基于數(shù)據(jù)庫的仿制藥生物實(shí)驗(yàn)研究

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1文獻(xiàn)檢索

計(jì)算機(jī)檢索CNKI數(shù)據(jù)庫、萬方數(shù)據(jù)庫和維普數(shù)據(jù)庫，檢索字段為“關(guān)鍵詞:生物等效”，檢索來源為“中國學(xué)術(shù)期刊網(wǎng)絡(luò)出版總庫”，發(fā)表時(shí)間為2016年3月至2018年8月。剔除宏觀分析類、政策解讀類、組織管理類文獻(xiàn)和重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)，納入統(tǒng)計(jì)的涉及具體品種的研究專論共53篇［4－56］。

2生物等效性試驗(yàn)設(shè)計(jì)方面

2.1受試者及例數(shù)

與2005年頒布的《化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》［57］(以下簡稱2005版《指導(dǎo)原則》)相比，2016版《指導(dǎo)原則》明確了BE試驗(yàn)需有適當(dāng)比例的男女受試者，對(duì)于受試者沒有例數(shù)要求，但明確指出入選受試者的例數(shù)應(yīng)滿足BE評(píng)價(jià)具有足夠的統(tǒng)計(jì)學(xué)效力的要求，即根據(jù)已有的參比制劑的q、CV%值和把握度等參數(shù)來設(shè)定例數(shù)。文獻(xiàn)中適應(yīng)證為男女人群的50個(gè)BE試驗(yàn)中只有4個(gè)試驗(yàn)選取了部分健康女性受試者，其余的均只選擇健康男性受試者或未寫明性別。對(duì)于部分抗腫瘤藥物或精神類藥物，出于安全性考慮，美國FDA建議申請(qǐng)人招募病程穩(wěn)定、并在BE研究期間接受治療的目標(biāo)患者。如甲磺酸伊馬替尼片，F(xiàn)DA個(gè)藥指導(dǎo)原則［58］中建議受試者為已經(jīng)接受穩(wěn)定劑量伊馬替尼的癌癥患者，但EMA個(gè)藥指導(dǎo)原則［59］中受試者為健康人群，我國發(fā)表的文獻(xiàn)及備案的甲磺酸伊馬替尼片BE試驗(yàn)中，有用健康受試者也有用患者的。文獻(xiàn)中受試者例數(shù)在16～50例，對(duì)于高變異的藥物，應(yīng)考慮增加試驗(yàn)的樣本量。如伏立康唑片，個(gè)體內(nèi)變異大，研究者采用48例健康受試者。只有2018年發(fā)表的3篇文獻(xiàn)對(duì)把握度進(jìn)行了驗(yàn)算，以說明試驗(yàn)選取的受試者例數(shù)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

2.2餐后生物等效性

餐后BE研究不應(yīng)忽視。2016版《指導(dǎo)原則》明確寫明“對(duì)于僅能與食物同服的口服常釋制劑，除了空腹服用可能有嚴(yán)重安全性方面風(fēng)險(xiǎn)的情況外，均建議進(jìn)行空腹和餐后兩種條件下的BE試驗(yàn)。如有資料充分說明空腹服藥可能有嚴(yán)重安全性風(fēng)險(xiǎn)，則僅需進(jìn)行餐后BE試驗(yàn)”。食物對(duì)生物利用度影響的研究目前在國內(nèi)尚未引起足夠的重視，在需要進(jìn)行空腹和餐后BE試驗(yàn)的50篇文獻(xiàn)中，有3篇未注明受試者空腹或餐后狀態(tài)，其余只有9篇文獻(xiàn)開展了空腹和餐后兩種條件下的BE實(shí)驗(yàn)。

2.3參比制劑的選擇

我國為指導(dǎo)仿制藥質(zhì)量與療效一致性評(píng)價(jià)工作的開展，CFDA了《普通口服固體制劑參比制劑選擇和確定指導(dǎo)原則》［59］，其中明確了參比制劑選擇的3個(gè)原則:首選國內(nèi)上市的原研藥品，其次選擇在國內(nèi)上市國際公認(rèn)的同種藥物，如果上述2種藥品均未在國內(nèi)上市，也可選擇在歐盟、美國、日本上市并被列為參比制劑的藥品。截至2018年10月我國已17批參比制劑目錄。所有文獻(xiàn)中有39個(gè)品種的參比制劑選擇符合原則要求，5個(gè)品種選擇了國內(nèi)已上市其他廠家生產(chǎn)的同一品種作為參比制劑;9個(gè)品種選擇了同一品種的其他劑型作為參比制劑，另有2篇文獻(xiàn)未寫明所選擇的參比制劑名稱、廠家、批號(hào)等信息。

3生物樣本測(cè)定方法

3.1生物樣本測(cè)定方法

目前國內(nèi)外大多采用液質(zhì)聯(lián)用法(LC－MS/MS)測(cè)定血藥濃度。在檢索到的57篇文獻(xiàn)中，除1個(gè)品種使用肝素ATⅩa因子顯色法測(cè)定人血漿中低分子量肝素的濃度外，有14個(gè)品種選用HPLC法，其余均用HPLC－MS/MS法測(cè)定血藥濃度，特異性和靈敏度更高，分析速度更快，檢測(cè)所需血漿樣本體積小。文獻(xiàn)多以蛋白沉淀法對(duì)血漿樣本進(jìn)行前處理，前處理過程簡單，所得基質(zhì)效應(yīng)較低，更適用于臨床大樣本量快速分析。有11篇文獻(xiàn)未寫明測(cè)定采用的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，失去作為科研論著的參考價(jià)值。

3.2生物樣本測(cè)定方法學(xué)考察

2015版《中華人民共和國藥典》和2016版《指導(dǎo)原則》對(duì)開展BE試驗(yàn)需要進(jìn)行的方法學(xué)研究內(nèi)容進(jìn)行了詳細(xì)的要求。為了保證分析方法可靠，必須進(jìn)行充分的方法確證，一般應(yīng)進(jìn)行特異性、標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍、定量下限、精密度與準(zhǔn)確度、樣品穩(wěn)定性、提取回收率等幾方面的考察，但仍有10篇文獻(xiàn)未提及所進(jìn)行的方法學(xué)研究，文獻(xiàn)中方法學(xué)研究內(nèi)容存在的問題有以下幾點(diǎn)。樣品的穩(wěn)定性考察不完善由于BE試驗(yàn)樣本從采樣到檢測(cè)的周期通常需要幾周至幾個(gè)月，在其貯存期間目標(biāo)藥物的穩(wěn)定性需經(jīng)考察驗(yàn)證。指南中要求應(yīng)考察:樣本室溫放置穩(wěn)定性，短期、長期貯存穩(wěn)定性，凍融穩(wěn)定性，制備后穩(wěn)定性，對(duì)照液和內(nèi)標(biāo)液的穩(wěn)定性等。但有些試驗(yàn)設(shè)計(jì)不完善，如長期穩(wěn)定性的考察時(shí)間不夠，未能覆蓋從第1個(gè)樣本采集至最后1個(gè)樣本分析的時(shí)間周期;僅考察1個(gè)濃度樣品的穩(wěn)定性;未考察內(nèi)標(biāo)液的穩(wěn)定性等。未進(jìn)行基質(zhì)效應(yīng)研究用免疫法及LC－MS/MS法等測(cè)定方法時(shí)，均應(yīng)對(duì)基質(zhì)效應(yīng)的研究情況進(jìn)行說明。比如用LC－MS/MS分析，特別是電噴霧離子化(ESI)方式時(shí)基質(zhì)效應(yīng)通常比較明顯，優(yōu)化樣品前處理過程、提高色譜分離效果可減少基質(zhì)效應(yīng)。所有文獻(xiàn)中只有9篇對(duì)基質(zhì)效應(yīng)的研究。其他部分文獻(xiàn)研究了特殊基質(zhì)條件下，加入定量下限和定量上限水平的分析物進(jìn)行測(cè)定，以考察方法學(xué)的選擇性。部分文獻(xiàn)考察了稀釋可靠性。部分文獻(xiàn)考察了殘留效應(yīng)，通過檢查第2周期給藥前血漿濃度，來直接確定殘留的可能性。另有部分文獻(xiàn)還進(jìn)行了樣品再分析(ISR)，在方法驗(yàn)證中使用校正標(biāo)樣和質(zhì)控樣品可能無法模擬實(shí)際試驗(yàn)樣品，通過在不同天后，在另外一個(gè)分析批中重新分析試驗(yàn)樣品，來評(píng)價(jià)實(shí)際樣品測(cè)定的準(zhǔn)確度。

4BE的判定標(biāo)準(zhǔn)

BE試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析，主要是用藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC和Cmax經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后以多因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，然后用其幾何均值進(jìn)行雙側(cè)和單側(cè)t檢驗(yàn)以及計(jì)算90%置信區(qū)間的方法來評(píng)價(jià)和判斷制劑間的BE。在生物利用度試驗(yàn)中，采用多因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以判斷藥物制劑間、個(gè)體間、周期間和服藥順序間的差異。所有文獻(xiàn)中有16篇文獻(xiàn)未進(jìn)行差異分析。目前我國BE判定標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)與FDA和EMA一致，均采用的等效性范圍是受試制劑與參比制劑AUC和Cmax幾何均值比的90%置信區(qū)間均應(yīng)在80%～125%。有11篇文獻(xiàn)未寫明參比和受試制劑幾何均值比的90%置信區(qū)間。

5其他需要關(guān)注的問題

有部分文獻(xiàn)未提及試驗(yàn)過程中的藥物不良反應(yīng)觀察結(jié)果，部分文獻(xiàn)中參與統(tǒng)計(jì)計(jì)算的人數(shù)少于入組人數(shù)且未說明脫落的原因。一些促胰島素分泌反應(yīng)的降糖藥，有可能在給藥30min內(nèi)發(fā)生低血糖等藥物不良反應(yīng)。有部分文獻(xiàn)參考FDA制定的BE研究指導(dǎo)原則，給予研究藥物時(shí)用20%葡萄糖240mL送服，并且服藥后的4h內(nèi)，每15min給予20%葡萄糖水60mL，給藥后1，4h進(jìn)行指血血糖檢測(cè)，這樣可以有效地避免或降低藥物不良反應(yīng)的發(fā)生率。

作者：劉倩 南楠 薛晶 許鳴鏑 單位:中國食品藥品檢定研究院