.1995.410)，見表1。

2.2 Pro/pro型與臨床病理特征的關(guān)系 宮頸癌患者的中位年齡為40.9歲，平均年齡為42.2歲。在宮頸癌組中，p53三種基因型的平均年齡分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。p53基因三種基因型在宮頸癌不同臨床分期、組織類型、細(xì)胞分化、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移之間的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。p53基因Arg/arg、Pro/pro、Arg/Pro基因型的宮頸癌患者的平均腫瘤直徑分別為3.37 cm、3.40 cm、2.80 cm。三種基因型的平均腫瘤直徑分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

進(jìn)一步分層分析Pro/pro基因型與HPV狀態(tài)和臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示Pro/pro基因型在不同臨床分期、細(xì)胞分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移亞組中的分布與HPV感染狀態(tài)無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。

3 討論

p53基因第4外顯子上的第72密碼子存在多態(tài)性［11］。這種多態(tài)性不僅存在于正常組織中，也常見于皮膚癌、乳腺癌、喉癌、頭頸部腫瘤、膀胱癌、食管癌、卵巢癌等腫瘤組織中［12,13］。雖然p53基因第72位密碼子Arg/arg基因型的比例較高，也有研究表明該基因型頻率與宮頸癌的發(fā)生相關(guān)，但是這一結(jié)論未在大規(guī)模群體中得到驗(yàn)證［36］。

近年的研究表明，p53基因第72位密碼子Pro/pro基因型可能是一些惡性腫瘤發(fā)生的高風(fēng)險(xiǎn)因子［710］，也提示與某些腫瘤類型的臨床分期、組織分級(jí)等臨床病理特征存在相關(guān)性。本文對(duì)該基因型在宮頸癌中的分布情況進(jìn)行研究，結(jié)果顯示病例組Pro/pro基因型比例較對(duì)照組明顯為多，差異具有顯著性。進(jìn)一步的分析表明，Pro/pro基因型在宮頸癌和良性對(duì)照組所表現(xiàn)的顯著差異和HPV感染狀態(tài)有關(guān)，這種顯著性差異僅存在于HPV陰性的宮頸癌和良性對(duì)照病例之間，而存在HPV感染的宮頸癌和良性對(duì)照組中則差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此本研究結(jié)果不支持Arg/arg基因型是宮頸癌的高危因素。而Pro/pro基因型則可能是HPV陰性的婦女患宮頸癌的高風(fēng)險(xiǎn)因素。近來韓國(guó)也有研究表明，Pro/pro基因型是該國(guó)婦女宮頸腺癌的易患因素［14］，與本研究不同的是，該研究中的這種高風(fēng)險(xiǎn)主要存在于HPV感染的人群。

分析p53基因多態(tài)性的分布與臨床病理特征的關(guān)系，p53基因型在不同臨床分期、組織類型、細(xì)胞分化的分布的差異同樣無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與Jiang［15］等的研究結(jié)果相一致。分層分析Pro/pro基因型的宮頸癌患者的臨床病理特征與HPV感染狀態(tài)的關(guān)系，也未發(fā)現(xiàn)顯著差異。這可能因本研究的例數(shù)較少，可能存在一定抽樣誤差，此結(jié)論有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣量研究證實(shí)。

本研究對(duì)宮頸癌中p53基因多態(tài)性分布的研究表明，Pro/pro基因型可能是HPV未感染婦女中患宮頸癌的高危因素，這也提示HPV感染和未感染婦女中宮頸癌的發(fā)病機(jī)制可能存在差異，進(jìn)一步明確HPV陰性宮頸癌的發(fā)病機(jī)制可能是今后研究的方向之一。

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第7篇：基因多態(tài)性分析的意義范文

[關(guān)鍵詞] 妊娠期高血壓；亞甲基四氫葉酸還原酶；基因多態(tài)性

[中圖分類號(hào)] R714.246 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2014）10（b）-0011-04

Correlation between MTHFR gene polymorphism and hypertensive disorders in pregnancy

LI Junhua

Department of Obstetrics and Gynecology， Maternal and Child Health Center of Langfang City， Hebei Province， Langfang 065000， China

[Abstract] Objective To explore and analyze the correlation between 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） gene polymorphism and hypertensive disorders in pregnancy. Methods 60 cases with gestational hypertension from June 2013 to June 2014 in Maternal and Child Health Center of Langfang City were as test group， while 60 cases of pregnant women with gestational hypertension in same period were as control group. MTHFR C677T polymorphism and A1298C gene of patients in two groups were tested by PCR-RFLP. Results In the test group MTHFR C677T C/T genotype frequencies was 38.33%， which in the control group was 21.67%； the test group was significantly higher than that in the control group， the difference was statistically significant （χ2=4.03， P < 0.05）. T allele frequency of the mutation in the test group was 24%； T allele mutation in the control group was 16%， the test group was significantly higher than this in the control group， the difference was statistically significant （χ2=4.26， P < 0.05）. MTHFR A1298C A/A genotype frequencies in the test group was 55.00%， and in the control group was 60.00%， there was no significant difference between the two groups （χ2=2.71， P > 0.05）. MTHFR A1298C A/C genotype frequency in the test group was 33.33%， and that in the control group was 26.67%， there was no significant difference between the two groups （χ2=2.66， P > 0.05）. MTHFR A1298C C/C genotype frequencies in the test group was 11.67%， and 13.33% in the control group， there was no significant difference between the two groups （χ2=2.26， P > 0.05）. Mutant allele frequency in the test group of was 76.1%， in the control group was 79.0%， there was no significant difference between the two groups （χ2=2.09， P > 0.05）. C mutant allele frequency in the test group was 23.9%， 21.0% in the control group， there was no significant difference between the two groups （χ2=2.57， P > 0.05）. Conclusion There is significant correlation between gene A1298C MTHFR polymorphism and the incidence of gestational hypertension； and MTHFR gene C677T polymorphism can be a risk factor to pregnancy-induced hypertension， so it can be used as an indicator of evaluation gestational hypertension prognosis， which should be of great importance to clinicians.

[Key words] Gestational hypertension； 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase； Gene polymorphism

妊娠期高血壓疾病作為婦產(chǎn)科臨床上一類發(fā)病率較高的疾病，嚴(yán)重威脅了母嬰的生命健康，但其病因尚未明確，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，妊娠期高血壓疾病病因的研究重點(diǎn)開始集中于與該病發(fā)病相關(guān)的基因上[1]。大量研究表明，高同型半胱胺酸血癥與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生具有相關(guān)性，而5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶（5，10-methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）參與了同型半胱氨酸的代謝，其中編碼基因若出現(xiàn)突變，則會(huì)改變相應(yīng)酶的活性，造成血中同型半胱氨酸水平受到影響[2]。因此，本研究通過分析MTHFR基因的多態(tài)性，研究其與妊娠期高血壓疾病的相關(guān)性，現(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

將河北省廊坊市婦幼保健中心（以下簡(jiǎn)稱“我院”）自2013年6月～2014年6月收治的60例妊娠期高血壓疾病患者作為試驗(yàn)組，所有患者均在我院確診，診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《婦產(chǎn)科學(xué)》第8版，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)通過，并簽署知情同意書?；颊吣挲g24～32歲，平均（28.6±1.5）歲，平均孕齡為（37.4±1.6）周，其中妊娠期高血壓34例，子癇前期26例。另選同時(shí)期我院無妊娠期高血壓疾病的孕婦60例為對(duì)照組，年齡25～34歲，平均（27.9±2.4）歲，平均孕齡為（36.8±1.8）周。所有孕婦均無遺傳性疾病、血液性疾病或生殖器畸形，兩組人員年齡及孕齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2方法

在兩組孕婦入院之后均進(jìn)行處理前抽取空腹12 h的外周靜脈血10 mL，分別置于兩個(gè)試管中，并標(biāo)明1號(hào)試管及2號(hào)試管，其中1號(hào)試管采用乙二胺四乙酸二鈉抗凝后，采用過柱法對(duì)基因組DNA進(jìn)行提取，2號(hào)食管則通過EDTA抗凝，進(jìn)行充分搖勻后，送至離心機(jī)，3000 r/min離心10 min，將上層清液去除后，置于-80℃的超低溫冰箱中保存，分批待測(cè)。對(duì)DNA進(jìn)行提取時(shí)采用Set與Column set兩部分試劑盒進(jìn)行，均購(gòu)自大連寶生物工程有限公司。嚴(yán)格按照試劑盒說明說進(jìn)行操作，以得到純化的高純度基因組DNA。采用熒光定量PCR技術(shù)，檢測(cè)MTHFR C677T、A1298C的基因多態(tài)性。相關(guān)儀器、試劑均購(gòu)自美國(guó)ABI公司。每個(gè)反應(yīng)體系10 μL：1 μL DNA模板（20 ng/μL），5 μL Taqman Universal Master Mix，0.5 μL Taqman-MGB探針，3.5 μL去離子水。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min，92℃變性15 s，60℃延伸1 min，20個(gè)循環(huán)；89℃變性15 s，60℃延伸90 s，30個(gè)循環(huán)。反應(yīng)完成后，在ABI7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品孔中的終點(diǎn)熒光，利用分析軟件確定各個(gè)樣本的基因分型結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組MTHFR基因C677T多態(tài)性比較

試驗(yàn)組MTHFR C677T C/C、T/T基因型頻率與對(duì)照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.58、2.97，均P > 0.05）。試驗(yàn)組MTHFR C677T C/T基因型頻率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.03，P < 0.05）。試驗(yàn)組突變C等位基因頻率與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.43，P > 0.05）。試驗(yàn)組突變T等位基因頻率顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.26，P < 0.05）。見表1。

表1 兩組MTHFR基因C677T多態(tài)性對(duì)比

注：MTHFR：亞甲基四氫葉酸還原酶

2.2 兩組MTHFR基因A1298C多態(tài)性比較

試驗(yàn)組MTHFR A1298C A/A、A/C、C/C基因型頻率與對(duì)照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.71、2.66、2.26，均P > 0.05）。試驗(yàn)組突變A、C等位基因頻率與對(duì)照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.09、2.57，均P > 0.05）。A1298C雜合子聯(lián)合C667T雜合子基因型發(fā)生妊娠期高血壓疾病的危險(xiǎn)性無明顯差異，提示A1298基因多態(tài)性與妊娠期高血壓疾病發(fā)生無密切關(guān)系。見表2。

表2 兩組MTHFR基因A1298C多態(tài)性比較

注：MTHFR：亞甲基四氫葉酸還原酶

3 討論

妊娠期高血壓作為孕婦妊娠期一類特有的疾病，現(xiàn)在臨床上與產(chǎn)后出血、感染、妊娠合并心臟病一同構(gòu)成造成孕產(chǎn)婦死亡的四大原因，為一類多器官損傷性疾病，發(fā)病率高達(dá)7%～10%，極易導(dǎo)致產(chǎn)婦及圍生兒的死亡。而對(duì)其病因及發(fā)病機(jī)制的研究一直作為產(chǎn)科相關(guān)專家及學(xué)者所研究的重點(diǎn)[3]。近年來，隨著醫(yī)療科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，已有大量研究證實(shí)，MTHF基因多態(tài)性與先兆子癇的發(fā)病具有密切的關(guān)系。而據(jù)臨床研究資料顯示，妊娠期高血壓疾病發(fā)病過程中常伴隨著不同程度上的同型半胱氨酸水平升高，而同型半胱氨酸作為半胱氨酸及蛋氨酸代謝過程中的中間產(chǎn)物，其本身與蛋白質(zhì)的合成并無明顯關(guān)系[4]。大量研究表明，同型半胱氨酸不僅可通過誘導(dǎo)細(xì)胞快速進(jìn)入細(xì)胞分裂期達(dá)到促進(jìn)細(xì)胞增殖的目的，同時(shí)還可通過加速低密度脂蛋白的氧化過程，以促進(jìn)并激活血小板的黏附和聚集，從而對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞造成損傷，使其機(jī)體抵抗妊娠期高血壓等疾病的能力明顯下降[5-7]。同型半胱氨酸再甲基化途徑中一類不可或缺的酶即為MTHFR基因所編碼的產(chǎn)物。在同型半胱氨酸再甲基化的過程中，其與甲基供體合成所需的關(guān)鍵物質(zhì)為5-甲基四氫葉酸，該物質(zhì)能幫助二者進(jìn)一步合成四氫葉酸與蛋氨酸。而5，10-甲基四氫葉酸作為5-甲基四氫葉酸的還原前物質(zhì)，完成此過程則需要MTHFR的幫助，即同型半胱氨酸甲基化成為蛋氨酸所必需的葉酸衍生物則為MTHFR[8-9]。

有專家學(xué)者曾于1994年首次克隆出MTHFR基因，之后他們采用DNA測(cè)序技術(shù)及PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)MTHFR基因內(nèi)存在二十余種多態(tài)[10]。另有專家學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)MTHFR C677T突變的雜合子或純合子與MTHFR酶熱不穩(wěn)定性增加或活性下降具有密切的聯(lián)系，此兩種情況可作為誘發(fā)血同型半胱氨酸水平升高的危險(xiǎn)因素。因此，可推測(cè)妊娠期高血壓疾病的發(fā)病與MTHFR基因多態(tài)性具有一定的關(guān)系[11]。MTHFR C677T點(diǎn)突變?yōu)橐环N臨床上較為常見的錯(cuò)義突變，發(fā)生突變的基因?yàn)榈?77位上的胞嘧啶被胸腺嘧啶所取代，造成了纈氨酸取代丙氨酸，從而改變了MTHFR的氨基酸結(jié)構(gòu)，影響了MTHFR酶的活性，最為顯著的表現(xiàn)為MTHFR酶活性下降，這就使得同型半胱氨酸無法正常完成向蛋氨酸的轉(zhuǎn)化，造成血同型半胱氨酸的含量明顯升高[12]。而A1298C點(diǎn)突變作為MTHFR基因在臨床上另一類較為常見的突變類型，是指位于MTHFR基因上的第7外顯子C端調(diào)節(jié)區(qū)域上的腺苷酸被胞嘧啶所取代，造成了谷氨酸被丙氨酸所取代[13]。另外，由于該位置的突變對(duì)MboⅡ內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)造成破壞，這就使得酶的活性明顯降低，因此，MTHFR基因A1298C突變也可作為導(dǎo)致血中同型半胱氨酸水平升高的危險(xiǎn)因素[14]。

本次研究結(jié)果顯示，試驗(yàn)組MTHFR C677T C/T基因型頻率明顯高于對(duì)照組，但A1298C雜合子聯(lián)合C667T雜合子基因型發(fā)生妊娠期高血壓疾病的危險(xiǎn)性無明顯差異。該結(jié)果說明，MTHFR基因是誘發(fā)出現(xiàn)妊娠期高血壓疾病的常見因素，不同位置的點(diǎn)突變具有特異性，但并非都能引起疾病的發(fā)作[15]。通過本次試驗(yàn)研究可知，MTHFR基因C677T多態(tài)性可作為誘發(fā)妊娠期高血壓疾病的危險(xiǎn)因素，同時(shí)可將其作為評(píng)價(jià)妊娠期高血壓疾病預(yù)后情況的一項(xiàng)指標(biāo)，臨床工作者應(yīng)據(jù)此判斷妊娠期高血壓疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并采取有效的治療措施進(jìn)行應(yīng)對(duì)[16]。

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第8篇：基因多態(tài)性分析的意義范文

【摘要】 目的 探討新疆地區(qū)漢族人群血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）基因多態(tài)性與冠心病關(guān)聯(lián)性。方法 應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)限制性內(nèi)切酶方法檢測(cè)了新疆地區(qū)漢族42例冠心病人和82例正常人群ACE基因多態(tài)性。結(jié)果 漢族正常人群的ACE基因三種基因型頻率分別為：DD型19.51%，ID型32.93%，II型47.56%。D和I等位基因頻率分別為36.0%和 64.0%；冠心病人的ACE基因三種基因型頻率分別為：DD型28.57%，ID型30.95%，II型 40.48%。D和I等位基因頻率分別為 44.05%和 55.95%，無顯著性差異（χ2=1.996 8，P＞0.05），且男女之間也無顯著性差異。結(jié)論 ACE基因多態(tài)性與新疆地區(qū)漢族冠心病關(guān)聯(lián)性不大，但值得關(guān)注。

【關(guān)鍵詞】 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶；多態(tài)性； ACE基因；冠心病

血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）是調(diào)節(jié)心血管和泌尿過程的腎素血管緊張素系統(tǒng)的關(guān)鍵酶之一。人類ACE基因位于17號(hào)染色體長(zhǎng)臂q23位點(diǎn)，長(zhǎng)度為21 kb，包括26個(gè)外顯子和25個(gè)內(nèi)含子，其中第16內(nèi)含子存在一段287 bp的DNA序列的插入（I）或缺失（D），構(gòu)成ACE基因I/D多態(tài)性〔1〕。這種基因多態(tài)性分布將有助于從分子水平對(duì)心血管疾病的發(fā)病率及不同種族間的差異提供依據(jù)。國(guó)內(nèi)各地關(guān)于ACE基因多態(tài)性的研究已有報(bào)道〔2～4〕，但在新疆地區(qū)尚未見系統(tǒng)報(bào)道。本文的研究旨在了解新疆地區(qū)漢族種族同源資源的正常人群和冠心病病人ACE基因I/D多態(tài)性分布情況。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

隨機(jī)抽取82例新疆地區(qū)漢族無血緣關(guān)系健康人群和42例漢族冠心病病人靜脈血各3 ml，抗凝，充分混勻后放入-20℃冰箱冷藏室保存待檢。健康人群經(jīng)檢查排除冠心病、高血壓、糖尿病及腦血管病。82例健康人中男47例，女35例，年齡18～62歲，平均（40.6±10.8）歲；42例冠心病人中男31例，女11例，年齡30～79歲，平均（54.5±19.4）歲。冠心病人均符合1979年WHO冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)且心電圖檢查均為陳舊性心肌梗死患者。

1.2 主要儀器

MastercyclerReppendorf PCR儀（梯度核酸擴(kuò)增儀），購(gòu)自上海艾本德生物技術(shù)國(guó)際貿(mào)易有限公司；20 g/L瓊脂糖凝膠電泳 EB染色上海生工生物工程有限公司試劑盒。

UVP AC暗箱+GEL相機(jī)凝膠成像儀，購(gòu)自天美有限公司。

1.3 DNA的提取

取冷藏保存的抗凝全血2.5 ml于1.5 ml離心管（EP）中，加雙蒸水振蕩使紅細(xì)胞破裂，15 000 r/min離心15 min，留取白色沉淀，用酚氯仿異戊醇法提取DNA：取50 μl WBC加入600 μl TES充分顛倒混勻；加入100 g/L SDS 50 μl;加入20 g/L蛋白酶K 2.5 μl，充分顛倒混勻；37℃水浴過夜；加入等體積酚（約700 μl），顛倒混勻2 min，10 000 r/min，離心5 min，取上清液；重復(fù)上述步驟。加入等體積氯仿異戊醇（24∶1），顛倒混勻2 min，10 000 r/min，離心5 min，取上清液。加入2倍體積的冷無水乙醇（-20℃冰箱中儲(chǔ)存的）顛倒混勻，置-20℃冰箱沉淀＞30 min。12 000 r/min，離心20 min（4℃），棄上清。加入750 ml/L乙醇1 ml，小心洗滌沉淀（彈、顛倒混勻），12 000 r/min，離心10 min，棄上清。靜置10～20 min，待管壁殘留的乙醇揮發(fā)干凈后，將沉淀溶于50 μl去離子水中即含DNA。

1.4 引物設(shè)計(jì)與合成

參照文獻(xiàn)〔2〕設(shè)計(jì)引物：上游引物5′CTGGAGACTCCCATCCTTTCT3′；下游引物：5′GATGGCCATTCGTCAGAT3′。

1.5 PCR擴(kuò)增 反應(yīng)體系為15 μl，包括DNA模板0.8 μl、10× Buffer (Mg2+) 1.5 μl，dNTP Mix 1.2 μl，primer上游引物0.1 μl，primer下游引物0.1 μl，Taq polymerase 0.1 μl，純水11.2 μl。PCR儀擴(kuò)增反應(yīng)條件：參數(shù)為95℃預(yù)變性2 min，95℃變性30 s，58℃退火45 s，72℃延伸45 s，共35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸5 min。

1.6 PCR產(chǎn)物鑒定

20 g/L瓊脂糖凝膠電泳，100 V，30 min，置凝膠成像儀上觀察特異性條帶，打印并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

ACE各基因型頻率和等位基因頻率經(jīng)過Hardy Weinberg遺傳平衡定律檢驗(yàn)，各組間頻率比較用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 電泳結(jié)果

經(jīng)PCR反應(yīng)，得到3種基因型：DD型（缺失純合子，只含190 bp片段），ID型（缺失與插入雜合子，含190 bp和490 bp兩種片段），II型（插入純合子，只含490 bp片段），結(jié)果見圖1、圖2。

2.2 新疆地區(qū)健康漢族人群ACE基因頻率

在82例樣品中，DD型 16例，ID型 27例，II型39例，三種基因型的頻率分別為19.51%、32.93%和47.56%；D、I等位基因的頻率分別為36.0%和 64.0%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，這些比例與Hardy Weinberg平衡相一致（χ2=1.403 6，P＞0.05），具有群體代表性。等位基因頻率分布男女間無顯著性差異（χ2=0.788 3，P＞0.05）。見表1。表1 新疆地區(qū)漢族健康人群ACE基因型及等位基因頻率分布〔n(略)〕

2.3 新疆地區(qū)漢族冠心病人ACE基因頻率

在42例樣品中，DD型 12例，ID型 13例，II型17例，三種基因型的頻率分別為28.57%、30.95%和40.48%；D、I等位基因的頻率分別為44.05 %和 55.95%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，這些比例與Hardy Weinberg平衡相一致（χ2=0.153 3，P＞0.05），具有群體代表性。等位基因頻率分布男女間無顯著性差異（χ2=2.268 7，P＞0.05）。見表2。表2 新疆地區(qū)漢族冠心病人ACE基因型及等位基因頻率分布〔n(略)〕

2.4 新疆地區(qū)漢族冠心病人及正常人群ACE基因頻率比較

組間比較無顯著性差異(χ2=1.303 9，P＞0.05)，見表3。表3 新疆漢族冠心病人及正常人群ACE基因頻率比較〔n(略)〕

3 討論

自1990年Rigat〔2〕發(fā)現(xiàn)人ACE基因16內(nèi)含子存在插入（I）/缺失（D）多態(tài)性后，ACE基因多態(tài)性與各種疾病的關(guān)系受到廣泛關(guān)注，近年來迅速發(fā)展的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及遺傳流行病學(xué)方法為疾病的易感基因研究提供了方法和手段。本文采用PCR方法研究了新疆地區(qū)漢族正常人群和冠心病人ACE基因多態(tài)性的分布特點(diǎn)，本研究人群基因型分布符合Hardy Weinberg遺傳平衡，說明樣本來自同一人群，其結(jié)果具有代表性。結(jié)果顯示：新疆地區(qū)漢族正常人ACE的DD、ID、II基因型頻率分別為19.51%、32.93%、47.56%，D、I等位基因的頻率分別為36.0%和 64.0%；冠心病人ACE的DD、ID、II基因型頻率分別為28.57%、30.95 %和40.48%；D、I等位基因的頻率分別為44.05%和 55.95%。兩組三種基因型頻率及等位基因的頻率相似，冠心病人有II基因型頻率及I等位基因頻率減少而DD基因型頻率及D等位基因頻率增加趨勢(shì)，但統(tǒng)計(jì)無顯著性差異，且男女性別之間差異均無顯著意義。這可能與樣本量少有關(guān)，或與其他基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)。環(huán)境因素也值得考慮。高活性的ACE被認(rèn)為是某些心血管疾病、腎病、糖尿病的危險(xiǎn)因素，研究比較國(guó)人不同民族群體的遺傳特點(diǎn)，對(duì)于從分子流行病學(xué)角度了解ACE基因多態(tài)性在我國(guó)人群中的分布，對(duì)認(rèn)識(shí)一些疾病在不同地區(qū)、不同種族表現(xiàn)出來的差異具有重要意義。本研究也為本地區(qū)漢族ACE基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)系提供了理論基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

1 Rigat B，Hubert C，AlhencGdns F，et al.Aninsertion/deleton Polynerphism in the angiotensin Iconverting enigne gene Accounting for habf the variance of serwn tnigme levels〔J〕.J Din Invest，1990;86(4)：13436.

2 龐小芬，朱鼎良，鞏方霞，等.上海地區(qū)正常人ACE基因多態(tài)性頻率的分布〔J〕.高血壓雜志，2001；9（4）：2946.

第9篇：基因多態(tài)性分析的意義范文

[關(guān)鍵詞]白癜風(fēng)；維生素D受體；多態(tài)性

[中圖分類號(hào)]R758.41　[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A　[文章編號(hào)]1008－6455(2007)03－0302－03

白癜風(fēng)是一種以色素脫失為特征的皮膚病，本病影響容貌，治療困難。既往研究表明本病是一種多基因遺傳病，屬于自身免疫病的范疇，由免疫功能異常所導(dǎo)致的黑素細(xì)胞的破壞是本病發(fā)生的主要機(jī)制。維生素D受體(vitamin D Receptor，VDR)是細(xì)胞核激素受體，屬于類固醇激素/甲狀腺受體超家族的成員，維生素D及其衍生物通過VDR發(fā)揮重要的生物學(xué)功能。以往研究證實(shí)VDR不僅參與骨骼的生長(zhǎng)發(fā)育，而且與T細(xì)胞的功能調(diào)節(jié)以及黑素細(xì)胞的生物學(xué)功能明顯相關(guān)，在白癜風(fēng)患者VDR表達(dá)水平降低，這些結(jié)果都表明VDR與白癜風(fēng)有密切的關(guān)系。VDR基因存在單核苷酸多態(tài)性，這些單核苷酸多態(tài)性與多種疾病的易感性有重要的關(guān)系，但是在白癜風(fēng)患者人群VDR基因多態(tài)性的意義尚不明確。本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)和限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性方法研究了中國(guó)漢族人群VDR基因多態(tài)性與白癜風(fēng)的相關(guān)性。

1 研究對(duì)象和方法

1．1　研究對(duì)象：白癜風(fēng)患者組，隨機(jī)選取本院門診白癜風(fēng)患者749例，男性414例，女性335例，均為漢族，年齡2～95歲(平均24.9±13.9歲)。正常對(duì)照組來自同地區(qū)763例無血緣關(guān)系的健康人員，男性413例，女性350例，均為漢族，年齡1～75歲(平均26.2±13.7歲)。

1．2　實(shí)驗(yàn)方法

1．2．1　基因組DNA提?。喝⊥庵芸鼓?ml，用基因組提取試劑盒(天根生公司)提取基因組DNA。

1．2．2　PCR擴(kuò)增及酶切：取基因組DNA約50ng進(jìn)行PeR反應(yīng)，反應(yīng)體積為20μl。取PCR反應(yīng)產(chǎn)物3μl進(jìn)行酶切，酶切總體積為10μl。具體PCR及酶切反應(yīng)條件見表1。

1．2．3　VDR多態(tài)性分析：分別用限制性內(nèi)切酶FokI、BsmI、ApaI、TaqI(NEB公司)對(duì)不同的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切，3％的瓊脂糖凝膠電泳分離酶切產(chǎn)物，EB染色及紫外線投射儀下觀察結(jié)果。分別以4種限制性內(nèi)切酶第一個(gè)字母的大寫F、B、A、T表示缺乏相應(yīng)的多態(tài)性位點(diǎn)，以小寫字母f、b、a、t表示存在相應(yīng)的多態(tài)性位點(diǎn)，f、b、a、t突變位點(diǎn)經(jīng)酶切后分別釋放如下大小的片斷。f:196bp和69 bp，b:177bp和182 bp，a:280bp和210bp，t:290bp和200 bp。

1．3　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：分別統(tǒng)計(jì)病例組和對(duì)照組基因型和等位基因的分布頻率。數(shù)據(jù)經(jīng)Hardy－Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)后，用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。采用卡方檢驗(yàn)，比較白癜風(fēng)患者組和對(duì)照組VDR基因型分布上的差異，并分析VDR基因型與白癜風(fēng)的相關(guān)性。

2　結(jié)果

2．1　Hardy－Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)：對(duì)白癜風(fēng)組及對(duì)照組VDR基因型分布進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果白癜風(fēng)組及對(duì)照組均符合Hardy－Weinberg遺傳平衡(表2)。

2．2　VDR基因型分布：白癜風(fēng)患者VDR BsmI、ApaI、TaqI位點(diǎn)基因型的分布情況與正常對(duì)照組有顯著性差異bb、aa、tt、基因型在白癜風(fēng)患者中頻率較高，F(xiàn)okI位點(diǎn)基因型的分布與正常對(duì)照組無顯著性差異(表3)。

2．3　單倍體分析：結(jié)果顯示FokI位點(diǎn)和BsmI位點(diǎn)之間，kpaI位點(diǎn)、TaqaI位點(diǎn)和BsmI位點(diǎn)兩兩之間均存在較強(qiáng)的連鎖不平衡(表4)，白癜風(fēng)患者中fbAT、FbAT和FbaT單倍體型的頻率顯著高于對(duì)照組，提示7DR基因型為fbAT、FbAT和FbaT的個(gè)體患白癜風(fēng)的危險(xiǎn)性較大(表5)。

3　討論

維生素D受體是甲狀腺激素受體超家族成員，是介導(dǎo)維生素D類活性物質(zhì)1，25－(OH)2D3發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的核內(nèi)大分子，1，25－(OH)2D3不僅參與正常的骨質(zhì)代謝功能，而且還具有其他多方面的作用。臨床研究不僅觀察到白癜風(fēng)患者存在VDR的低表達(dá)，而且發(fā)現(xiàn)維生素D衍生物對(duì)白癜風(fēng)具有治療作用。維生素D在白癜風(fēng)中的作用主要有兩方面：其一是對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)功能，其二是對(duì)黑素細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。

VDR基因存在多個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，這些單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)不同程度地影響維生素D的生物學(xué)功能的發(fā)揮。研究表明VDR基因多態(tài)性與多種自身免疫性疾病以及腫瘤有密切的關(guān)系。李春英。等發(fā)現(xiàn)VDR基因多態(tài)性與黑素瘤有明顯相關(guān)性，Bitlea等在一小樣本研究中也表明VDR基因多態(tài)性與白癜風(fēng)相關(guān)，基于這些研究結(jié)果以及VDR的生物學(xué)特性，我們認(rèn)為VDR基因多態(tài)性可能與白癜風(fēng)有著密切的關(guān)系。