李白的唐詩(shī)精選(九篇)
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第1篇：李白的唐詩(shī)范文
大白兔奶糖里面的那層透明紙是什么 這層紙其實(shí)是用糯米制作出來(lái)的，所以在吃的時(shí)候是完全可以吃的。用糯米粉做出來(lái)的這層糖紙顏色也是透明的，并且沒(méi)有什么味道，特別的薄放到嘴里邊以后是會(huì)直接化掉的，所以在吃的時(shí)候是可以把外面那層糖紙剝開以后直接把糖給吃掉的，并不用撕下來(lái)。是這層糯米糖吃的作用還是非常大的，因?yàn)樗强梢云鸬揭粚颖ｕr膜的作用的，因?yàn)榇蟀淄媚烫鞘菍儆谝环N奶糖，如果溫度比較高的話是很容易化掉的，尤其是在夏季的時(shí)候，放在室溫下也很容易融化變形，但是有了這層糯米糖紙以后就可以很好的防止出現(xiàn)潮濕的情況，所以能夠保存更長(zhǎng)的時(shí)間，而且在撥開以后糖紙也不會(huì)粘在奶糖上，所以在奶糖上才會(huì)有一層這樣的糖紙。
大白兔奶糖里面的那層透明紙有什么用 1、起到保鮮的作用：大白兔奶糖包裹的那層薄薄的透明紙并不是真正的紙做的，而是由糯米做成的薄紙，所以這種紙是完全無(wú)害的，吃到肚子里很快就被消化吸收掉了，所以咱們吃大白兔奶糖的時(shí)候完全不用撕下來(lái)。同時(shí)里面包裹一層這樣的透明紙，相當(dāng)于給奶糖裹上了一層保鮮膜，起到保鮮的作用。
2、防止奶糖變形融化：大白兔奶糖的主要成分就是糖，大家知道糖的熔點(diǎn)很低，一旦遇到高溫就容易變形甚至融化，在夏季尤為明顯，保存不好，奶糖都變成了糖汁，在外面裹上那一層薄薄的透明紙，既可以保持奶糖的形狀還可以起到隔溫，防止奶糖變形或者融化。
大白兔奶糖的特殊含義 1、表示出是個(gè)不錯(cuò)的朋友愿意交流，大白兔奶糖如果是特地準(zhǔn)備的那就代表相處會(huì)甜蜜，如果不是特意準(zhǔn)備的那只是表示對(duì)朋友的認(rèn)可和感謝。
2、甜蜜的意義，大白兔在很多人的記憶力是非常溫馨的回憶。
3、大白兔奶糖的商標(biāo)由一只跳躍狀的兔子和一顆蘑菇組成。跳躍狀的兔子代表著活力，蘑菇代表著生機(jī)。象征著新生代的活力與希望。商標(biāo)活潑可愛，同時(shí)也深受其主要消費(fèi)人群，兒童的喜愛。
大白兔奶糖是位于中國(guó)大陸上海冠生園出品的奶類糖果，1959年開始發(fā)售以來(lái)深受各地人民歡迎。商標(biāo)是一只跳躍狀的白兔，形象深入民心。大白兔奶糖是白色、有嚼勁的圓柱形奶糖，質(zhì)感類似西方的鳥結(jié)糖，長(zhǎng)約3厘米、直徑約1厘米，每顆用可吃的米紙包著，再用包裝紙包好。
第2篇：李白的唐詩(shī)范文
有關(guān)“茶百戲”的記載有見于五代至北宋人陶谷（903-970）的《清異錄》，在該書的《荈茗錄》中記載：“茶至唐始盛。近世有下湯運(yùn)匕，別施妙訣，使湯紋水脈成物象者，禽獸蟲魚花草之屬，纖巧如畫，但須臾即就散滅?！睍性攲?shí)記載了茶百戲是使茶湯“湯紋水脈”形成“禽獸蟲魚花草”等圖案的一門技藝。
有關(guān)“分茶”一詞早期有見于唐代，“大歷十才子”之一的韓岸說(shuō)“晉臣愛客，才有分茶”，在他看來(lái)分茶從晉代開始。但有關(guān)分茶及茶湯形成景象的描述多見于宋代詩(shī)文，如宋代文人楊萬(wàn)里（1127-1206）在《澹庵坐上觀顯上人分茶》中云：“分茶何似煎茶好，煎茶不似分茶巧?！薄凹娙珉⑿跣刑眨奥浜苋f(wàn)變。銀瓶首下仍尻高，注湯作字勢(shì)姚?！痹?shī)中形象地描述了分茶是使茶湯形成文字圖案的神奇藝術(shù)。
分茶（茶百戲）是伴隨著點(diǎn)茶法的形成而產(chǎn)生。據(jù)目前的史料考證，點(diǎn)茶法在唐代中晚期已形成，而分茶也隨之產(chǎn)生。早期在茶碗的茶湯中形成圖案的描述多見于唐代的詩(shī)文。劉禹錫在《西山蘭若試茶歌》描述：“驟雨松聲入鼎來(lái)，白云滿碗花徘徊?！痹?shī)中生動(dòng)地描述了茶湯中形成“白云”和“花”等圖案。此外盧仝在《走筆謝孟諫議寄新茶》中寫道：“碧云引風(fēng)吹不斷，白花浮光凝碗面?！?皎然在《對(duì)陸迅飲天目山茶，因寄元居士晟》記載：“投鐺涌作沫，著碗聚生花?！边@些都是早期在茶碗的茶湯形成圖案的描述，說(shuō)明分茶在唐代已初步形成。
宋代，茶百戲得到較大發(fā)展，主要得益于朝廷以及大批文人、僧人和藝人的推崇。茶百戲已成為當(dāng)時(shí)文人雅士的一種時(shí)尚文娛活動(dòng)，并廣泛運(yùn)用于各種茶會(huì)和斗茶活動(dòng)中，這在宋代的詩(shī)詞和文中有大量描寫。其中，皇帝的推崇對(duì)茶百戲的推廣起到很大作用，宋徽宗不僅撰《大觀茶論》論述點(diǎn)茶和分茶，還親自玩分茶（茶百戲）賜宴群臣。宋徽宗在《大觀茶論》中對(duì)點(diǎn)茶和分茶有如此論述：“……先須攪動(dòng)茶膏，漸加擊拂，手輕筅重，指繞腕旋，上下透徹，如酵蘗之起面。疏星皎月，粲然而生，……”許多文人如陸游、李清照、楊萬(wàn)里、蘇軾、史誥、王之道等都喜愛分茶（茶百戲），留下了許多描述分茶的詩(shī)文。陸游在《臨安春雨初霽》中寫道：“矮紙斜行閑作草，晴窗細(xì)乳戲分茶?！睏钊f(wàn)里在《謝岳大用提舉郎中寄茶果藥物三首日鑄茶》中云：“松梢鼓吹湯翻鼎，甌面云煙乳作花。”史誥《臨江仙》詞中有“春筍慣分茶”之句。女詞人李清照在《滿庭芳》中寫有“生香薰袖，活火分茶”，在《攤破浣溪沙》中還有“豆蔻連梢煎熟水，莫分茶”等描述分茶的詩(shī)文。王之道有《西江月·和董令升燕宴分茶》等等。有宋一朝，分茶活動(dòng)非常普及，男女老幼都會(huì)分茶，帶來(lái)分茶文化的空前鼎盛。
元代后由于點(diǎn)茶和斗茶不再盛行，分茶也開始逐漸衰落，但仍有文人雅士喜愛。關(guān)漢卿套曲《一枝花·不伏老》：“花中消遣，酒內(nèi)忘憂；分茶、竹，打馬藏鬮”。說(shuō)明當(dāng)時(shí)分茶仍是文人喜歡的娛樂(lè)活動(dòng)。
第3篇：李白的唐詩(shī)范文
關(guān)鍵詞 糖尿病 信息化管理 家庭醫(yī)生
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.03.370
Abstract Objective:This study is carried out to understand the effect of Computerized Management of Diabetes Mellitus in Baihe Town,and to provide evidence for computerized management of diabetes mellitus in communities.Methods:We established a government dominated diabetes mellitus computerized management center,and built a computerized management net work,positively exploring a mellitus specialized family doctor managing mode.Results:Through this management,patients' awareness rate of diabetes mellitus rose from 69.91% to 82.27%, and glycaemia monitoring rate was raised from 58.3% to 78.2%,while success rate of glycaemia and glycolated hemoglobin rose from 42.3% to 57.82% and 34.27% to 59.88% respectively. Conclusion: To establish diabetes mellitus computerized management centers is an effective way to improve management of diabetes mellitus patients in communities,and the family doctor serving mode is worthy to be spread in rural areas.
Key Words Diabetes Mellitus;Computerized Management;Family Doctor
在我國(guó)，隨著生活水平的提高和生活方式的改變，糖尿病的患病率明顯升高，有文獻(xiàn)報(bào)道中國(guó)糖尿病已達(dá)9000多萬(wàn)。由于糖尿病是一種慢性病，需要終身治療，大多數(shù)患者是在社區(qū)環(huán)境中進(jìn)行自我管理和監(jiān)測(cè)，因此，要提高居民糖尿病的治療率和控制率，單純依靠醫(yī)院門診治療是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，必須重視并加強(qiáng)開展社區(qū)人群防治和對(duì)患者的干預(yù)管理，才能收到明顯的效果。因此，糖尿病已經(jīng)成為了一個(gè)越來(lái)越值得關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題。就上海市郊白鶴地區(qū)近2年來(lái)開展社區(qū)糖尿病管理的情況作如下報(bào)告。
資料與方法
2009年5月～2011年8月加入糖尿病專項(xiàng)管理的糖尿病患者1055名，男472名，女583名，年齡30～91歲，平均61.7歲。所有患者均經(jīng)二級(jí)及以上醫(yī)療機(jī)構(gòu)確診。
方法：⑴建立社區(qū)糖尿病信息化管理中心：中心建立以社區(qū)科為主要職能科室的糖尿病信息化管理中心，管理中心分患者管理組和家庭醫(yī)生管理組?；颊吖芾硇〗M主要負(fù)責(zé)糖尿病患者的建檔工作，包括資格審核登記、制卡、發(fā)卡及積分兌換工作，糖尿病患者憑二級(jí)以上醫(yī)療機(jī)構(gòu)的疾病診斷可在本中心申請(qǐng)加入糖尿病單病種管理并享有相應(yīng)的優(yōu)惠政策(免費(fèi)血糖監(jiān)測(cè)、上門服務(wù)、獲得積分等)。家庭醫(yī)生管理小組主要負(fù)責(zé)家庭醫(yī)生糖尿病管理的監(jiān)督和考核。⑵建成基于政務(wù)網(wǎng)的糖尿病信息化網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)：利用政務(wù)網(wǎng)網(wǎng)絡(luò)建成中心糖尿病信息化管理數(shù)據(jù)庫(kù)，在中心主要科室及各村衛(wèi)生室電腦終端上加載糖尿病管理軟件，從而實(shí)現(xiàn)糖尿病患者檔案的實(shí)時(shí)更新和信息共享，同時(shí)糖尿病人可以不受區(qū)域限制實(shí)現(xiàn)全網(wǎng)點(diǎn)監(jiān)測(cè)。⑶成立以全科醫(yī)生、鄉(xiāng)村醫(yī)生為主的家庭醫(yī)生制管理隊(duì)伍：積極探索以轄區(qū)為單位的家庭醫(yī)生制糖尿病管理隊(duì)伍，全科醫(yī)生主要對(duì)本轄區(qū)內(nèi)糖尿病患者實(shí)施健康教育、行為習(xí)慣指導(dǎo)、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、藥物指導(dǎo)及雙向轉(zhuǎn)診等。鄉(xiāng)村醫(yī)生以衛(wèi)生室為平臺(tái)對(duì)糖尿病人進(jìn)行生理基礎(chǔ)指標(biāo)及血糖的監(jiān)測(cè)，同時(shí)在病人與全科醫(yī)生之間及時(shí)傳遞信息。主要的管理手段：①健康知識(shí)講座：由健康講師團(tuán)及外聘專家進(jìn)行講課，每個(gè)社區(qū)每季度1次大講課，糖尿病患者可持卡聽課并獲得管理積分。②社區(qū)坐診：全科醫(yī)師每周半天到村衛(wèi)生室坐診，對(duì)糖尿病人進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)解答，飲食指導(dǎo)、藥物指導(dǎo)、心理疏導(dǎo)等。③家庭訪視：對(duì)血糖長(zhǎng)期控制不良的糖尿病患者進(jìn)行家庭訪視，訪視內(nèi)容為強(qiáng)化患者及家屬對(duì)DM相關(guān)知識(shí)的認(rèn)識(shí)，并及時(shí)給予針對(duì)性指導(dǎo)和幫助。④預(yù)約門診：對(duì)長(zhǎng)期在衛(wèi)生室就診且控制不良的患者預(yù)約至中心門診進(jìn)行相應(yīng)的檢查，以早發(fā)現(xiàn)、早治療并發(fā)癥。同時(shí)外聘專家定期進(jìn)行個(gè)體化指導(dǎo)。⑤主題活動(dòng)：在中心建立“慢性病健康馨園”，針對(duì)特定人群開展“我參與、我健康、我快樂(lè)”的比賽，對(duì)在年度內(nèi)各項(xiàng)生理指標(biāo)達(dá)到要求的病人予以獎(jiǎng)勵(lì)，并組織病人到社區(qū)介紹自我管理心得。⑷依托政府財(cái)政作后盾：中心每年向政府申請(qǐng)?zhí)悄虿ｍ?xiàng)管理資金，資金主要用于糖尿病患者免費(fèi)血糖監(jiān)測(cè)、體檢和積分兌換，其余用于設(shè)備維護(hù)和人員成本。
評(píng)價(jià)指標(biāo)：以2009年5月為時(shí)間切入點(diǎn)，對(duì)管理前后糖尿病管理人數(shù)、糖尿病知識(shí)知曉率、血糖監(jiān)測(cè)率進(jìn)行前后比較；對(duì)血糖達(dá)標(biāo)率(空腹血糖≤7.0mmol/L和(或)餐后2小時(shí)血糖≤10mmol/L屬達(dá)標(biāo)，用毛細(xì)血糖儀)；糖化血紅蛋白達(dá)標(biāo)參照美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)(ADA)的建議：＜7%為達(dá)標(biāo)，≥7%為不達(dá)標(biāo)，進(jìn)行前后比較。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：以6個(gè)月1個(gè)管理周期，統(tǒng)計(jì)周期末的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)分析，進(jìn)行X2檢驗(yàn)，以P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié) 果
信息化管理前后糖尿病知識(shí)知曉率、血糖監(jiān)測(cè)率比較。糖尿病信息化管理后糖尿病管理人數(shù)由741人上升至1018人，糖尿病知識(shí)知曉率、血糖檢測(cè)率分別較管理前的69.91%、58.30%上升至目前的82.27%、78.20%，見表1。
信息化管理前后血糖達(dá)標(biāo)率比較：管理后6個(gè)月血糖達(dá)標(biāo)率與管理前相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以后隨著管理時(shí)間的延長(zhǎng)，血糖達(dá)標(biāo)率逐漸增長(zhǎng)。見表2。
信息化管理后糖化血紅蛋白達(dá)標(biāo)情況。信息化管理前未常規(guī)對(duì)糖尿病患者進(jìn)行糖化血紅蛋白檢測(cè)，通過(guò)管理后12個(gè)月、18個(gè)月、24個(gè)月與管理后6個(gè)月作一一比較顯示，隨著管理時(shí)間的延長(zhǎng)，糖化血紅蛋白的達(dá)標(biāo)率逐漸提高。見表3。
討 論
糖尿病是嚴(yán)重危害人體健康的疾病之一，現(xiàn)在我國(guó)已成為發(fā)病率僅次于心血管疾病和惡性腫瘤的占第3位的常見病，嚴(yán)重影響病人生活質(zhì)量。因此，如何建立一套切實(shí)可行的糖尿病管理模式至關(guān)重要，并且在管理過(guò)程中予以不斷加以完善，就本社區(qū)實(shí)施糖尿病管理以來(lái)作如下總結(jié)：①建立社區(qū)糖尿病信息化管理中心是提高社區(qū)糖尿病病人疾病管理的有效途徑。糖尿病管理是一項(xiàng)系統(tǒng)工程，尤其是社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心在管理過(guò)程中要顧及轄區(qū)內(nèi)所有的糖尿病患者，不可能像學(xué)術(shù)研究一樣設(shè)定少量樣本來(lái)進(jìn)行。在當(dāng)今信息化時(shí)代要充分利用計(jì)算機(jī)進(jìn)行智能化管理。本中心在人員配置基本不變的情況下實(shí)現(xiàn)，糖尿病管理人數(shù)成倍增長(zhǎng)，患者信息查詢準(zhǔn)確無(wú)誤。此外，以社區(qū)科為主導(dǎo)的管理中心能夠在整個(gè)中心層面上組織協(xié)調(diào)工作，避免出現(xiàn)醫(yī)療、預(yù)防各自為政的局面。②家庭醫(yī)生制管理模式是社區(qū)慢性病單病種管理的有效手段。當(dāng)前上海市正在積極推行家庭醫(yī)生制服務(wù)，中心以此為契機(jī)嘗試“1+1=1”模式，即一個(gè)全科醫(yī)生+1個(gè)鄉(xiāng)村醫(yī)生=1個(gè)家庭醫(yī)生。通過(guò)各種形式的交流互動(dòng)，家庭醫(yī)生已成為病人得以信賴的朋友，醫(yī)患關(guān)系日益融洽，病人遵醫(yī)行為逐步提升。③與二級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)聯(lián)手是提升糖尿病管理質(zhì)量的關(guān)鍵。慢性病防治離不開醫(yī)務(wù)人員的技術(shù)和能力，區(qū)衛(wèi)生局積極為社區(qū)搭建平臺(tái)，由區(qū)內(nèi)二級(jí)醫(yī)院內(nèi)分泌科專家負(fù)責(zé)社區(qū)醫(yī)生糖尿病管理的規(guī)范化培訓(xùn)，為社區(qū)培訓(xùn)具有一定專業(yè)水平的糖尿病防治隊(duì)伍，同時(shí)鼓勵(lì)專家下鄉(xiāng)服務(wù)，專家與全科醫(yī)生共同參與，資源共享，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)的模式，是社區(qū)慢病管理的有效新途徑，值得進(jìn)一步的探討。④以政府為主導(dǎo)成為社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心開展慢性病管理的有效保障。糖尿病管理是一項(xiàng)社會(huì)工程，單靠醫(yī)務(wù)界的努力是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，農(nóng)村地區(qū)的糖尿病人往往受制于經(jīng)濟(jì)壓力，因此，作為政府部門要切實(shí)體會(huì)到老百姓的疾苦。本社區(qū)在政府財(cái)政的大力支持下設(shè)立糖尿病專項(xiàng)管理資金，由于資金得到保障各項(xiàng)工作開展順利，社區(qū)居民滿意度大幅提升，政府執(zhí)政形象得到認(rèn)可。
參考文獻(xiàn)
1 Wenying Yang,Juming Liu,Jianping Wen,et al.Prevalence ofDiabe.tes among Men and Women in China［J］.N Engl J Med,2010,362(12):1090-1011.
2 賴靜.建立糖尿病管理中心對(duì)社區(qū)病人實(shí)施護(hù)理干預(yù)的效果評(píng)價(jià)［J］.南方護(hù)理學(xué)報(bào),2005,12(9):8-9.
第4篇：李白的唐詩(shī)范文
[關(guān)鍵詞]抗腫瘤活性； 霍山石斛； 糖蛋白； 細(xì)胞毒活性
蘭科植物霍山石斛Dendrobium huoshanense Tang et Cheng，局限分布于安徽省霍山縣及鄰近地區(qū)，其炮制后的干品名為霍斗或金霍斗[1]，霍山石斛的功效作用一直槊鰲⑶灞靜菹晗訃竊兀具有益精強(qiáng)陰、保肝養(yǎng)胃、生津止渴、補(bǔ)虛贏、輕身延年等功效[2]，從 20 世紀(jì) 50 年代末開始，國(guó)內(nèi)科研人員開始霍山石斛資源保護(hù)、可持續(xù)開發(fā)利用等方面研究，取得了一系列成果，特別是其顯著的抗癌功效吸引著國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)其開展了大量科學(xué)研究[36]。
多糖以2種方式發(fā)揮抗腫瘤的活性：一種方式是通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體免疫力進(jìn)而激活免疫系統(tǒng)引起腫瘤細(xì)胞凋亡[714]；另一種方式是直接以其細(xì)胞毒活性而殺傷腫瘤細(xì)胞[1520]。但目前多糖的抗腫瘤活性的研究只限于分離提純后的多糖組分的藥理藥效實(shí)驗(yàn)，尚無(wú)確切的證據(jù)證明和解釋多糖對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒活性的具體物質(zhì)基礎(chǔ)及結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)[2123]。
霍山石斛多糖具有抗腫瘤活性，那么其基礎(chǔ)活性物質(zhì)到底是什么？本團(tuán)隊(duì)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，采用水提醇沉提取霍山石斛粗多糖，再用Sevage法[24]脫蛋白后得到的脫蛋白多糖對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的毒活性明顯低于沒(méi)有經(jīng)過(guò)脫蛋白處理的霍山石斛粗多糖，國(guó)內(nèi)一些學(xué)者也發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象[2526] 。同時(shí)，國(guó)內(nèi)外有研究顯示植物糖蛋白有較強(qiáng)的抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力的作用[2731] 。因此，根據(jù)對(duì)粗制霍山石斛多糖和脫蛋白多糖抗腫瘤比對(duì)效果，假設(shè)霍山石斛多糖中存在一些能被有機(jī)溶劑破壞或除去的糖復(fù)合物，如糖蛋白，這類物質(zhì)是構(gòu)成霍山石斛多糖抗腫瘤的基礎(chǔ)物質(zhì)之一。為驗(yàn)證假設(shè)，利用低鹽溶液浸提加硫酸銨分級(jí)沉淀分離提取出不同的霍山石斛蛋白組分，再經(jīng)DEAE Bsarose Fast Flow 離子柱和SephadexG200凝膠柱分離得到糖蛋白，以粗制多糖、脫蛋白多糖和糖蛋白為研究對(duì)象，檢驗(yàn)霍山石斛糖蛋白是否具備對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的毒活性。
1材料
實(shí)驗(yàn)材料為根系生長(zhǎng)3年以上，當(dāng)年春季抽條越冬后的霍山石斛鮮莖（去葉），按統(tǒng)計(jì)學(xué)方法五點(diǎn)取樣[32]，2016年3月采自安徽省霍山縣衡山鎮(zhèn)柳林河栽培基地（六安臻和生物科技有限公司），由鄧輝副教授鑒定。人肝癌細(xì)胞HepG2（上海奧陸生物科技有限公司），阿霉素 （意大利Actavis Italy SpA， 批號(hào)H20130186）；DEAE Bsarose Fast Flow利穗科技（蘇州）公司產(chǎn)品；Sephadex G200 Sigma 公司產(chǎn)品；NaHCO3、硫酸、苯酚、葡萄糖、無(wú)水乙醇、正丁醇、氯仿、丙酮、考馬斯亮藍(lán)G250/R250、硝酸銀、堿性品紅、偏重亞硫酸鈉、高碘酸、活性炭、甲醇、冰乙酸等均為國(guó)產(chǎn)分析純。
色譜柱（26 cm×55 cm， 16 cm×80 cm），利穗科技（蘇州）有限公司；UV2100 型紫外可見分光光度計(jì)，尤尼柯（上海）儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，天津市紐森科技有限公司；Mini垂直電泳儀，北京六一儀器廠；Allegra15R 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，美國(guó)BECKMAN公司； CO150型CO2培養(yǎng)箱，美國(guó)Thermo公司；Multiskan Spectrum全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀，美國(guó)Thermo公司。
2方法和結(jié)果
21霍山石斛多糖的分離提取將同一種石斛切成薄片后混合，60 ℃烘干至恒重，85 ℃無(wú)水乙醇索氏提取至回流液無(wú)色，揮干溶劑，藥渣按照料液比1∶5加入蒸餾水于80 ℃水浴冷凝回流提取4次，每次3 h[12]。合并濾液并減壓濃縮獲得粗多糖溶液。上述粗多糖溶液，按1∶4加入無(wú)水乙醇，4 ℃冰箱靜置24 h，4 000 r min-1離心5 min，循環(huán)操作3～4次[13]，合并沉淀，60 ℃干燥至恒重，即為粗制多糖[33]。
采用Sevage法[1415]脫蛋白，具體步驟：加入適量蒸餾水，按照樣品溶液萃取劑4∶1加入Sevage試劑（氯仿正丁醇 4∶1），混勻，振蕩30 min。以4 000 r?min-1離心5 min，棄除下層氯仿及中層變性蛋白。取上部水層重復(fù)去蛋白操作，至無(wú)明顯中層為止。收集去蛋白后的上部水層備用。將上述多糖水溶液，通過(guò)超濾裝置超濾，濾膜截留相對(duì)分子質(zhì)量為1 000，脫去小分子物質(zhì)，得到純化后的多糖濃縮溶液。按1∶4加入無(wú)水乙醇，4 ℃冰箱靜置12 h，4 000 r?min-1離心10 min，循環(huán)操作3次[13]，合并沉淀，60 ℃干燥至恒重，即為脫蛋白多糖。
22霍山石斛多糖的細(xì)胞毒活性檢測(cè)取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人肝癌細(xì)胞HepG2，用025%胰蛋白酶消化，細(xì)胞計(jì)數(shù)并用含10%胎牛血清的RPMI 1640 培養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞濃度為1×104～3×104個(gè)/mL，接種于96 孔板，每孔100 μL，放置于37 ℃，5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h 后，每孔分別加入25，50，100，200，400，600，800，1 000 mg?L-1的樣液100 μL，設(shè)6 個(gè)平行孔。給樣后于37 ℃繼續(xù)培養(yǎng)72 h，棄上清液，每孔加入200 μL 新鮮配制的05 g?L-1 MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄上清液，每孔加二甲基亞砜（DMSO）150 μL 溶解，微型振蕩器振蕩混勻，酶標(biāo)儀測(cè)定A，參考波長(zhǎng)490 nm，檢測(cè)波長(zhǎng)570 nm，以RPMI 1640 培養(yǎng)液作陰性（空白）對(duì)照，以阿霉素作陽(yáng)性對(duì)照。按以下公式計(jì)算生長(zhǎng)抑制率，生長(zhǎng)抑制率=[1-（A實(shí)驗(yàn)組-A空白組） /（A對(duì)照組-A空白組） ]×100%，按文獻(xiàn)計(jì)算測(cè)試樣品的半數(shù)抑制濃度（IC50） [34]。MTT比色法檢測(cè)結(jié)果顯示，霍山石斛脫蛋白多糖對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的IC50為95915 mg?L-1，霍山石斛粗制多糖對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的IC50為78638 mg?L-1，陽(yáng)性對(duì)照阿霉素的IC50為092 mg?L-1。
23霍山石斛蛋白的分離提取將干燥粉碎均勻的霍山石斛粉末進(jìn)行低鹽溶液浸提（Nacl 03 mol?L-1、料液比1∶15，室溫，12 h），離心（4 ℃，8 000 r?min-1，20 min），取上清液，用飽和度為30%，70%，100%硫酸銨溶液依次分級(jí)沉淀（4 ℃，12 h），離心（4 ℃，8 000 r?min-1，20 min），流水透析48 h（02 g?L-1疊氮化鈉），聚乙二醇濃縮，分裝為蛋白溶液PRⅠ，PRⅡ，PRⅢ，進(jìn)行SDSPAGE電泳檢測(cè)。
24霍山石斛蛋白的SDSPAGE電泳及蛋白染色和糖染色SDSPAGE電泳[3536]，制備5%濃縮膠、12%分離膠，恒壓電泳，考馬斯亮藍(lán)染色和PAS染色，采用凝膠成像系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理軟件，根據(jù)蛋白Marker，計(jì)算出糖蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量。SDSPAGE 電泳結(jié)果見圖1，可知霍山石斛蛋白溶液PRⅠ，PRⅡ，PRⅢ泳道中均含有未知蛋白條帶，但只有蛋白溶液PRⅡ泳道中含有3條較明顯的糖蛋白條帶，采用凝膠成像權(quán)自配的成像數(shù)據(jù)理軟件，以蛋白Marker相對(duì)遷移率為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算出這3種糖蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量分別為225，198，156 kDa。選擇蛋白溶液PRⅡ組分進(jìn)行進(jìn)一步分離純化。
26霍山石斛糖蛋白復(fù)合物的細(xì)胞毒活性檢測(cè)MTT 比色法檢測(cè)霍山石斛糖蛋白復(fù)合物對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的IC50，操作步驟同22。結(jié)果顯示，霍山石斛糖蛋白復(fù)合物對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的IC50為53423 mg?L-1，陽(yáng)性對(duì)照阿霉素的IC50為091 mg?L-1。
27霍山石斛糖蛋白的凝膠排阻色譜純化取糖蛋白復(fù)合物濃縮液，用Sephadex G200 凝膠柱（16 cm×80 cm）進(jìn)行進(jìn)一步分離純化，水洗脫，收集洗脫液，在考馬斯亮藍(lán)G250染色測(cè)定蛋白的量；用苯酚硫酸法檢測(cè)糖的量。合并同一個(gè)檢出峰中既有蛋白又有糖的檢出管，結(jié)果從多糖蛋白復(fù)合物中得到霍山石斛糖蛋白R(shí)G1，RG2，RG3組分，其糖和蛋白的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1122%，1348%，1837%和8878%，8652%，8163%，然后分別裝入透析袋透析，直至AgNO3檢測(cè)透析液無(wú)渾濁后，聚乙二醇濃縮4 ℃保存。
物質(zhì)基礎(chǔ)之一。為此，分別制備了霍山石斛粗制多糖、脫蛋白多糖和多糖蛋白復(fù)合物，并采用MTT方法檢測(cè)對(duì)其進(jìn)行了人肝癌細(xì)胞HepG2的毒活性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的毒活性，霍山石斛多糖蛋白復(fù)合物>粗制多糖>脫蛋白多糖；實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步分離純化了霍山石斛多糖蛋白復(fù)合物，得到了3種小分子量糖蛋白組分RG1，RG2和RG3，前兩者具有細(xì)胞毒活性，且具有協(xié)同作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果印證了推測(cè)，當(dāng)然實(shí)驗(yàn)并不排除多糖和蛋白本身也具有抗腫瘤活性。同時(shí)，上述純化的糖蛋白組分是否為單一成分，是否同時(shí)具備增強(qiáng)免疫的功效，其主要構(gòu)成單元和抗腫瘤的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是什么，仍需開展更多的研究工作。
[參考文獻(xiàn)]
[1]鄧輝，陳乃富，李耀亭，等 霍山產(chǎn)3種藥用石斛及其雜交優(yōu)勢(shì)種的ISSRPCR分子標(biāo)記鑒別[J] 種子， 2009， 28（2）：43
[2]吳胡琦，羅建平 霍山石斛的研究進(jìn)展[J] 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥， 2010， 21（1）：208
[3]溫云飛 霍山石斛人工快繁及其活性成分的提取分離與結(jié)構(gòu)、藥理學(xué)檢測(cè)和誘導(dǎo)人癌細(xì)胞進(jìn)入Apoptosis過(guò)程的研究[D] 合肥：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)， 1998
[4]張丹丹，黃森，查學(xué)強(qiáng)，等 霍山石斛多糖對(duì)人胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用[J] 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)， 2014， 33（5）：542
[5]張靜，連超群，吳守偉，等 霍山石斛提取物對(duì)人喉癌細(xì)胞Hep2增殖和凋亡的影響及其機(jī)制[J] 中國(guó)生物制品學(xué)雜志， 2011， 24（5）：522
[6]鮑麗娟 四種石斛抗腫瘤活性的研究[D]合肥：合肥工業(yè)大學(xué)， 2007
[7]Ohashi Y， Watanabe M， Ikeda M， et al Regression of metastatic hepatic cancer from gastric cancer by polysaccharide K and UFT administration――a case report[J] Gan To Kagaku Ryoho， 2009， 35（13）：2409
[8]Hu K， Liu Q， Wang S， et al New oligosaccharides prepared by acid hydrolysis of the polysaccharides from Nerium indicum Mill and their antiangiogenesis activities[J] Carbohydr Res， 2009， 344（2）：198
[9]Liu X N， Zhang C Y， Jin X D， et al Inhibitory effect of schisandrin B on gastric cancer cells in vitro[J] World J Gastroenterol， 2007， 13（48）：6506
[10]黃靜， 李勝立， 趙宏偉，等 霍山石斛多糖對(duì)四氯化碳致急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用[J] 中國(guó)中藥雜志， 2013， 38（4）：528
[11]金樂(lè)紅， 劉傳飛， 唐婷，等 石斛多糖抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[J] 中國(guó)藥學(xué)雜志， 2010， 45（22）：1734
[12]田長(zhǎng)城 霍山石斛保肝多糖的結(jié)構(gòu)表征與功效評(píng)價(jià)[D]合肥：合肥工業(yè)大學(xué)， 2015
[13]姜蘇薇 霍山石斛多糖對(duì)非酒精性脂肪性肝損傷的干預(yù)及改善作用研究[D]合肥：合肥工業(yè)大學(xué)， 2012
[14]崔洪霞，劉永利，蔣雪超，等香菇多糖聯(lián)合FOLFOX4化療方案對(duì)中晚期胃癌患者免疫功能和生活質(zhì)量的影響[J]中國(guó)醫(yī)藥，2015，10（7）：996
[15]荊雪寧，武繼彪 中藥多糖誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J] 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志， 2012， 32（8）：1149
[16]許愛華，陳華圣，孫步蟾，等 銀杏外種皮多糖對(duì)人胃癌細(xì)胞凋亡及其凋亡誘導(dǎo)基因表達(dá)的影響[J] 中藥藥理與臨床， 2003， 19（3）：11
[17]石億心，于蓮，翟美芳，等納米山藥多糖對(duì)4種腫瘤細(xì)胞的作用[J]中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2016，33（8）：967
[18]楊燕萍，胡冬根 黃芪多糖對(duì)小鼠胸腺細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用[J] 中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志， 2001， 21（6）：589
[19]李丹青，肖強(qiáng)兵 巴戟天多糖通過(guò)p38 MAPK信號(hào)通路促間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的體外研究[J] 中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志， 2015（5）：1
[20]Wong V K C， Yu L， Chu C H Protective effect of polysaccharides from Angelica sinensis on ulcerative colitis in rats[J] Inflammopharmacology， 2008， 16（4）：162
[21]李員，謝忠禮，朱艷琴，等 靈芝多糖抗腫瘤機(jī)制研究進(jìn)展[J] 中國(guó)藥學(xué)雜志， 2013， 48（16）：1329
[22]季宇彬， 高世勇 羊棲菜多糖體外抗腫瘤作用及其作用機(jī)制的研究[J] 中草藥， 2003， 34（12）：1111
[23]吳梧桐，高美鳳，吳文俊 多糖的抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)天然藥物， 2003， 1（3）：182
[24]周慧萍，朱海燕，陳瓊?cè)A 滸苔多糖的分離、純化和分析[J] 中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)， 1995（1）：91
[25]季宇彬，袁會(huì)成，高世勇，等 龍葵多糖細(xì)胞毒活性物質(zhì)基礎(chǔ)研究[J] 中草藥， 2011， 42（11）：2275
[26]張秀娟，楊?yuàn)檴?半枝蓮多糖體內(nèi)抗腫瘤及其免疫調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J] 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥， 2008， 4（2）：54
[27]Shim J U， Lim K T Inhibitory effect of glycoprotein isolated from Cudrania tricuspidata Bureau on expression of inflammationrelated cytokine in bisphenol Atreated HMC1 cells[J] Inflammation， 2009， 32（4）：211
[28]Sarkar K， Goswami S， Roy S， et al Neem leaf glycoprotein enhances carcinoembryonic antigen presentation of dendritic cells to T and B cells for induction of antitumor immunity by allowing generation of immune effector/memory response[J] Int Immunopharmacol， 2010， 10（8）：865
[29]劉主，朱必鳳，彭凌，等 甘薯糖蛋白SPG1抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用研究[J] 食品科學(xué)， 2007， 28（5）：312
[30]韓澄，聶少平，黃丹菲，等 茶葉糖蛋白調(diào)控樹突狀細(xì)胞對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖和CTL活性的影響[J] 中國(guó)食品學(xué)報(bào)， 2011， 11（1）：7
[31]單保恩，鄭振海，張子杰，等 一種植物由來(lái)的糖蛋白（鄭氏植物蛋白）――腫瘤相同性抗原的研究[J] 中國(guó)免疫學(xué)雜志， 2003， 19（5）：328
[32]李海燕，齊永志，甄文超 河北省小麥紋枯病菌群體組成及致病力分化[J] 植物保護(hù)學(xué)報(bào)， 2015， 42（4）：497
[33]葉振南，邵家坪 粗多糖的提取，分離及結(jié)構(gòu)研究[J] 中國(guó)藥事， 2000， 14（5）：329
[34]牛曉閣，汪森明，丁為民，等 Apogossypolone抑制乳腺癌MCF7細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[J] 腫瘤， 2010， 30（12）：1022
[35]Yang J T， Cai W U， Ying L I， et al Identification and purification of an allergic glycoprotein from Ginkgo biloba Kernel[J] Agric Sci China， 2011， 10（4）：631
[36]Nie S X， Ming Y Study on the purification and chemical compositions of tea glycoprotein[J] Carbohydr Polym， 2008， 71（4）：626[責(zé)任編輯孔晶晶]2017年1月 第42卷第1期Vol42， No 1January， 2017
[收稿日期]20160909
第5篇：李白的唐詩(shī)范文
關(guān)鍵詞：核糖體展示；體外篩選；功能性蛋白；錨蛋白；紅血球膜帶3蛋白
中圖分類號(hào)：Q781
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
文章編號(hào)：1007―7847(2006)01―0028―06
核糖體展示是一種體外篩選功能性蛋白質(zhì)的 有力的工具。首先，Mattheakis等人建立了一種用 于能夠展示和篩選肽的體外系統(tǒng)，隨后由Hanes 和Pluckthun等人正式建立了這種功能性蛋白體 外篩選技術(shù)。迄今為止，這一技術(shù)已經(jīng)被成功地 應(yīng)用于體外篩選與靶分子有親和能力的功能性分 子的相關(guān)領(lǐng)域。與其他的體內(nèi)蛋白質(zhì)篩選系統(tǒng) 不同的是，核糖體展示庫(kù)的建立不需要細(xì)菌轉(zhuǎn)化步 驟，其展示庫(kù)的多樣性能夠得到充分保留。
在特定的反應(yīng)條件下，蛋白質(zhì)基因型和表型 可以通過(guò)mRNA-核糖體-蛋白質(zhì)三聯(lián)體復(fù)合物 的形式聯(lián)系起來(lái)．構(gòu)建的核糖體展示DNA庫(kù)中， 可能包含有編碼靶蛋白例如功能性蛋白的DNA 分子。DNA庫(kù)在體外進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄后的mRNA 純化后可用于體外翻譯，由于構(gòu)建的mRNA分 子缺乏終止子，核糖體會(huì)與mRNA的末端保持結(jié) 合狀態(tài)從而形成mRNA-核糖體，蛋白質(zhì)三聯(lián)復(fù) 合物，在高濃度鎂離子和低溫條件下該復(fù)合物非 常穩(wěn)定。通過(guò)親和結(jié)合作用，利用固定在固相或 溶液中的配體，能夠篩選出與其具有結(jié)合能力的 復(fù)合物。加入EDTA后，可以將結(jié)合下來(lái)的復(fù)合 物的mRNA洗脫下來(lái)．洗脫下來(lái)的mRNA經(jīng)過(guò) 純化可以用作RT-PCR從而恢復(fù)其基因型。逆 轉(zhuǎn)錄PCR產(chǎn)物也可以用于下一輪核糖體展示。 整個(gè)核糖體展示過(guò)程參照?qǐng)D1。
紅血球膜帶3蛋白占人紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)的 25％，是豐度最高的蛋白質(zhì)，它主要包括兩個(gè)結(jié) 構(gòu)域：跨膜區(qū)域和細(xì)胞質(zhì)區(qū)域。紅血球膜帶3蛋 白的細(xì)胞質(zhì)區(qū)域是膜相關(guān)蛋白的錨定位點(diǎn)。錨蛋 白就是其中一種能夠與膜帶3蛋白緊密相連的外 周蛋白。我們利用這一對(duì)能夠緊密結(jié)合的蛋白 質(zhì)分子以驗(yàn)證核糖體展示技術(shù)的正確建立。
在核糖體展示技術(shù)中，體外轉(zhuǎn)錄和翻譯通常 是分開進(jìn)行的，在我們的這篇報(bào)道中利用體外轉(zhuǎn) 錄翻譯偶聯(lián)系統(tǒng)，使DNA庫(kù)的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯同 時(shí)進(jìn)行，從而更加方便和快捷地完成核糖體展示 技術(shù)。
1 材料和方法
1，1 構(gòu)建用于核糖體展示的錨蛋白基因
用于核糖體展示的錨蛋白的構(gòu)建由組裝PCR 完成。其DNA分子模板包括一個(gè)T7啟動(dòng)子，轉(zhuǎn) 錄后的RNA分子包括一個(gè)5＇―和3＇－的莖環(huán)結(jié) 構(gòu)，一個(gè)原核核糖體結(jié)合位點(diǎn)，F(xiàn)lag-tag標(biāo)記的錨 蛋白基因不含終止密碼子，其C末端含有一段作 為間隔子的基因序列(圖2A)。
在第一步中，用引物1和引物2從周建忠博 上饋贈(zèng)的含有cdb3的pGEX-2T質(zhì)粒中擴(kuò)增錨蛋 白基因。在第二步中，利用引物3和引物4從 AndreasPlOckthun教授饋贈(zèng)的PAK200質(zhì)粒中擴(kuò) 噌噬菌體M13的羧基端作間隔子，其作用是確保 新合成的蛋白質(zhì)與核糖體相連，并且能夠利用間 隔子隔出合適的空間以讓新合成的蛋白質(zhì)正確折 疊。將前兩次的PCR產(chǎn)物純化以等摩爾的比例 混合，使用引物4和引物5做連接PCB，將錨蛋白 基因和間隔子連接起來(lái)，在最后一步中，將上一 步的PCR產(chǎn)物用引物6和引物4進(jìn)行擴(kuò)增，引入 T7啟動(dòng)子和5’-莖環(huán)結(jié)構(gòu)。擴(kuò)增步驟和引物序列 見圖2B。
1．2 將配體固定在微孔板的表面
400 ng的edb3溶于100μL的PBS中4℃ 過(guò)夜包被微孔板。包被的微孔板用PBS洗3次， 再用含5％(w／v)BSA和50 mg／LS.cerevisiae RNA(Sigma)的PBS封閉。另外，用含5％(w／v) BSA和50mg／LS．cerevisiaeRNA(Sigma)的PBS 封閉空白孔用作對(duì)照．微孔板用PBS洗5次，用 washing buffer WBT(50 mmol／L Tris-acetate pH 7．5，150 mmol／L NaCl，50 mmol／L magnesiumac－ etate，0，1％Tween-20)洗2次。所有的孔均用冰 預(yù)冷的washingbufferWBT填充滿置于冰上，在用 于親和選擇前至少放置20min。
1.3 體外轉(zhuǎn)錄和翻譯
體外轉(zhuǎn)錄和翻譯采用Invitrogen公司的Ex－ presswayTmPlusExpressionSystem，按操作手冊(cè)進(jìn) 行，201LL的IVPSPlus E．coliExtract，20μL的 2．5xIVPSPlus E．coliReactionBuffer，1μL的T7 EnzymeMix，1μL的75 mmol／Lmethionine，1μL 的200 μmol／LAnti-ssrAoligonucleotide，1μL的 PCRproduct，and 6μL的DNase／RNase-freewater 加入在2．OmL的EP管中，反應(yīng)溶液37℃保溫30 rain，用4倍體積的冰預(yù)冷的WBTH(50 mmol／L Tris-acetatepH 7．5，150 mmol／L NaCI，50 mmol／L magnesium acetate，0．1％Tween-20，2，5 g／L hep- arin，Sigma)終止反應(yīng)。在上清液中加入預(yù)冷的 1／5體積的含有10％(w／v)BSA的WBT。反應(yīng) 混合物在14000S，4t離心5 min后，將上清液 轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的冰預(yù)冷的EP管中。
1.4 核糖體復(fù)合物的親和篩選
把冰預(yù)冷的微孔板中的washingbuffer傾掉， 將翻譯混合物轉(zhuǎn)至cdb3和BSA包被的孔中．將 微孔板在冷室中輕搖l h．傾掉翻譯反應(yīng)液，微孔 板用WBT洗5次，隨后，在孔中加入200 gL冰 預(yù)冷的elutionbufferEB (50mmol／LTris-acetate pH 7．5，150 mmol／L NaCl，50 mg／LS．cerevisiae RNA，20mmol／LEDTA)，冰上輕搖5 min以洗脫 mRNA。洗脫下來(lái)的mRNA用RNeasy kit (Qiagen)進(jìn)行純化．純化后mRNA溶于40 p．L RNase-free I-120中，用RNase-free DNase進(jìn)行處 理，去掉反應(yīng)液中的DNA分子。純化的RNA作 為模板，用引物4和引物5作RT-PCR．PCR產(chǎn)物 可以用作下一輪循環(huán)，或者做TA克隆和測(cè)序，
2 結(jié)果和討論
2.1 構(gòu)建用于核糖體展示的錨蛋白基因
圖3表示為構(gòu)建核糖體展示的錨蛋白基因過(guò) 程中每一輪的PCR產(chǎn)物。在第一輪PCR中我們 用上游引物1和下游引物2擴(kuò)增錨蛋白。引物2 與引物3的部分序列互補(bǔ)。引物3和引物4擴(kuò)增 絲狀噬菌體M13的基因重作為核糖體展示結(jié)構(gòu) 的間隔子。其作用是確保新合成的蛋白質(zhì)與核糖 體相連，并且能夠留出合適的空間讓新合成的蛋 白質(zhì)正確折疊與固定在微孔板上的肽相互作用， 通過(guò)引物5和引物6作PCR在核糖體展示結(jié)構(gòu) 引入體外轉(zhuǎn)錄和翻譯所需的啟動(dòng)子和核糖體 結(jié)合位點(diǎn)，結(jié)構(gòu)中的5’-莖環(huán)結(jié)構(gòu)和3’－莖環(huán)結(jié) 構(gòu)對(duì)于mRNA分子的穩(wěn)定性及其抗RNase作用 非常重要。5’莖環(huán)結(jié)構(gòu)來(lái)源于噬菌體的基因 10，由引物5和引物6引入。3’-莖環(huán)結(jié)構(gòu)來(lái)源于 噬菌體T3的早期翻譯終止子，由引物4引入。
2．2 將配體固定在微孔板的表面
為了避免核糖體展示中的假陽(yáng)性結(jié)果，充分 封閉微孔是十分重要的。我們?cè)?jīng)用只含有5％ (w／v)BSA的PBS對(duì)微孔板進(jìn)行包被，結(jié)果出現(xiàn) 假陽(yáng)性結(jié)果，當(dāng)我們改用含有5％(w／V)BSA和 50 mg／LS，cerevisiae RNA的PBS進(jìn)行包被時(shí)， 這一問(wèn)題得到解決，我們用cdb3包被微孔板的5 個(gè)孔，同時(shí)另外5個(gè)孔用BSA進(jìn)行包被作為對(duì)照。 如果核糖體展示能夠正確工作，只能夠從cdb3包 被孔中的轉(zhuǎn)錄翻譯混合物中擴(kuò)增出錨蛋白基因。
2．3 體外轉(zhuǎn)錄和翻譯
核糖體展示技術(shù)中，轉(zhuǎn)錄和翻譯可以偶聯(lián)進(jìn) 行，也可以單獨(dú)進(jìn)行。由于T7 RNA聚合酶需要 還原劑保持其穩(wěn)定性，所以Schaffitzel etal，建議 當(dāng)核糖體展示用于含有二硫鍵的蛋白，轉(zhuǎn)錄和翻 譯應(yīng)該分開單獨(dú)進(jìn)行。但Coia etat應(yīng)用體外 轉(zhuǎn)錄和翻譯偶聯(lián)的兔網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解系統(tǒng)，通過(guò) 加入氧化型谷胱甘肽能夠展示含有二硫鍵的單鏈 抗體。同時(shí)可以利用真核生物二硫鍵別構(gòu)酶提 高含二硫鍵的蛋白質(zhì)的正確折疊率。由于錨蛋白 是一種不含二硫鍵的蛋白質(zhì)分子，所以我們?cè)诓?用體外轉(zhuǎn)錄和翻譯偶聯(lián)系統(tǒng)中沒(méi)有采取以上兩種 措施。
在大腸桿菌中，如果mRNA不含終止密碼的 話，新合成的蛋白質(zhì)會(huì)被標(biāo)記上一種11個(gè)氨基酸 的肽標(biāo)簽。這一小肽由10SRNA編碼，是ssrA基 因產(chǎn)物。胞質(zhì)和外周胞質(zhì)中的羧基端蛋白酶會(huì)降 解加上這一肽標(biāo)簽的新生肽。所以為了避免展示 系統(tǒng)中新合成的肽被降解掉，我們?cè)谵D(zhuǎn)錄和翻譯 系統(tǒng)中加入了ssrA的反義寡核苷酸。
2．4 核糖體復(fù)合物的親和篩選
我們加了0．5μgPCR產(chǎn)物DNA分子到轉(zhuǎn)錄 翻譯反應(yīng)液中，翻譯完畢以后，將反應(yīng)溶液稀釋 至DNA濃度為0．25、0．05、0．025、0．002 5μg用 于親和篩選。通過(guò)在冰上冷卻并且用4倍體積的 WBTH稀釋終止蛋白翻譯，WBTH中含有的50 mmol／L乙酸鎂進(jìn)一步穩(wěn)定核糖體復(fù)合物．我們 將翻譯混合物分別加人到5個(gè)cdb3包被和BSA 包被的微孔中。由新合成的錨蛋白，核糖體和 mRNA組成的三聯(lián)復(fù)合物會(huì)與固相的cdb3蛋白 結(jié)合，洗滌掉沒(méi)有結(jié)合的三聯(lián)復(fù)合物以后，用elu－ tionbufferEB對(duì)mRNA洗脫，RNA純化后用引物 4和引物5做RT-PCR。擴(kuò)增出來(lái)的PCR產(chǎn)物具 有我們預(yù)期的相對(duì)分子質(zhì)量，進(jìn)行TA克隆并測(cè) 序。多個(gè)克隆的測(cè)序結(jié)果證實(shí)RT-PCR產(chǎn)物是錨 蛋白(圖4)。相反的是，從BSA包被的孔里不能擴(kuò) 增出相應(yīng)的條帶(圖5)。圖4和圖5結(jié)果顯示：我們 只能從cdb3包被孔中的轉(zhuǎn)錄翻譯混合物中擴(kuò)增 出錨蛋白基因，而不能從BSA包被的孔中擴(kuò)增出 錨蛋白基因證明了核糖體展示技術(shù)的可行性。
從圖4和圖5可以看出，只有利用和錨蛋白 有親和能力的cdb3才能從轉(zhuǎn)錄翻譯混合物中親 和篩選得到錨蛋白基因，利用對(duì)照BSA并不能親 和篩選得到錨蛋白，說(shuō)明我們建立的核糖體展示 技術(shù)能夠正常發(fā)揮作用。
第6篇：李白的唐詩(shī)范文
【關(guān)鍵詞】烏蛇敗毒湯；蕁麻疹；慢性濕疹；臨床療效
1概說(shuō)
蕁麻疹，中醫(yī)稱之為“癮疹”，俗名“鬼飯疙疸”。以患者突然感覺皮膚瘙癢，或發(fā)冷發(fā)燒。搔之該部即有充血，浮腫。皮膚表面稍有隆起，浮腫界限明顯，有手指大、掌大或更腫大。顏色為淡紅色或白色，周圍有紅暈。遂搔遂起，很快蔓及全身。形狀圓形或橢圓形，或互相融合呈各種形狀。醫(yī)宗金鑒云：“隱疹……初起皮膚作癢，次則發(fā)為扁平疙疸，形如豆瓣，堆累成片?！逼つw及性病學(xué)云：“蕁麻疹，皮膚徒感瘙癢，隨搔抓而充血，旋起浮腫……此等皮疹發(fā)于身體各處，……有圖畫狀，蛇行狀……等名?！?/p>
濕疹，急性濕疹初起有紅斑及輕度浮腫，次則形成粟粒大或更大之結(jié)節(jié)，以后則出現(xiàn)水泡。炎癥達(dá)一定程度伴有發(fā)燒呈濕潤(rùn)狀態(tài)，由水泡化為膿皰，繼則結(jié)成黃色痂皮，終則形成鱗屑，修補(bǔ)表面而恢復(fù)正常。慢性濕疹則無(wú)急性濕疹定型經(jīng)過(guò)。炎癥持續(xù)日久，故皮膚肥厚。干燥，有時(shí)發(fā)生裂傷。一般濕疹均有劇烈的瘙癢，尤其是在夜間被中溫暖瘙癢更甚，有時(shí)妨礙睡眠。醫(yī)宗金鑒血風(fēng)瘡篇云：“血風(fēng)瘡形如粟米，瘙癢無(wú)度，抓破時(shí)津脂水成片，令人煩躁，口渴瘙癢，日輕夜重?！彼诏徠疲骸八诏徯稳缢冢渖t，搔之愈癢久而不瘥，消耗血液，膚如蛇皮?！睗裾钍嵌喾N多樣的，發(fā)生部位也不一致，如頭部、顏面、、臍、、，關(guān)節(jié)屈折部及手足等處。乳兒常在頭部、耳、額、頰部多見。[1]
其成因多由于汗出當(dāng)風(fēng)，或風(fēng)濕相搏，日久可出現(xiàn)濕郁化熱或血虛風(fēng)燥，[2]臨床根據(jù)患者表現(xiàn)或病因不難做出診斷，但應(yīng)該注意與疥瘡和風(fēng)疹的鑒別。治療宜祛風(fēng)除濕，養(yǎng)血活血清熱為主。
2治療
2.1對(duì)蕁麻疹的治療我們都采用內(nèi)服藥——烏蛇敗毒散加減治療，服法和一般中藥湯劑一樣，即一付藥煎兩次，吃兩次，早晚服用，溫服取汗，目的是使毒從汗解。藥物組成：烏蛇，蟬蛻，防風(fēng)，荊芥，白芷，赤芍，黃芩，黃連，柴胡，當(dāng)歸，甘草共十一味。為治療蕁麻疹，慢性濕疹的內(nèi)服藥主方，在加減上主要根據(jù)癥狀，如高熱、毒盛者重用黃芩、黃連、赤芍，并加銀花、野；瘙癢不止者加苦參、地膚子、白鮮皮；便秘者加大黃、芒硝；腹痛者加川楝子，元胡；遇風(fēng)即起者加玉屏風(fēng)散，牡蠣，麻黃根；遇寒起者加附子，桂枝；遇熱起者加竹葉，蘆根，石膏，花粉。由于其他疾患而合并蕁麻疹者，先治療其主病，待主病漸愈后再酌用烏蛇敗毒湯或加減用之，我們治療一名蜂窩組織炎合并蕁麻疹的患者即是這樣治愈的。
2.2慢性濕疹的治療我們對(duì)慢性濕疹的治療方法是多樣的，如內(nèi)服藥，外敷藥，外洗藥等。
2.2.1內(nèi)服藥與蕁麻疹同，根據(jù)癥狀可以增減。
2.2.2外敷藥雄黃，半夏各等分共研細(xì)面，用醋調(diào)之，濃度如米湯狀，嚴(yán)密敷蓋患處，藥干再敷，如是者日三四遍或更多。濕疹生于毛發(fā)者事先剪掉毛發(fā)，用洗藥洗之再敷藥更效。顏面濕疹，注意不可將藥入目，否則損目。
2.2.3洗藥百部30g蛇床子15g苦參15g白蒺藜15g水煎并加酒適量，溫洗，日3次，每次15-20分鐘。
3典型病例
3.1蕁麻疹病例
例一：宋XX，男性，59歲，農(nóng)民。
主訴：頸部生瘡，身上起疙瘩，特別刺癢。
現(xiàn)病史：項(xiàng)后生瘡已五天，腫，痛。皮膚起疙瘩已有六、七年的病史。每次發(fā)作突然，多在熱炕睡眠時(shí)出現(xiàn)，每次發(fā)作持續(xù)七、八天。疙瘩大小不等，越搔越起，特別刺癢，夜間更重，很快蔓及全身。伴有煩渴，高熱，大便秘結(jié)，小便赤。消退時(shí)不留任何瘢痕。
檢查所見：項(xiàng)后枕骨下端有雞卵大小一個(gè)癰腫，紅腫高大，頂尖含有少量黃白色膿汁。項(xiàng)部及全身各處均有指頭大、掌大的片狀疙瘩。有的融集成群。皮膚輕度浮腫，界限分明。呈淡紅色之浮腫斑點(diǎn)。“劃痕癥”陽(yáng)性。脈象：浮數(shù)有力。舌紅苔黃燥。
處置：烏蛇敗毒湯加減治之。烏蛇9g，蟬蛻12g，荊芥12g，防風(fēng)9g，當(dāng)歸15g，黃芩12g，雙花一兩15g，公英15g，地丁15g，赤芍12g，大黃9g，乳香、沒(méi)藥各12g，甘草6g，元胡9g。五劑，水煎服，渣再煎，早晚食后服之。首次取汗。次第六日復(fù)診時(shí)患者自述，在服藥當(dāng)夜即覺身上疙瘩不在續(xù)起，刺癢大減，早期身上疙瘩全部消失。癰腫疼痛大減，自述比用嗎啡還止痛。
檢查所見：皮膚疙瘩全部消失，沒(méi)有任何瘢痕。項(xiàng)部癰腫大有縮小，并呈軟化狀態(tài)，膿汁亦多。診其脈象：弦而有力。處以原方連服三劑諸癥告愈。唯癰腫化膿尚未愈合，貼一獨(dú)角膏藥經(jīng)數(shù)日而愈。通過(guò)訪視，六年的蕁麻疹至今未發(fā)。
3.2慢性濕疹病例
例一：鐵X，男，一歲。
主訴：（其母代述）患兒頭部生濕疹，刺癢，不眠。
現(xiàn)病史：小兒頭部生瘡已8個(gè)月之久。初起在頭部毛發(fā)處密生小丘疹，刺癢，搔破出黃水，結(jié)痂。嚴(yán)重時(shí)患兒亂搔，哭叫不眠，非敲打頭部患兒不能睡眠。飲食欠佳，大便干燥，三日一行。經(jīng)過(guò)各大醫(yī)院皮膚科及中醫(yī)治療均未收效。
檢查所見：患兒頭部毛發(fā)處均有濕疹叢生，有的結(jié)痂如糠皮狀，有的呈淡紅粟粒狀丘疹，延及項(xiàng)部。
脈象：浮緩。
處置：①內(nèi)服烏蛇敗毒湯加減：烏蛇3g，荊芥6g，防風(fēng)6g，黃芩6g，黃連5g，赤芍9g，歸尾9g，甘草3g，柴胡6g，大黃五分。四劑，水煎服，渣再煎，瀕瀕飲之，蓋被取微汗。囑其緊避風(fēng)寒。②外用藥雄黃半夏散：雄黃，半夏各6g共為細(xì)面，用醋調(diào)之敷患處。藥干再敷，厚則用溫水洗去再敷。一周后來(lái)診，其母代述患兒自服藥和敷藥之后，即能穩(wěn)穩(wěn)熟睡一夜，并未哭叫。同時(shí)病兒亦不用手亂搔，服藥之后沒(méi)有不良反應(yīng)，只有嗜睡現(xiàn)象。
檢查所見：頭部濕疹屑狀結(jié)痂已有脫皮表現(xiàn)。散在的丘疹已現(xiàn)干枯。診其脈象同前沒(méi)有異常變化。
處置：原方三付，服法同前。外用雄黃半夏散一付，用法如前。待五日之后其母來(lái)診，訊其患兒之疾，諸癥消退，已告痊愈。
例二：周X，男，48歲。
主訴：頭皮生瘡。
現(xiàn)病史：2008年始得，全頭部毛發(fā)處生小疙瘩，瘙癢。搔破出黃水，結(jié)痂脫屑。嚴(yán)重時(shí)頭皮浮腫。由于本病特別刺癢，高發(fā)不能留已經(jīng)三年。曾經(jīng)北京、承德、呼和浩特和當(dāng)?shù)氐柔t(yī)院治療，均未收效。
檢查所見：頭部毛發(fā)處均有淡紅色的丘疹，散生毛發(fā)根間，有的結(jié)痂鱗屑狀脫皮。有的，滲出黃水。胡須處亦現(xiàn)丘疹。診其脈象：沉緩無(wú)力。
處置：以烏蛇敗毒湯加減為主。烏蛇9g，荊芥15g，防風(fēng)9g，白芷9g，當(dāng)歸12g，川芎10g，柴胡9g，黃芩9g，連翹9g，赤芍9g，蟬蛻12g，苦參6g，甘草6g，水煎服，渣再煎。首次取汗。連服六劑。
一周后來(lái)診：自述服藥顯著見效，服藥后頭皮沒(méi)有刺癢。但在服第一劑時(shí)眉間及下頜部刺癢起小丘疹，服第二劑刺癢減輕，丘疹減退。診其脈象如前。處置續(xù)以原方六劑，服法同前，不取汗。外用苦參、百部等藥煎水洗患處，日三次，每次20分鐘。
半月后來(lái)復(fù)診：自述服藥期間濕疹大部痊愈。從前頭皮刺癢不能留高發(fā)，現(xiàn)在已將高發(fā)留起。但頭部還有一二處起小疙瘩，輕度刺癢，要求根治。
檢查所見：頭皮屑狀結(jié)痂已不再見，僅有一二處如核桃大小的局部有散在性的丘疹，無(wú)結(jié)痂出黃水的表現(xiàn)，高發(fā)已長(zhǎng)二寸多長(zhǎng)。診其脈象如前。處置：內(nèi)服烏蛇敗毒湯，外用苦參百部水洗之。囑其連續(xù)進(jìn)藥一月，并配合外洗藥，以利根治。用藥期間囑患者宜飲食清淡，生活規(guī)律，暢情志，勿過(guò)勞。后經(jīng)隨訪一年，患者病情已愈，沒(méi)有復(fù)發(fā)。
4分析
祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為氣候的驟變，飲食失節(jié)，起居無(wú)常，精神刺激等因素均可影響身體健康?！秲?nèi)經(jīng)·生氣通天論》曰：“汗出見濕乃生痤疿”，“勞汗當(dāng)風(fēng)寒薄為皶，郁乃痤”?！督饏T要略》曰：“風(fēng)氣相搏必成癮疹，身體為癢”。巢氏病源風(fēng)瘙身體癮疹候曰：“邪氣客于皮膚，復(fù)逢風(fēng)寒相折，則起風(fēng)癢癮疹?！倍F(xiàn)代醫(yī)學(xué)則從引發(fā)本病的病因來(lái)談。主要外因有：“吸入外界的花粉、動(dòng)物毛發(fā)、粉塵等，或攝入某些乳制品、蛋類、魚蝦、香料、蔬菜、水果等引發(fā)，或接觸某些化妝品、日用品等引發(fā)。也有受日光、冷熱等刺激而引起過(guò)敏反應(yīng)或變態(tài)反應(yīng)。內(nèi)因則與某些細(xì)菌、霉菌、寄生蟲的蛋白有關(guān)。[3]烏蛇敗毒湯的整體功效有殺蟲制菌，解毒，清熱，祛風(fēng)解表散寒，養(yǎng)血活血之功。在藥味的配備上，以烏蛇之祛風(fēng)止癢殺蟲治疥廯，佐黃芩、黃連之解毒清熱除濕，用白芷、蟬蛻脫敏止癢，配當(dāng)歸、赤芍之養(yǎng)血和血散滯，借荊芥、防風(fēng)、柴胡之宣散風(fēng)邪解表，用甘草之甘緩協(xié)調(diào)諸藥，通行十二經(jīng)絡(luò)，使藥效盡達(dá)于百骸腠理之間。在服藥頭煎時(shí)取以微汗，力求毒從汗解。不得汗者加桂枝、生姜以助藥力，并酌情溫服熱稀粥，必要時(shí)加蓋衣被以取汗。但要注意避風(fēng)寒。這是治療蕁麻疹、濕疹的用藥目的。用烏蛇敗毒湯治療蕁麻疹、濕疹的關(guān)鍵是必須取汗，否則效果不著。取汗程度要津津微似汗出，而不能令如水流漓。服頭煎取汗后，二煎即不必再汗。如汗出不徹可酌情再汗，但要防止汗多亡陽(yáng)。體虛不能出汗者，可加黨參或人參以助陽(yáng)氣使之汗出，且能防止虛脫。烏蛇內(nèi)服沒(méi)有中毒和副作用現(xiàn)象，但由于個(gè)體差異不同，有的患者使用后感自覺不適，臨床運(yùn)用時(shí)要注意分析，避免不良反應(yīng)發(fā)生。雄黃半夏散的主要作用是有殺菌止癢燥濕之功，佐陳醋可消炎散瘀解毒。用時(shí)調(diào)為米湯之狀，且有潤(rùn)膚作用。二味借醋之潤(rùn)，使燥濕止癢之效更速。因此濕疹之瘙癢頓止，炎癥得以消除。百部草等外洗藥外用有殺蟲止癢之功，配加的白酒又起到溫通經(jīng)絡(luò)、活血散瘀的作用。因此內(nèi)外合治，通過(guò)臨床觀察療效是滿意的，值得推廣。
參考文獻(xiàn)
[1]《皮膚病》.趙炳南.1959年.人民衛(wèi)生出版社，P102頁(yè).
第7篇：李白的唐詩(shī)范文
關(guān)鍵詞：交互式白板；初中生物；有效性
中圖分類號(hào)：G633.91 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1674-9324（2014）27-0205-02
交互式電子白板應(yīng)時(shí)展的需求而出現(xiàn)，它集結(jié)了傳統(tǒng)教學(xué)與如今的信息技術(shù)，將傳統(tǒng)教學(xué)模式與計(jì)算機(jī)、軟件等高科技設(shè)備結(jié)合在一起，為初中生物課堂的教學(xué)注入了新的力量。生物教學(xué)是以實(shí)踐的自然科學(xué)為基礎(chǔ)，教學(xué)內(nèi)容呈多樣性、抽象性、復(fù)雜性，將交互式電子白板引入生物課堂教學(xué)，對(duì)激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣、拓展學(xué)生的視野、提高學(xué)生的學(xué)習(xí)效率都有著重要的作用。
一、關(guān)于交互式白板的概念
交互式電子白板是一種新型的多媒體設(shè)備，它與計(jì)算機(jī)結(jié)合，像黑板一樣，教師可在上面寫字，又能以計(jì)算機(jī)交互式控制對(duì)數(shù)字化材料進(jìn)行呈現(xiàn)與處理。在相關(guān)程序的支持下，構(gòu)建出一個(gè)大屏幕，可以在上面運(yùn)行任何程序，也可以進(jìn)行編輯、保存、注釋文件等操作。
二、利用交互式白板提高初中生物教學(xué)的有效性
（一）激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣
生物課程標(biāo)準(zhǔn)指出，要對(duì)教學(xué)法進(jìn)行改革，改善學(xué)生的學(xué)習(xí)方式，從而激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。交互式白板具有鮮明的圖像、好聽的聲音，可以刺激學(xué)生的感官，給學(xué)生以最直觀的感受。這樣有利于集中學(xué)生的注意力，激發(fā)學(xué)生的熱情以及興趣，提高他們學(xué)習(xí)的積極性與主動(dòng)性。交互式白板引入生物課堂還可以幫助教師優(yōu)化教學(xué)環(huán)境，令學(xué)生很快地融入課堂，從而提升教學(xué)的有效性。比如在講解生態(tài)系統(tǒng)時(shí)，可讓學(xué)生先思考生態(tài)系統(tǒng)中都有哪些成分，然后再根據(jù)學(xué)生的回答將植物、動(dòng)物等這些交互式白板圖庫(kù)中自帶的圖片顯示到空白頁(yè)面上，然后引導(dǎo)學(xué)生思考它們之間的聯(lián)系以及與它們有聯(lián)系的非生物成分，如水、陽(yáng)光等。如果圖庫(kù)中沒(méi)有這些成分，教師可以用專用筆在白板上畫出來(lái)，這樣可使學(xué)生產(chǎn)生興趣，教師要利用學(xué)生的這種好奇心，鼓勵(lì)學(xué)生也來(lái)畫畫。然后讓學(xué)生們對(duì)這些成分進(jìn)行劃分，總結(jié)它們之間的關(guān)系。交互式白板的這種書寫、繪畫功能可以使課堂生動(dòng)、活躍起來(lái)，容易引起學(xué)生學(xué)習(xí)生物課的興趣，將學(xué)生的注意力集中到生物課堂中。
（二）利用交互式白板的多功能進(jìn)行教學(xué)
交互式白板具有很多比較實(shí)用的功能，可與生物課程內(nèi)容緊密聯(lián)系，在生物教學(xué)過(guò)程中得以靈活運(yùn)用，而且很多功能都是一般的多媒體教學(xué)設(shè)備所沒(méi)有的。
1.交互式白板的批注、編輯功能。由于生物學(xué)具有抽象、復(fù)雜的特點(diǎn)，所以常常需要通過(guò)圖片或者結(jié)構(gòu)圖來(lái)給學(xué)生直觀的感受，所以很多時(shí)候需要在結(jié)構(gòu)圖上進(jìn)行標(biāo)注、勾畫、添加注釋等，令學(xué)生能夠從形象的圖中對(duì)知識(shí)點(diǎn)進(jìn)行了解。教師可以將交互式白板調(diào)成批注模式，在此模式下對(duì)制作好的課件進(jìn)行批注，在一些結(jié)構(gòu)圖或視頻上進(jìn)行勾畫，體現(xiàn)出重點(diǎn)難點(diǎn)，為學(xué)生進(jìn)行詳細(xì)的講解，令學(xué)生能夠準(zhǔn)確地抓住重點(diǎn)內(nèi)容。例如在講解血液循環(huán)的時(shí)候，可以播放血液循環(huán)流動(dòng)的視頻，教師可以直接用專用筆在畫面上進(jìn)行適當(dāng)?shù)墓串?，?biāo)明血液流動(dòng)的大致流程，將這種形象化的信息傳遞給學(xué)生，使學(xué)生能夠一目了然，清楚血液循環(huán)的相關(guān)內(nèi)容。這樣不僅減少了教師備課的負(fù)擔(dān)與難度，又能提升學(xué)生的學(xué)習(xí)效率。
2.交互式白板的存儲(chǔ)功能。生物課內(nèi)容繁多，教師備課與講課具有著有一定的難度。交互式電子白板的存儲(chǔ)功能就可以緩解這個(gè)問(wèn)題，教師可將在白板上寫的內(nèi)容存儲(chǔ)到硬盤里或移動(dòng)設(shè)備里，這樣可以方便在下節(jié)課使用。比如在講解大豆種子結(jié)構(gòu)的時(shí)候，可以讓學(xué)生們用專用筆在上面畫出簡(jiǎn)圖，再讓另外的學(xué)生用不同顏色的筆進(jìn)行修改，或?qū)Y(jié)構(gòu)的名字進(jìn)行標(biāo)注與勾畫，最后可以將圖存儲(chǔ)下來(lái)作為以后的生物課使用。同時(shí)還可以打印出來(lái)發(fā)給學(xué)生，學(xué)生可以通過(guò)形象的圖來(lái)對(duì)知識(shí)點(diǎn)加以整理，用來(lái)做課后復(fù)習(xí)或考前準(zhǔn)備。
3.交互式白板的局部放大功能。教室里的黑板、白板等都不是非常大，學(xué)生數(shù)量多，而且生物學(xué)的內(nèi)容抽象，常常需要用圖片來(lái)給學(xué)生做講解，如果圖片很復(fù)雜，就會(huì)導(dǎo)致后面的學(xué)生看不清楚。而交互式白板就可以解決這個(gè)問(wèn)題，教師可以用專用筆在交互式白板上把需要放大的部分圈起來(lái)，圈里的內(nèi)容就會(huì)迅速放大，可以使后面的學(xué)生也能看清楚。例如在講細(xì)胞結(jié)構(gòu)的時(shí)候，教師可以將細(xì)胞結(jié)構(gòu)圖拖到空白頁(yè)面上，然后用專用筆圈起來(lái)，將它放大，這樣使同學(xué)們都能看清細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，從而能充分地對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與組成進(jìn)行了解，提高了學(xué)習(xí)的效率。
4.交互式白板的回放功能。教師在授課過(guò)程中一般都是講一遍，但生物課的內(nèi)容繁雜又不易懂，每個(gè)學(xué)生的學(xué)習(xí)習(xí)慣與學(xué)習(xí)要求也不同，所以對(duì)有些重點(diǎn)知識(shí)只講一遍，學(xué)生是難以全面理解的。應(yīng)該根據(jù)學(xué)生的要求，結(jié)合學(xué)生的學(xué)習(xí)情況，利用交互式白板的回放功能將一些重點(diǎn)難點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行回放。這樣不僅可以滿足不同學(xué)生對(duì)學(xué)習(xí)的需要，令學(xué)生更透徹地掌握知識(shí)，還可以減輕教師的負(fù)擔(dān)，從而增強(qiáng)教學(xué)的有效性
5.交互式電子白板的探照燈功能。初中生們的好奇心雖然很強(qiáng)，但注意力卻很容易分散，尤其是對(duì)生物課這種比較枯燥的課堂。所以教師要采用各種手段吸引學(xué)生的注意力。例如在講解消化道的時(shí)候，可以先展示一張消化系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)圖，然后用專用筆依次將重點(diǎn)部位圈出來(lái)，突顯出每個(gè)部位，讓學(xué)生一起大聲說(shuō)出各部分的名稱，進(jìn)行標(biāo)注，最后總結(jié)。這樣容易引起學(xué)生的注意，使學(xué)生的注意力集中，從而提高學(xué)習(xí)效率。
結(jié)束語(yǔ)：
在提高初中生物課堂教學(xué)有效性的過(guò)程中，交互式電子白板的教學(xué)效率體現(xiàn)在各個(gè)方面，它具有一定的生動(dòng)性和交互性。本文根據(jù)交互式白板多功能的特點(diǎn)，結(jié)合生物學(xué)課堂，對(duì)交互式白板提高初中生物課堂教學(xué)的有效性進(jìn)行了詳細(xì)的分析。交互式白板走進(jìn)生物課堂對(duì)提高課堂效率、培養(yǎng)綜合型人才起到了良好的促進(jìn)作用。
參考文獻(xiàn)：
[1]徐彬，鄧薈予.多功能電子交互白板在中學(xué)教學(xué)中的應(yīng)用[J].教育信息化，2006，（12）.
第8篇：李白的唐詩(shī)范文
我校是一所百年老校,有深厚的電教工作積淀。十五期間,我們把提升學(xué)校信息技術(shù)工作的切入點(diǎn)定位在:把教育科研、教學(xué)研究、信息技術(shù)3項(xiàng)工作相結(jié)合,相互促進(jìn),共同提高。白板集傳統(tǒng)的黑板、計(jì)算機(jī)、投影儀等多種功能于一身,更強(qiáng)調(diào)學(xué)生的參與和師生、生生的互動(dòng),有助于提高學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性、自信心和學(xué)習(xí)質(zhì)量。提高課堂教學(xué)實(shí)效性,活躍課堂教學(xué)氣氛,提高學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性,促進(jìn)學(xué)生思維創(chuàng)新。
二、課題的介紹
1.課題立項(xiàng)
課題引領(lǐng),在中央電教館、北京電教館、西城電教館各級(jí)領(lǐng)導(dǎo)及專家的關(guān)心與支持下,我校申報(bào)了中央電教館“十一五”全國(guó)重點(diǎn)課題“基于交互白板的混合式學(xué)習(xí)研究”之下的子課題“運(yùn)用交互白板創(chuàng)設(shè)有利于學(xué)生積極參與學(xué)習(xí)的課堂教學(xué)模式的研究”。
2.研究目標(biāo)
(1)利用互動(dòng)白板激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣、調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)積極性、增強(qiáng)學(xué)習(xí)主體參與性。
(2)利用基于交互白板的混合式學(xué)習(xí)模式,提高學(xué)生自主學(xué)習(xí)、合作學(xué)習(xí)和探究學(xué)習(xí)的能力。
(3)通過(guò)對(duì)基于交互白板的混合式學(xué)習(xí)模式的研究與實(shí)踐,提高教師的信息技能和素養(yǎng),促進(jìn)教師的專業(yè)化發(fā)展。
(4)利用基于交互白板的混合式學(xué)習(xí)模式,提高課堂教學(xué)實(shí)效性與質(zhì)量、促進(jìn)學(xué)生的綜合發(fā)展和整體發(fā)展。
3.研究方法
本課題研究主要采用行動(dòng)研究法,以點(diǎn)帶面――以實(shí)驗(yàn)班帶動(dòng)全校班級(jí),以布點(diǎn)課為基礎(chǔ),從單節(jié)課白板教學(xué)設(shè)計(jì)的研究,到一個(gè)學(xué)科單元乃至一個(gè)學(xué)期的學(xué)科課程之白板教學(xué)設(shè)計(jì)的研究。多學(xué)科共同進(jìn)展,進(jìn)行全面推廣。輔之以觀察法、調(diào)查法以及案例研究和對(duì)比分析等方法。
4.研究計(jì)劃
根據(jù)課題內(nèi)容分步實(shí)施,按層次推進(jìn)課題的研究。
課題申報(bào)―組建團(tuán)隊(duì)―啟動(dòng)培訓(xùn)―初步研究―中期檢查―深入研究―課題總結(jié)
第一階段:啟動(dòng)階段,制定課題研究與實(shí)施方案,提出課題研究計(jì)劃,成立課題組,培訓(xùn)參加實(shí)驗(yàn)的教師,明確認(rèn)識(shí),提升理論素養(yǎng)。
第二階段:實(shí)施階段,2007年-2008年上半年,實(shí)施研究計(jì)劃,以布點(diǎn)課的形式開展實(shí)驗(yàn),積累案例,收取相關(guān)資料源、信息、記錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程,進(jìn)行一次中期評(píng)估,做好中期階段總結(jié)。
第三階段:總結(jié)與結(jié)題階段,2008年7月-12月,課題組整理研究成果,總結(jié)研究經(jīng)驗(yàn),撰寫結(jié)題報(bào)告,準(zhǔn)備鑒定、結(jié)題和驗(yàn)收。
5.研究人員(見表1)
6.預(yù)期目標(biāo)
(1)交互白板課堂教學(xué)應(yīng)用案例集。
(2)交互白板課堂教學(xué)的課堂實(shí)錄和課件。
(3)有關(guān)交互白板應(yīng)用教學(xué)敘事集。
(4)有關(guān)交互白板應(yīng)用的工作、研究報(bào)告。
三、研究的過(guò)程
1.基本認(rèn)識(shí)
教育教學(xué)是學(xué)校的主旋律;課堂教學(xué)又是教學(xué)的主渠道;任何研究都不能脫離課堂教學(xué);信息技術(shù)不是教學(xué)的裝飾品,也不是教學(xué)的輔助品,而是教育教學(xué)的重要組成部分。量變到質(zhì)變,一定量的積累就可以達(dá)到質(zhì)的飛躍。
2.基本做法
以點(diǎn)帶面,從布點(diǎn)課做起我們完成了大約近幾百節(jié)布點(diǎn)的研究。
我們的主旨是:在課堂教學(xué)中,扎扎實(shí)實(shí)做研究。一節(jié)課一節(jié)課的積累,一節(jié)課一節(jié)課的提高,以具體的課堂教學(xué)研究來(lái)促進(jìn)課題的研究,力爭(zhēng)達(dá)到由量變到質(zhì)變的飛躍。
3.具體做法
(1)白板培訓(xùn)
電子白板的出現(xiàn),一下子就吸引了每一位老師,在培訓(xùn)會(huì)上,老師們就躍躍欲試,開始琢磨如何運(yùn)用電子白板神奇的拖拽功能、回放功能、畫面旋轉(zhuǎn)功能、放大功能、照相功能等。用交互白板創(chuàng)設(shè)有利于學(xué)生積極參與學(xué)習(xí)的課堂教學(xué)模式,提高課堂教學(xué)實(shí)效性,最大限度地挖掘課堂教學(xué)的潛力。
(2)承擔(dān)開題
我校承擔(dān)了中央館在張家界“電子白板教學(xué)研究”開題大會(huì)的現(xiàn)場(chǎng)研究課任務(wù),我校的張京玉老師做的《識(shí)字3》,還承擔(dān)了北京市電教館“十一五”“電子白板教學(xué)研究”課題開題大會(huì)的現(xiàn)場(chǎng)研究課,是我校高培紅老師做的四年級(jí)數(shù)學(xué)《比大小》。
(3)現(xiàn)場(chǎng)展示
在西城區(qū)科研月信息技術(shù)現(xiàn)場(chǎng)會(huì)中,我校的謝薇老師,曾憲婷老師分別做了數(shù)學(xué)《找規(guī)律》,語(yǔ)文《趙州橋》2節(jié)展示課,做這些課時(shí),我們的老師們也是剛剛接觸電子白板,還很不成熟,但是通過(guò)做課,他們走進(jìn)了電子白板,帶領(lǐng)著學(xué)校的老師們走進(jìn)了電子白板。
(4)積極實(shí)踐
運(yùn)用電子白板進(jìn)行教學(xué)得到全體任課教師的認(rèn)可,使用的人數(shù)高達(dá)30余人。做得廣泛,不同學(xué)科(數(shù)學(xué)、語(yǔ)文、英語(yǔ)、美術(shù)、音樂(lè)、計(jì)算機(jī)、科學(xué)、品德與社會(huì)等)的老師在交互電子白板環(huán)境下,結(jié)合學(xué)生特點(diǎn)充分發(fā)揮交互白板的技術(shù)優(yōu)勢(shì),創(chuàng)設(shè)有利于學(xué)生積極參與學(xué)習(xí)的課堂教學(xué)模式。
(5)研討交流
①手拉手友好校
白板搭橋,千里攜手,共謀課改創(chuàng)新路。為了更好的推進(jìn)課題研究,我校與河南靈寶市實(shí)驗(yàn)小學(xué)結(jié)為手拉手友好校。3月28日,在靈寶市實(shí)驗(yàn)小學(xué),我校方銀芝和江莉琴老師以及實(shí)驗(yàn)小學(xué)的王彬、王艷琳、張淑娟、郭秋娟等4位老師分別做了交互式白板教學(xué)觀摩課,贏得了與會(huì)專家、領(lǐng)導(dǎo)、各位同仁的贊嘆。白板總課題組成員、北京市電教館研究室主任趙保和針對(duì)白板教學(xué)和此次現(xiàn)場(chǎng)觀摩課做了重要報(bào)告,會(huì)場(chǎng)上不斷爆發(fā)出熱烈的掌聲。靈寶市實(shí)驗(yàn)小學(xué)的領(lǐng)導(dǎo)及教師也來(lái)到了宏廟小學(xué),我校的謝微老師、曾憲婷老師、楊芳老師、黃穎老師在電子白板平臺(tái)上做了4節(jié)研究課,并與靈寶市實(shí)驗(yàn)小學(xué)的領(lǐng)導(dǎo)及教師就有關(guān)課題研究進(jìn)行交流、座談,大家都感到在交流中很有啟發(fā)和收獲,“手拉手”意味著朋友,手拉著手,傳遞的是溫暖、力量和共同的追求。我們相信這種跨地區(qū)的交流將為我們共同研究的課題注入新的活力。
②中期交流匯報(bào)
張校長(zhǎng)到上海在全國(guó)總課題組召開的課題中期總結(jié)交流大會(huì)上做交流發(fā)言,介紹我校白板課題研究情況,受到與會(huì)專家、領(lǐng)導(dǎo)的好評(píng),并獲得獎(jiǎng)項(xiàng)。
4.提升認(rèn)識(shí)
(1)提升課堂教學(xué)效果
①運(yùn)用電子白板功能,突破教學(xué)重點(diǎn)、難點(diǎn)
在數(shù)學(xué)課上,方銀芝老師的《植樹問(wèn)題》、謝薇老師的《數(shù)學(xué)廣角》、付祖潔老師的《軸對(duì)稱圖形》、李曉龍老師的《觀察物體》,把白板操作工具中獨(dú)有的拖放功能、照相功能、隱藏功能、拉幕功能、涂色功能、即時(shí)反饋功能、旋轉(zhuǎn)功能等,系統(tǒng)擴(kuò)展、豐富了傳統(tǒng)計(jì)算機(jī)多媒體的工具功能,更加提高了視覺效果,更加有利于激發(fā)學(xué)生的興趣,調(diào)動(dòng)學(xué)生多元智能積極參與學(xué)習(xí)過(guò)程。在教學(xué)過(guò)程中讓學(xué)生動(dòng)手操作,突破教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn),體現(xiàn)了“以生為本”的教學(xué)理念,例如謝薇執(zhí)教的《數(shù)學(xué)廣角》,把動(dòng)態(tài)的教學(xué)過(guò)程呈現(xiàn)給學(xué)生,把有序的排列結(jié)果,一一用照相機(jī)功能拍照下來(lái),解決了教學(xué)重點(diǎn),即用多種方法解決問(wèn)題。
如在低年級(jí)的識(shí)字教學(xué)中,教師指導(dǎo)學(xué)生書寫“心”字,字的每一筆在的位置,整個(gè)字的構(gòu)成對(duì)一年級(jí)學(xué)生都是很困難的,教師充分利用電子白板的書寫、回放、放大、縮小、旋轉(zhuǎn)一系列的功能恰到好處地解決了教學(xué)上的難點(diǎn)。
②運(yùn)用電子白板功能,強(qiáng)化師生、生生互動(dòng)
電子交互白板技術(shù)為課堂互動(dòng)師生互動(dòng)、生生互動(dòng)提供了技術(shù)可能和方便,為建立以學(xué)生學(xué)習(xí)為中心的課堂教學(xué)奠定技術(shù)基礎(chǔ)。傳統(tǒng)的多媒體課件更多的是演示功能,課件在演示過(guò)程中學(xué)生無(wú)法參與,因?yàn)檎n件的內(nèi)容無(wú)法更改。而用白板技術(shù)制作的“課件”,為師生在教學(xué)過(guò)程中的互動(dòng)和參與提供了極大的方便。整個(gè)教學(xué)過(guò)程中,學(xué)生可以更改、充實(shí)教師原先的“課件”內(nèi)容,不管是學(xué)生對(duì)知識(shí)的正確理解,還是錯(cuò)誤的回答,只要在白板上操作,白板系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)儲(chǔ)存這些寶貴的資料,從而生成每個(gè)教師每堂課的個(gè)性化的“課件”,并且成為教師以后教學(xué)的重要資源。
例如在方銀芝老師執(zhí)教的數(shù)學(xué)課《植樹問(wèn)題》中,學(xué)生可以自如地?cái)[出植樹時(shí)遇到的各種情況,從而直觀的感悟出數(shù)學(xué)規(guī)律。還可以利用電子白板的回放功能讓學(xué)生回味操作的過(guò)程,達(dá)到所有學(xué)生鞏固所學(xué)知識(shí)的目的。
③運(yùn)用電子白板功能,調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)積極性
曾憲婷老師執(zhí)教的《趙州橋》一課,電子白板中的放大鏡行云流水般地在字詞中流動(dòng),引導(dǎo)學(xué)生讀認(rèn)字詞,在屏幕中直觀地進(jìn)行修改、批注效果非常好。
交互式電子白板教學(xué)研究中我們認(rèn)為對(duì)學(xué)生的學(xué)習(xí)也產(chǎn)生了很大的影響。首先,提高學(xué)生的注意力和理解力。相對(duì)于傳統(tǒng)的黑板教學(xué),白板的視覺效果,比如色彩、隱藏、動(dòng)畫等多種教學(xué)功能,能夠極大地吸引學(xué)生的注意力,并利用多元智能理論,幫助學(xué)生更好地理解和掌握知識(shí)。尤其是學(xué)習(xí)一些比較抽象的知識(shí)和概念時(shí),白板為學(xué)生提供了多種分析和解決問(wèn)題的方法和思路。其次,有利于調(diào)動(dòng)學(xué)生在課堂上主動(dòng)學(xué)習(xí)的積極性和參與性。有研究表明,由于白板教學(xué)更強(qiáng)調(diào)學(xué)生的參與和師生、生生的互動(dòng),使原來(lái)課堂教學(xué)中學(xué)生不注意聽講、做小動(dòng)作、隨意說(shuō)話等現(xiàn)象大大減少,提高了學(xué)生的學(xué)習(xí)質(zhì)量、學(xué)習(xí)動(dòng)力和學(xué)習(xí)自信心。
④運(yùn)用電子白板功能,強(qiáng)化學(xué)生記憶提升教學(xué)效果
數(shù)學(xué)課《找規(guī)律》一課中,使用回放功能把雜亂的行走的路線清晰地一條一條呈現(xiàn)在學(xué)生們眼前,使學(xué)生們很快理清了頭緒,形成了找規(guī)律的概念。使用照相功能,把學(xué)生們不同的排列情況一一留住并呈現(xiàn)在屏幕上,是學(xué)生形成一個(gè)整體的概念。這個(gè)效果是其他教學(xué)手段不可代替的。如美術(shù)課中黃老師將示范作畫的過(guò)程,在電子白板屏幕上進(jìn)行回放,使教師的指導(dǎo)作畫過(guò)程更流暢、更清晰、更完整地呈現(xiàn)在學(xué)生們的眼前。
(2)提升教師的信息素養(yǎng)及全方位素質(zhì)
交互式電子白板的推廣和有效利用,讓教師改變了傳統(tǒng)教育觀念,提高教師的教育技術(shù)能力和信息素養(yǎng),革新課堂教學(xué),有效地提高課堂教學(xué)效果和效率。交互式電子白板使課堂教學(xué)過(guò)程顯得更流暢,教師的個(gè)人魅力得到最大的展示,教學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化。電子白板的功能和交互性的充分發(fā)揮,有利于優(yōu)化教學(xué)環(huán)境和學(xué)習(xí)環(huán)境,提高學(xué)生對(duì)信息的關(guān)注度,使信息交流、傳遞形成多通道結(jié)構(gòu),因而有利于提高信息傳輸和接受信息的效率利用。電子白板的相關(guān)記錄、儲(chǔ)存教學(xué)資源、教學(xué)過(guò)程的功能,便于教師課后的反思、研討和觀摩,便于教學(xué)經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)和整理,促進(jìn)教師和課堂教學(xué)在方式上的改變。
(3)提升學(xué)校教育信息化水平
作為全國(guó)首批中小學(xué)現(xiàn)代教育技術(shù)實(shí)驗(yàn)校。我們深深感到:現(xiàn)代信息技術(shù)與學(xué)校的發(fā)展密不可分,信息技術(shù)就是教育生產(chǎn)力,它極大地促進(jìn)了教育教學(xué)的改革與學(xué)校的發(fā)展。
四、收獲和思考
1.收獲
(1)利用互動(dòng)白板激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣、調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)積極性、增強(qiáng)學(xué)習(xí)主體參與性,提高學(xué)生自主學(xué)習(xí)、合作學(xué)習(xí)和探究學(xué)習(xí)的能力。
(2)通過(guò)對(duì)基于交互白板的混合式學(xué)習(xí)模式的研究與實(shí)踐,提高教師的信息技能和素養(yǎng),促進(jìn)教師的專業(yè)化發(fā)展。
(3)利用基于交互白板的混合式學(xué)習(xí)模式,提高課堂教學(xué)實(shí)效性與質(zhì)量、促進(jìn)學(xué)生的綜合發(fā)展和整體發(fā)展。
第9篇：李白的唐詩(shī)范文
關(guān)鍵詞：壓力性尿失禁；膠原蛋白；核心蛋白聚糖；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1
The Connective Tissue Around the Urethra in Patients with Stress Urinary Incontinence of Decorin and TGF- β 1 mRNA Expression Level Change
OU Lu
(Department of Gynaecology and Obstetrics,Nanhai District People's Hospital Foshan City,Foshan 528200,Guangdong,China)
Abstract：ObjectiveTo observe the relationship between the expression of decorin and TGF-β1 mRNA in periurethral vaginal tissue in patients with stress urinary incontinence(SUI).MethodsTransvaginal biopsies were obtained from the periurethral vaginal tissue in 35 SUI and 30 non SUI control postmenopausal women.RT-PCR were used to verify the mRNA level of decorin and TGF-β1.Results The expression of decorin was significantly higher and the expression of TGF-β1 was significantly lower in patients with SUI.The expression of decorin mRNA was highly and negatively related to the expression of TGF-β1 mRNA.Conclusion Our study results suggest that the decrease of TGF-β1 expression and increase of decorin expression,might reduce the quantity of collagen of periurethral vaginal tissue,and which involved in the pathogenesis of SUI.
Key words：Stress urinary incontinence;Collagen;Decorin;TGF-β1
隨著人口老齡化和人們對(duì)生活質(zhì)量要求的提高，壓力性尿失禁成為了婦女常見的一種疾病[1]。壓力性尿失禁的發(fā)生是由于盆底結(jié)締組織和韌帶的支撐力減弱而引起的盆底功能障礙性疾病，故常與盆底其它臟器的功能障礙合并存在。膠原為結(jié)締組織的主要成分，且目前大多數(shù)研究表明，SUI和POP患者其結(jié)締組織膠原的含量均有所改變，且呈減少的趨勢(shì)，但其減少的原因尚不清楚。本文通過(guò)對(duì)SUI患者尿道周圍結(jié)締組織中TGF-β1、DCN mRNA表達(dá)水平的檢測(cè)及兩者相關(guān)性的研究，分析其在SUI發(fā)病中的作用，進(jìn)一步闡明SUI的發(fā)病機(jī)理。
1資料與方法
1.1一般資料2007年4月~2010年1月在佛山市南海區(qū)人民醫(yī)院及廣州醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的絕經(jīng)后婦女65例，根據(jù)是否存在SUI，分為SUI組（35例）和對(duì)照組（30例）。根據(jù)病史、婦科檢查、護(hù)墊試驗(yàn)和尿動(dòng)力學(xué)檢查結(jié)果符合SUI診斷標(biāo)準(zhǔn)者入組SUI組，對(duì)照組無(wú)盆底器官膨出和尿失禁癥狀。所有入選者近3個(gè)月內(nèi)未服用激素類藥物，術(shù)后病理結(jié)果證實(shí)無(wú)子宮內(nèi)膜異位癥、子宮肌瘤、功能性卵巢腫瘤等雌激素相關(guān)疾病，尿液分析無(wú)尿路感染。在征得患者的知情同意后，術(shù)中取近宮頸膀胱韌帶處陰道前壁粘膜下筋膜組織1.0cm×1.0cm×0.5cm，量約100mg，迅速置于液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>
1.2組織總RNA的提取按Trizol試劑盒說(shuō)明提取組織總RNA。（Trizol Reagent 購(gòu)自invitrogen 公司）
1.3引物設(shè)計(jì)與合成RT-PCR引物根據(jù)GenBank中相關(guān)基因的序列設(shè)計(jì)，由上海英駿生物工程公司合成。
1.4 RT-PCR按照Invitrogen公司的SuperScript Ⅲ First-Strand Synthesis System 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書將提取的組織總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，在PE9600 PCR儀上進(jìn)行PCR：96℃2 min預(yù)變性，然后按96℃變性30sec，53℃－59℃退火30sec，72℃延伸45sec，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min。RT-PCR產(chǎn)物用2％瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定。
1.5半定量分析取PCR產(chǎn)物5μl，加6×loading buffer 1μl，2％瓊脂糖凝膠電泳（100V，40min），產(chǎn)物經(jīng)凝膠成像儀和圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析，分別測(cè)定DCN、TGF-β1和β-actin的A值，并以其比值（DCN/β-actin、TGF-β1/β-actin）表示DCN和TGF-β1 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。
1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。通過(guò)兩樣本t檢驗(yàn)和雙變量相關(guān)分析對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。
2結(jié)果
SUI組患者尿道周圍結(jié)締組織中DCN mRNA表達(dá)水平為1.87±0.35,對(duì)照組為0.94±0.16，t=11.121，P
1,2,3:絕經(jīng)后SUI組患者 4,5,6:絕經(jīng)后對(duì)照組患者
圖1 兩組患者DCN mRNA擴(kuò)增后凝膠電泳結(jié)果
1,2,3:絕經(jīng)后SUI組患者 4,5,6:絕經(jīng)后對(duì)照組患者
圖2 兩組患者TGF-β1 mRNA擴(kuò)增后凝膠電泳結(jié)果
3討論
近年來(lái)，關(guān)于SUI患者盆底支持組織中膠原蛋白改變的研究較多，目前，多數(shù)研究認(rèn)為，SUI患者盆底結(jié)締組織中總膠原蛋白含量下降，并認(rèn)為膠原蛋白數(shù)量的減少導(dǎo)致了韌帶、筋膜等支持結(jié)構(gòu)的松弛，最終導(dǎo)致SUI發(fā)生[2]，而導(dǎo)致SUI患者盆底組織膠原蛋白含量減少機(jī)制至今尚不清楚。余燕等研究發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)前后SUI患者陰道前壁組織中膠原含量減少且TGF-β1 mRNA表達(dá)水平下降[3]。DCN通過(guò)與TGF-β的受體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，起到抑制TGF-β促進(jìn)膠原蛋白合成的作用，是一種體內(nèi)天然的TGF-β負(fù)性調(diào)節(jié)因子，另一方面，DCN能結(jié)合在膠原纖維表面，通過(guò)調(diào)整膠原纖維的C－末端，在膠原形成起始階段延遲膠原的組裝，使膠原合成減少，林益彬等研究發(fā)現(xiàn)SUI患者尿道周圍結(jié)締組織中Ⅲ型膠原含量減少，可能是由于組織中DCN表達(dá)增強(qiáng)所致進(jìn)而提示DCN mRNA表達(dá)增強(qiáng)可能是SUI發(fā)生的一個(gè)原因[4]。
本研究結(jié)果顯示，絕經(jīng)后SUI患者尿道周圍結(jié)締組織TGF-β1 mRNA的表達(dá)水平較對(duì)照組顯著減少，DCN mRNA的表達(dá)水平較對(duì)照組顯著升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且兩者呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。結(jié)果提示SUI尿道周圍結(jié)締組織中膠原含量的減少，可能是由于DCN生成增加，使TGF-β1的基因表達(dá)減少，從而使該部位膠原纖維的生成減少，同時(shí)，由于DCN增多使得膠原的組裝延遲，而使膠原蛋白合成減少?？蛇M(jìn)一步進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)以了解盆底支持組織中DCN和TGF-β1 蛋白表達(dá)水平的改變情況。基于本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，通過(guò)抑制盆底支持組織中DCN mRNA的表達(dá)，促進(jìn)TGF-β1 mRNA的表達(dá)，是否可起到增加局部膠原含量和提高SUI治愈率的作用，有待于進(jìn)一步的研究證實(shí)。
參考文獻(xiàn)：
[1]宋巖峰,李亞欽,許波.福州市社區(qū)女性尿失禁發(fā)病現(xiàn)狀的分析[J].中華婦產(chǎn)科雜志,2004,39:257-259.
[2]孫智晶,郎景和,朱蘭.膠原狀態(tài)與壓力性尿失禁的病因?qū)W研究[J].中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志,2004,5（1）：6-8.
