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外面霓虹閃爍,喜歡夜生活的人們?nèi)齼蓛傻芈交蛘咦哌M(jìn)酒吧、咖啡館、舞廳,而我對(duì)這些都沒(méi)有興致,我想去郊外看月亮,我想坐在油菜花間感受歲月回溯。陸凡去車(chē)庫(kù)倒車(chē),我說(shuō)你喝酒了,還是別自己開(kāi)車(chē),他說(shuō)往郊外去的話(huà),應(yīng)該沒(méi)事。
四月的夜晚,有淡淡的月光,有暖暖的風(fēng),還有若隱若現(xiàn)的花香。我搖下車(chē)窗,讓風(fēng)吹進(jìn)來(lái),我被酒精灼燒的臉感受著微風(fēng)的撫慰,甚是愜意。路邊的白楊已經(jīng)枝繁葉茂,投下斑駁的影子。陸凡并不多話(huà),雖然我們認(rèn)識(shí)近十五年了,我們從沒(méi)有肆無(wú)忌憚地說(shuō)過(guò)話(huà),都是非常謹(jǐn)慎地交往,非常有禮節(jié)性地吃飯和喝酒。因?yàn)樗俏业拈|中密友小雪的丈夫,而小雪和我的感情非常深厚,她曾經(jīng)對(duì)我說(shuō)過(guò)一句話(huà):我們什么都可以共享,除了陸凡。她是一個(gè)聰明的女子,她這句看似玩笑的話(huà)界定了我和陸凡相處時(shí)的分寸,同時(shí)也表明了她對(duì)我的情誼。而陸凡對(duì)小雪也是深?lèi)?ài)的,就算我穿著鏤花的睡衣在他面前走動(dòng),他也不會(huì)動(dòng)心??蛇@個(gè)春天開(kāi)始,我們交往多了起來(lái),因?yàn)樗托⊙┑母星槌霈F(xiàn)了問(wèn)題,已經(jīng)鬧到準(zhǔn)備離婚的地步,我作為小雪的密友,當(dāng)然有義務(wù)來(lái)調(diào)解和勸說(shuō)。今天我從外地趕過(guò)來(lái),是為了參加明天的同學(xué)聚會(huì)。小雪并不知道我來(lái)這個(gè)城市,我只是發(fā)了短信給陸凡,讓他去車(chē)站接我。晚上,他為我接風(fēng)洗塵,而且為我把賓館開(kāi)好,現(xiàn)在又帶著我來(lái)郊外兜風(fēng)。
我問(wèn)陸凡現(xiàn)在和小雪是否和好了,他淡淡地說(shuō):就那樣。我說(shuō),什么叫就那樣???你們那時(shí)候感情真的很好,讓人羨慕。他就笑說(shuō):估計(jì)是我太寵她了,所以……可你如果繼續(xù)寵她的話(huà),日子不是很美好?他輕輕嘆息一聲說(shuō):她不該背著我和舊情人約會(huì)。再說(shuō),她的舊情人也是我的同學(xué),大家可以一起聚聚,為何要撇開(kāi)我?我說(shuō),那是因?yàn)樗履闵鷼?。呵呵,她要是怕我生氣,就更不?yīng)該去見(jiàn)他。我反問(wèn)他:那我們現(xiàn)在不也隱瞞了小雪而單獨(dú)在一起嗎?他說(shuō):這個(gè)不一樣。我說(shuō),有什么不一樣?他就不說(shuō)話(huà)了。
很快,我們就來(lái)到了一片開(kāi)闊的田野,完全離開(kāi)了城市的視線(xiàn)。月光有些朦朧,這和子夜的霧氣有關(guān)。淡淡的霧氣輕紗一般罩在油菜花上,時(shí)而濃稠時(shí)而疏淡,我伸手撫摸油菜花蕊,一種濕漉漉的氣息浸入我的手心。
陸凡見(jiàn)我欣喜地?fù)崦@些花朵,就說(shuō):和小雪比起來(lái),你更喜歡浪漫,對(duì)吧?我說(shuō),是啊,女人都這樣。不過(guò)小雪是一個(gè)很現(xiàn)實(shí)的女人,她是一個(gè)理智型的人,適合做妻子。陸凡不說(shuō)話(huà),他就掐著腰,站在我身邊。月光下,他給我的感覺(jué)不太真實(shí),好像他不是陸凡,而是我曾經(jīng)的一個(gè)戀人,他和小雪應(yīng)該沒(méi)有關(guān)系。我邊走邊胡思亂想起來(lái),他就默默跟著我,像一個(gè)貼身保鏢。田坎里有蠶豆花,像是星星的眼睛,我蹲下身子盯著它們看,我想知道它們?cè)谙胧裁础?/p>
你想什么呢?累不累?不如我們坐下歇一會(huì)兒。陸凡見(jiàn)我沉默著,就關(guān)切地問(wèn)我。我說(shuō),想一些過(guò)去的事情。你累的話(huà),我們就坐會(huì)兒,然后回去。我看看地面很潮濕,陸凡已經(jīng)從口袋里掏出一張報(bào)紙鋪墊在田坎上,我們相挨著坐下。他突然拿起我的手,問(wèn)我冷不冷。其實(shí)他已經(jīng)知道我的手冰涼如水。我沒(méi)有抽回自己的手,他就用雙手把我的手攥在掌心。接著又騰出一只手在我手上摩挲。他說(shuō):你的手好軟,你的皮膚很細(xì)。見(jiàn)我沒(méi)有抗拒的意思,他就試圖把手滑向我的胸,我推開(kāi)了他。我說(shuō):不要這樣,我感覺(jué)小雪在看著我們。他說(shuō):你別老是想著她!他再次把手伸進(jìn)來(lái),我再次把它們拿開(kāi)。雖然我的內(nèi)心已經(jīng)翻卷著熱浪,我的呼吸也變得急促,但我還是無(wú)法忽視小雪的偷窺,是的,她好像就站在不遠(yuǎn)處看我。陸凡稍微停頓一下,他把我攬進(jìn)他的懷里,輕輕地拍著我的肩膀,無(wú)限愛(ài)憐地說(shuō):你一個(gè)人真不容易!一個(gè)女人是需要男人來(lái)愛(ài)的。我的心里竟然涌起了感動(dòng),同時(shí)也有了感傷。陸凡能夠這樣理解我,我的內(nèi)心柔軟起來(lái),我渴望他能愛(ài)我一次。可是……他不是一般的男人啊,他是我密友的丈夫!我的內(nèi)心掙扎起來(lái),他也知道我矛盾的心理,就說(shuō):要是你感覺(jué)內(nèi)疚,那就算了。其實(shí),這并不影響誰(shuí),你總是把問(wèn)題想得那么嚴(yán)重。他說(shuō)著就站起身,我既安慰又失落。我拽著他的手也站起來(lái),可他一下子又把我抱緊,然后瘋狂地親吻我。我已經(jīng)無(wú)力抗拒,我邊流淚邊迎合他,我們交纏在一起……我發(fā)現(xiàn)一朵灰色的云遮住了月亮!天,瞬時(shí)黯淡下來(lái)。一只蟲(chóng)子驚飛著逃開(kāi),遠(yuǎn)處還有隱約的蛙聲。風(fēng),徐徐吹來(lái),我打了個(gè)冷戰(zhàn)。我的臉上有汗水有淚水也有霧珠,我坐起身,狠勁地擦著自己的臉,而眼淚更加洶涌地落下。陸凡穿好衣服,拉我起來(lái),再次把我摟在懷里。而我抑制不住地哭出了聲,我說(shuō):我對(duì)不起小雪!我混蛋,我不是人!陸凡就嘆氣。然后他又勸我:你想開(kāi)點(diǎn)可好?你干嘛這樣折磨自己?可我怎么能夠想開(kāi)?小雪一直對(duì)我很好,對(duì)我的任何決定她都理解和支持,在我困難的時(shí)候,她會(huì)第一個(gè)給我?guī)椭沂峭低档匕彦X(qián)塞進(jìn)我的包里。每次來(lái)這個(gè)城市,她的家就是我的旅館,或者就是我的家。她為我買(mǎi)我愛(ài)吃的菜,她知道我喜歡喝酒,她自己不喝,也會(huì)買(mǎi)了酒讓我喝,要是陸凡在家,她就讓陸凡陪我一起喝。她比親姐妹還親。可我竟然做出如此齷齪的事情,我怎么對(duì)得起她?以后我如何面對(duì)她?我邊哭邊說(shuō)。陸凡說(shuō):好了,別想太多,你無(wú)心傷害誰(shuí)。以后,你還正常去我們家,就當(dāng)什么也沒(méi)有發(fā)生過(guò)。
可是你和小雪都準(zhǔn)備離婚了,我以后來(lái)了又去哪里住?從內(nèi)心里,我不希望他們離婚,這樣我或許還有補(bǔ)償小雪的機(jī)會(huì)。其實(shí),他們并沒(méi)有多么深的矛盾,小雪就算去見(jiàn)了舊情人,也只會(huì)是單純的見(jiàn)面傾訴,她不會(huì)做任何對(duì)不起陸凡的事情,這點(diǎn)我敢確定。
沒(méi)有想到的是,陸凡竟然說(shuō)了一句讓我意外的話(huà):我答應(yīng)你不和小雪離婚了。我會(huì)繼續(xù)寵她!不計(jì)較她見(jiàn)不見(jiàn)舊情人。我停止了哭訴,和他拉勾,讓他保證自己說(shuō)話(huà)算話(huà),而我也答應(yīng)以后會(huì)去他們家,就當(dāng)今天是一場(chǎng)夢(mèng)。
拍拍身上的泥土,我們離開(kāi)了這片油菜田,沿著原路返回。我?guī)е?fù)疚的心情離開(kāi)。自此和小雪以及陸凡幾乎斷了聯(lián)系。
深秋的一天,我意外接到小雪的電話(huà)。她在電話(huà)里邀請(qǐng)我去參加她的婚禮,并且安排我當(dāng)她伴娘。原來(lái)她和舊情人嚴(yán)青將在十一舉行婚禮。這是我始料不及的。我責(zé)怪陸凡說(shuō)話(huà)不算話(huà),說(shuō)過(guò)不離婚的,現(xiàn)在不但離了,而且小雪又要再婚了。陸凡語(yǔ)氣平淡地說(shuō):是她堅(jiān)決要離的,這次主動(dòng)權(quán)不在我。他也去參加婚禮。這讓我心里很忐忑。
婚禮結(jié)束后,小雪拉著我的手說(shuō):小安,你和我是無(wú)話(huà)不說(shuō)的朋友,但陸凡對(duì)我更是無(wú)話(huà)不說(shuō),所以你們的事情我早已知道。我曾經(jīng)說(shuō)過(guò),老公不能分享,可現(xiàn)在我改變了主意,我認(rèn)為緣分不能勉強(qiáng)。我一直感覺(jué)你們才是最適合的。我流著淚說(shuō):小雪,對(duì)不起!我……她笑盈盈地說(shuō):沒(méi)有誰(shuí)對(duì)不起誰(shuí),真的。就算你和陸凡沒(méi)有什么,我也會(huì)和他離婚,這個(gè)和你無(wú)關(guān)。我只是想回到嚴(yán)青身邊,我內(nèi)心一直是愛(ài)他的。這些年我對(duì)陸凡僅僅是盡著一個(gè)妻子的義務(wù)而已,這對(duì)他也不公平。
這時(shí)候陸凡走過(guò)來(lái)問(wèn):你們聊什么呢?
小雪說(shuō):陸凡,我把小安交給你了啊,我不管了。
陸凡打趣說(shuō):你當(dāng)然不管了,你現(xiàn)在巴不得把我們都甩了!
小雪故作很萌地問(wèn):你講的話(huà)神馬意思?
陸凡拉起我手說(shuō):走,我?guī)闳タ礋熁?。今晚DJ廣場(chǎng)有大型煙火晚會(huì)。
風(fēng)中已經(jīng)彌漫著節(jié)日濃濃的氣息。我們輕盈地奔跑起來(lái),閃爍變幻的煙火映照著我們已經(jīng)不太年輕的面龐,但我們的內(nèi)心卻洋溢著如初的愛(ài)情夢(mèng)想。
責(zé)編/彭藝珂
徐崢在這部電影里演起了帥男人的樣子,劉義偉成了給予別人愛(ài)情機(jī)遇的天使,他有很多手機(jī),有一部手機(jī)只要按上面的一個(gè)鍵就會(huì)有一次艷遇,一共十次,這對(duì)于愛(ài)情疲勞的徐崢來(lái)說(shuō),無(wú)疑具有強(qiáng)大的吸引力,盡管他不想去接受,但還是嘗試了。當(dāng)他與妻子離婚后,在這個(gè)神奇的手機(jī)幫助下,他獲得了十次與不同類(lèi)型女子艷遇的經(jīng)歷,后來(lái)呢,我從一開(kāi)始就猜測(cè)到他是不會(huì)成功的,結(jié)果如此,那些女子盡管性格各異,盡管各有魅力,但對(duì)于徐崢來(lái)說(shuō)卻沒(méi)有一次能夠真正成功,能夠真正成為他的另一半,當(dāng)他想回到原來(lái)的那位天天喜歡做炸醬面吃、在家時(shí)常穿紫色衣服的妻子身邊時(shí),卻已發(fā)現(xiàn)人家早已獲得了快樂(lè)的家庭。還是在影片最后,富于戲劇性地出現(xiàn)了他以前的一個(gè)同學(xué),那個(gè)同樣為愛(ài)情苦惱,尋覓多次后將那部神奇手機(jī)拋置一邊的雙博士,兩人倒真是情投意合了,他們的合也是互相經(jīng)歷挫折后的理解。
還是影片中的一句話(huà)說(shuō)的好:“世界上本來(lái)就沒(méi)有哪一個(gè)人是為你準(zhǔn)備好的”,合適不合適,也不可能是隨意的,也不可能是不知足的,抱怨生活的捉弄、自己的過(guò)失,都不是正確的方法,生活中很多人都在幻想如果從頭來(lái)過(guò)的故事,女人們說(shuō)如果從頭來(lái)過(guò)、如果能跟另一個(gè)人過(guò),生活肯定不會(huì)是這樣單調(diào)無(wú)味或是貧窮,繼而想像出另一種幸福圖景,男人們也在后悔跟這樣的女人生活,為什么自己就沒(méi)發(fā)現(xiàn)她的缺點(diǎn)呢?當(dāng)人們都厭棄了現(xiàn)在的婚姻,都煩膩了現(xiàn)在的生活,便生出很多的想法,有如果回到從前的念頭,有假如不這樣結(jié)合的猜測(cè),有要是那樣過(guò)的話(huà),甚至有未來(lái)如何變的沖動(dòng)。
人與人的結(jié)合是一種緣,愛(ài)情婚姻是一種神奇的力量,它讓人迷失自己,卻又永遠(yuǎn)不可能找到一個(gè)真正合適的,總是留有或多或少的遺憾。人與人的磨合只能是在后來(lái)的生活中互相理解和幫助,共同渡過(guò)歲月,無(wú)論貧窮富貴,無(wú)論歡樂(lè)憂(yōu)愁,無(wú)論疾病健康,迎上去,走過(guò)去。那些不滿(mǎn)于現(xiàn)實(shí)的人或許是懷抱一種更高的理想,或許是生活?lèi)芤?、溫飽思欲的沖動(dòng),社會(huì)的變革也讓一些人的觀(guān)念發(fā)生著越來(lái)越大的變化,世俗的新看法、時(shí)代的新概念,也是對(duì)愛(ài)情的沖擊。
人是容易疲勞的,愛(ài)情同樣如此。新鮮感、快樂(lè)感、幸福感,在日?,嵭嫉氖朗麓蚰ブ凶兊明龅瓱o(wú)光,一樣的面龐、一樣的聲音、一樣的動(dòng)作,也讓感覺(jué)麻木遲鈍起來(lái)。現(xiàn)代生活的感情危機(jī)越來(lái)越重,大城市的離婚率逐年上升,單身者也越來(lái)越多,人們的婚姻觀(guān)念也越來(lái)越“先進(jìn)”,工作忙、生活節(jié)奏快是一個(gè)原因,感情疲勞也是一個(gè)原因,追逐享受又是一個(gè)原因,令人不能再燃起歲月的激情。
每一個(gè)易拉罐只能有一個(gè)拉環(huán),他們總是親密無(wú)間
拉環(huán)一直喜歡易拉罐,但是,易拉罐的心里只有可樂(lè)
對(duì)于拉環(huán),她無(wú)法拒絕,可是又不能接受,只因?yàn)椋男睦镆呀?jīng)有了可樂(lè)
拉環(huán)無(wú)語(yǔ),只是,他真的放不下易拉罐
所以,他決定默默的用自己的一生守護(hù)著易拉罐和可樂(lè)的愛(ài)情
就這樣,日復(fù)一日,平靜的生活繼續(xù)
終于有一天,拉環(huán)被拉開(kāi),離開(kāi)的拉環(huán)的易拉罐再也不能維系她和可樂(lè)的愛(ài)
空空的易拉罐被無(wú)情的踩扁,被拋棄
失去了可樂(lè)的她再也沒(méi)有了往日的圓潤(rùn)和美麗
她掙扎,她無(wú)助,她感嘆生命的不公
只是,她可曾聽(tīng)到,拉環(huán)被開(kāi)啟那一瞬,他心底無(wú)聲的哭泣
在離去的時(shí)候,拉環(huán)在心里默默的許了一個(gè)愿望
就是當(dāng)可樂(lè)被喝光之后,可以把他扔進(jìn)易拉罐里
所在位置:分手幾個(gè)月
斷線(xiàn)原因:相隔兩地
在參加快男之前,蘇醒曾經(jīng)有過(guò)一段飄散在風(fēng)中的感情經(jīng)歷。兩人在經(jīng)歷了甜蜜之后,愛(ài)情卻因?yàn)榫嚯x歸于平淡,他們于幾個(gè)月前分手,在和平狀態(tài)下做回好朋友。很多人猜測(cè)這段情的無(wú)疾而終是否和參加快樂(lè)男聲比賽有關(guān),蘇醒卻表示無(wú)論參加快男還是出名,都不會(huì)影響他對(duì)愛(ài)情的態(tài)度,更何況分手也是在比賽前幾個(gè)月的事了,和比賽完全沒(méi)有關(guān)系。
來(lái)電密碼:漂亮、有內(nèi)涵的完美女孩
明知會(huì)讓許多“醒目”心碎,但當(dāng)面對(duì)“你喜歡什么樣的女孩子”這樣的問(wèn)題時(shí),蘇醒仍然毫不猶豫地選擇了――漂亮女孩。要當(dāng)蘇醒的女朋友首要條件就是“漂亮”!當(dāng)然在擁有外表的同時(shí),內(nèi)涵也是不可缺少的!蘇醒坦白說(shuō),以前在國(guó)外的時(shí)候遇到過(guò)心動(dòng)的女孩子,但后來(lái)不了了之,希望以后還能碰到。
吉杰
所在位置:分手一年
斷線(xiàn)原因:不適合
吉杰之前談過(guò)三段刻骨銘心的感情,曾有傳聞?wù)f他將最后的感情留在了北京,但吉杰卻說(shuō)最后一個(gè)女朋友是在上海交往的。為什么答案有出入?原來(lái),吉杰與北京的女孩分手后來(lái)到了上海,一度為情所傷的他認(rèn)識(shí)了另外一個(gè)女孩,后者才是他目前為止的最后一個(gè)女朋友,雖然兩個(gè)人在一起時(shí)間也并不長(zhǎng)。
來(lái)電密碼:漂亮、聰明,最好還性感
三段感情,每一段都認(rèn)真投入,卻又都如風(fēng)般飄逝,這卻并沒(méi)有讓吉杰失去尋找愛(ài)情的信心。35歲,是吉杰心目中可以談婚論嫁的年齡,因此他希望從35歲開(kāi)始談一場(chǎng)好的戀愛(ài)。這段感情必須是最浪漫,最穩(wěn)定,有建設(shè)性的。網(wǎng)上一度流傳吉杰是gay,言辭鑿鑿,讓人半信半疑,但是吉杰已經(jīng)鄭重聲明,他是百分百正常的男人。
陳楚生
所在位置:女友?不說(shuō)
斷線(xiàn)原因:緣分不到
陳楚生的緋聞大概是“快男”里最精彩的一個(gè),有人說(shuō)陳楚生的前女友是孫儷,也有人說(shuō)陳楚生為參加快男拋妻棄子當(dāng)了不折不扣的“陳世美”……對(duì)于外界的種種猜測(cè),陳楚生并不解釋?zhuān)@得神秘莫測(cè)。陳楚生曾經(jīng)創(chuàng)作過(guò)一首名為《她們》的歌,許多粉絲都猜測(cè)這是他為一個(gè)女孩所作。其實(shí),陳楚生確實(shí)為一個(gè)女孩寫(xiě)過(guò)一首歌,那是一個(gè)很漂亮很賢惠的女生,可惜緣分有的時(shí)候真的說(shuō)不清楚,他們最后還是沒(méi)有走到一起。
來(lái)電密碼:小鳥(niǎo)依人、孝順父母
很多陳楚生的粉絲,希望陳楚生的女朋友能像他歌詞所唱的那樣:“只要我輕輕呼喚你,你就不顧一切來(lái)到我身邊,我的姑娘!”不過(guò),像陳楚生這樣酷酷的男人,身邊只能待個(gè)“小鳥(niǎo)依人”的女人,因?yàn)樗呀?jīng)透露了以后挑選女友的標(biāo)準(zhǔn),“最重要是善解人意,懂得孝敬父母。”
王櫟鑫
所在位置:分手不久
斷線(xiàn)原因:參加快男
只有18歲的王櫟鑫,其戀情也是正宗的校園純情故事,羞澀的他甚至一直不肯用“女朋友”三個(gè)字來(lái)定義曾經(jīng)身邊的女孩,只是說(shuō),有一個(gè)女孩,和她在一起的感覺(jué)比較快樂(lè),兩個(gè)人挺玩得來(lái)。但是,那似乎比愛(ài)情還少了一點(diǎn)熱度。參加快男后,這份感情就與王櫟鑫漸行漸遠(yuǎn)了。
來(lái)電密碼:因密碼太長(zhǎng),忽略
性格文靜或者和他本人一樣活潑一點(diǎn),有大大的眼睛,小小的嘴巴,身高160公分。雖然對(duì)以前的戀情還不好意思承認(rèn),但說(shuō)起理想中的女朋友,王櫟鑫給出的條件還是非常具體滴。看來(lái),情竇初開(kāi)的他正以興奮的心情期待著一份無(wú)比甜蜜的愛(ài)情。
魏晨
所在位置:江湖有他的傳言
“快男”中,魏晨是內(nèi)向的代表,不少粉絲也正因?yàn)樗酀t腆的笑容而被他迷倒,可是在緋聞方面,“師生戀”、“斷臂戀”卻無(wú)一例外地找上這個(gè)清純小男生。其實(shí),人家魏晨早已公開(kāi)承認(rèn)過(guò)自己的戀情,那是在上高中時(shí)的一段純純初戀?,F(xiàn)在,初戀的故事已經(jīng)成為過(guò)去,但是魏晨特別憧憬將來(lái)能有個(gè)幸福溫馨的家庭,他認(rèn)為最溫馨的事就是,能和心愛(ài)的她一起去看電影,在黑暗中互相拉著手?;氐郊依?,能為心愛(ài)的她親手做晚飯。乖巧羞澀的男孩魏晨,很有新好老公的潛質(zhì)哦!
來(lái)電密碼:沒(méi)有心機(jī),不拒絕姐弟戀
魏晨喜歡的女生是溫柔、大方型的,一顆善良感恩的心也很重要,最反感的是有心計(jì)的女孩。“樂(lè)橙”中不乏大量姐姐級(jí)歌迷,而魏晨對(duì)“姐弟戀”的看法也一定能讓她們“龍心大悅”,“年齡并不是問(wèn)題,可以照顧我,只要感覺(jué)對(duì)了就好?!?/p>
張杰
所在位置:正在戀愛(ài)中
古靈精怪的娜娜和可愛(ài)的弟弟張杰,這段戀情雖然不久前才曝光,但其實(shí)早已有了充分的根據(jù)。娜娜和張杰都是川師大的校友,兩人都是四川老鄉(xiāng),所謂他鄉(xiāng)遇故知,也是人之常情。在“舞林大會(huì)”期間張杰對(duì)娜娜照顧有加,“暗戀桃花源”二人更是形影不離,陪伴左右。當(dāng)看到平時(shí)鬼馬調(diào)皮的謝娜在張杰面前流露戀愛(ài)中女人的羞澀與柔情時(shí),已經(jīng)可以肯定他們之間的情感遠(yuǎn)遠(yuǎn)越過(guò)朋友。但是,干嘛不祝福呢?畢竟,選秀場(chǎng)上能生發(fā)出如此美麗的戀情,還是很不容易的。
關(guān)鍵詞:親情干預(yù);年輕人;乳腺腫瘤;情緒;預(yù)后乳腺癌是婦女最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,嚴(yán)重影響其身心健康。隨著生活水平的提高和生活方式的改變,乳腺癌的發(fā)病率逐年增加,發(fā)病年齡也不斷提前[1]。研究指出,乳腺癌病例數(shù)每年以3%~6%的速度遞增,發(fā)病年齡比西方國(guó)家平均提前 10~15年[2]。我國(guó)發(fā)病年齡<45歲的乳腺癌占乳腺癌總?cè)藬?shù)的27.3%,遠(yuǎn)高于美國(guó)的年輕乳腺癌患者比例[3]。由于乳腺癌的主要治療方法是手術(shù)切除,給患者帶來(lái)極大的負(fù)性心理情緒,如緊張、焦慮、悲觀(guān)抑郁等。這些負(fù)性情緒會(huì)影響手術(shù)效果和患者的身心康復(fù)[4]。本研究通過(guò)對(duì)個(gè)案患者施行充分的親情干預(yù),使其得到比其他患者更多的關(guān)注和關(guān)心,通過(guò)觀(guān)察該患者親情干預(yù)后焦慮情況、對(duì)疾病認(rèn)識(shí)以及幾個(gè)客觀(guān)指標(biāo)的變化情況,闡述親情干預(yù)對(duì)年輕乳腺癌患者情緒和預(yù)后的影響。
1資料與方法
1.1一般資料 患者女,33歲。2009年12月無(wú)意間發(fā)現(xiàn)左乳腫塊,此后逐漸增大并出現(xiàn)疼痛及內(nèi)陷。2010年2月8日行彩超檢查,顯示腫物位于左側(cè)乳腺外側(cè)象限,實(shí)際占位4.0 cm×3.2cm,左側(cè)腋下可見(jiàn)低回聲腫大淋巴結(jié),1.4cm×1.0cm。2月9日行左側(cè)腋窩淋巴結(jié)穿刺,細(xì)胞學(xué)示(左側(cè)淋巴結(jié))可見(jiàn)癌細(xì)胞。2月11日行雙乳增強(qiáng)MR示:左乳腫物,符合乳腺癌,BI-RADS6級(jí),多中心型。2月12日在北京腫瘤醫(yī)院行4周期 CBP+PTX(卡鉑+紫杉醇)方案術(shù)前新輔助化療。2010年5月14日于該院乳腺外科接受左側(cè)保留皮膚根治性乳腺全切除+左側(cè)腋窩淋巴結(jié)清掃+左側(cè)擴(kuò)張器植入術(shù)。5月21日起行4周期CEF方案后輔助化療,此后于2010年10月25日~11月26日行放療。結(jié)束放療后繼續(xù)他莫昔芬片10mg、2次/d口服內(nèi)分泌治療。
1.2親情干預(yù)方案參照CNP[5]制定親情干預(yù)方案,從術(shù)前、術(shù)中和術(shù)后各個(gè)環(huán)節(jié)落實(shí)親情式醫(yī)療。本著“以患者為中心”的理念,強(qiáng)調(diào)“我能為患者做什么”、“如何使患者放松”的思想內(nèi)涵,與患者交流、給患者提供優(yōu)質(zhì)醫(yī)療服務(wù)。允許和鼓勵(lì)患者家屬全程陪護(hù),給予患者更多的親情關(guān)懷和溫暖。患者及其家屬通過(guò)病房電視屏幕播放的乳腺癌的知識(shí)了解和乳腺癌得病的可能原因,以及治療和預(yù)后情況,對(duì)疾病的了解是戰(zhàn)勝疾病的重要武器。在患者手術(shù)過(guò)程中,患者家屬也穿上手術(shù)衣,全程陪護(hù)。手術(shù)住院期間,患者家屬每天下午均陪伴在病床旁。放化療時(shí),患者丈夫每次都抽時(shí)間陪同。
2結(jié)果
見(jiàn)表1。
3討論
隨著乳腺癌的發(fā)病年齡提前,越來(lái)越多的年輕女性罹患乳腺癌,這對(duì)家庭來(lái)說(shuō)是一個(gè)沉重的打擊。由于乳腺癌本身會(huì)給患者帶來(lái)不適和疼痛,疾病本身會(huì)引起患者焦慮和抑郁的負(fù)性心理情緒。加之,當(dāng)前乳腺癌治療的主要方法是手術(shù)和術(shù)后的放化療,對(duì)女性的生理和心理都是極大的挑戰(zhàn)。絕大多數(shù)年輕乳腺癌患者在得知罹患乳腺癌和手術(shù)治療是首選治療方法后都會(huì)出現(xiàn)哭泣、無(wú)助的表現(xiàn),這些負(fù)性情緒可能會(huì)對(duì)患者預(yù)后有負(fù)面的影響。通過(guò)對(duì)比該患者與其他未實(shí)行親情干預(yù)或親情干預(yù)實(shí)施不充分的患者相比,發(fā)現(xiàn)該患者充滿(mǎn)了自信和生活的信心,焦慮得分比其他同期住院的年輕乳癌患者低,多項(xiàng)可測(cè)量的客觀(guān)指標(biāo),如睡眠時(shí)間長(zhǎng)、血壓和心率低等也優(yōu)于其他同期住院的年輕乳癌患者。
總之,親情干預(yù)充分考慮了年輕的乳腺癌患者易焦慮、抑郁的負(fù)性情緒,在此基礎(chǔ)上通過(guò)增加醫(yī)生、護(hù)士、麻醉師,尤其是患者家屬對(duì)患者的鼓勵(lì)和關(guān)心,耐心解答患者的所有問(wèn)題,使患者無(wú)時(shí)無(wú)刻不感受到溫暖。這些積極的正能量一定程度上利于患者自身免疫力的調(diào)動(dòng),對(duì)于控制腫瘤的自身發(fā)展和惡化、提高化療效果有重要意義。
參考文獻(xiàn):
[1]范金虎,王建炳,姜勇,等.北京市社區(qū)婦女干預(yù)前后乳腺癌認(rèn)知情況調(diào)查及評(píng)價(jià)[J].中國(guó)健康教育,2011,27(2):114-116.
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[3]王寧,王斌,王雅杰.乳腺癌患者發(fā)病年齡和臨床病理學(xué)參數(shù)的相關(guān)性研究[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2011,16(2):134-138.
【關(guān)鍵詞】師愛(ài) 信任 平等 心靈 快樂(lè)成長(zhǎng)
【中圖分類(lèi)號(hào)】G635 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-3089(2013)11-0195-01
人的生活中充滿(mǎn)了愛(ài):慈愛(ài)、恩愛(ài)、友愛(ài)、喜愛(ài)、戀愛(ài)等等,但任何一種愛(ài)都不能和教師的愛(ài)相比擬。師愛(ài)生是人類(lèi)復(fù)雜情感中最高尚的情感,人們把它喻為“點(diǎn)燃照亮人們心靈的火焰”,開(kāi)啟心扉的鑰匙,開(kāi)發(fā)學(xué)生心智的能源。愛(ài)學(xué)生,這是教師教育學(xué)生的起點(diǎn)和基礎(chǔ),愛(ài)學(xué)生也是所有忠誠(chéng)人民教育事業(yè)的教師的共同情感,愛(ài)學(xué)生是熱愛(ài)教育事業(yè)的具體表現(xiàn),是做教師的天職。
德國(guó)教育家第斯多惠說(shuō):“教育的藝術(shù) 在于傳授的本領(lǐng),而在于鼓勵(lì)、喚醒、鼓舞?!奔唇逃歉腥?、潛移默化,是心與心之間的滲透,我認(rèn)為,這就是班主任的工作藝術(shù)。在課程改革的今天,我們面對(duì)的是一群活潑可愛(ài)、富有朝氣且有個(gè)性的活生生的人,這就對(duì)班主任的工作提出了更高的要求,做好班主任工作,單憑說(shuō)服教育是不夠的,還要進(jìn)一步研究出一些切實(shí)可行且行之有效的新辦法、新路子。
教師的工作對(duì)象是學(xué)生,學(xué)生是學(xué)校里的“上帝”,沒(méi)有學(xué)生就沒(méi)有教師施展才華的沃土,把學(xué)生比作上帝,并不意味著寵學(xué)生、慣學(xué)生,讓學(xué)生放任自流,或者說(shuō)老師不敢管學(xué)生,而是要與學(xué)生建立融洽、平等的師生關(guān)系。俗話(huà)說(shuō):“一個(gè)好漢三個(gè)幫”,若要取得學(xué)生的信任和在工作上的支持,你必須與學(xué)生建立和諧平等的師生關(guān)系。捷爾斯基說(shuō)過(guò)這么一句話(huà):“誰(shuí)愛(ài)孩子,孩子就愛(ài)他,只有愛(ài)孩子的人才可以教育孩子”。所以在工作中,我總是真心實(shí)意地去愛(ài)護(hù)他們。
一、老師,請(qǐng)給學(xué)生多一點(diǎn)愛(ài)。
古人云:“感人心者,莫先乎情。”教師只有像對(duì)待自己的孩子、朋友那樣,懷有真誠(chéng)、理解、尊重、信任和愛(ài)護(hù)學(xué)生,才能使學(xué)生親近、信任教師和盤(pán)托出心底的秘密,心悅誠(chéng)服地接受教師的批評(píng)和指點(diǎn)。
對(duì)那些惰性心理、依賴(lài)心理較強(qiáng)的學(xué)生,他們的行為往往未得到別人的肯定,犯錯(cuò)誤后又易受老師的訓(xùn)斥。長(zhǎng)此以往,他們總覺(jué)得不被理解而產(chǎn)生一種惰性和逆反心理,有時(shí)甚至與老師對(duì)抗。碰到這樣的學(xué)生,老師在教育批評(píng)時(shí)應(yīng)加強(qiáng)情感投入,并在平時(shí)對(duì)他們的學(xué)習(xí)、生活多關(guān)心,做好心靈疏通,曉之以理,動(dòng)之以情,滿(mǎn)含期待的批評(píng),往往會(huì)收到奇效。
我班學(xué)生張宇般,經(jīng)常不寫(xiě)作業(yè),上課在座位上說(shuō)話(huà),搞小動(dòng)作,下課常欺侮人,上課做操故意搗亂,對(duì)老師的批評(píng)一副不以為然的樣子,還常與老師“講理”,在班上造成不良影響。這樣的學(xué)生如果靠訓(xùn)斥只能越訓(xùn)越皮,越訓(xùn)越?jīng)]有自尊心。為了轉(zhuǎn)化他,我首先從溝通師生情感入手,他犯錯(cuò)誤時(shí),我總是心平氣和地單獨(dú)與他談話(huà),幫他分析危害。他看到我對(duì)他不討厭,不嫌棄。而是對(duì)他很平等,很真誠(chéng),就對(duì)老師慢慢親近了,我用情感的韁繩套住了這匹不馴服的“小馬”。在日常生活中,我慢慢誘導(dǎo)他走上道德規(guī)范的正軌,在學(xué)習(xí)生活多方面關(guān)心他,把他推選為本班的紀(jì)律委員,給他為集體做事的機(jī)會(huì),使他把老師的關(guān)心變?yōu)樽约旱牡赖虑楦小,F(xiàn)在,這匹“小馬”懂事多了,做事能顧及到別人的感受,做到心中有他人了,在行為上能用《小學(xué)生守則》來(lái)約束自己。所以,班主任要搞好班級(jí)工作,就要愛(ài)自己的學(xué)生,把自己所帶的班當(dāng)作自己的家,學(xué)生當(dāng)作自己的孩子,讓他們感到集體的溫暖,老師對(duì)他們的愛(ài),學(xué)生會(huì)信任老師,這樣才能互相理解,互相進(jìn)行心靈的溝通,從而喚起師生感情的共鳴,產(chǎn)生心理相融的效應(yīng),讓學(xué)生覺(jué)得老師理解他們、愛(ài)他們了,他們才能勇敢面對(duì)困難,勇往直前,班主任才能順利搞好班級(jí)工作。
二、老師,請(qǐng)給學(xué)生一個(gè)平等的機(jī)會(huì)。
前些天,看到這樣一則故事:一個(gè)犯人外出修路時(shí)拾到1000元錢(qián),馬上交給警察,警察卻說(shuō):“你別來(lái)這一套,想賄賂我換取減刑的資本嗎?”囚犯萬(wàn)念俱滅,當(dāng)晚就越獄了,在逃亡的路上,他正好站在廁所旁,這時(shí),一個(gè)漂亮姑娘要上廁所,發(fā)現(xiàn)門(mén)扣壞了,她輕聲對(duì)這個(gè)逃犯說(shuō):“先生,你能為我把門(mén)嗎?”逃犯一愣,看著姑娘純潔無(wú)暇的眼神,他點(diǎn)點(diǎn)頭。姑娘紅著臉進(jìn)了廁所,他像忠誠(chéng)的衛(wèi)士一樣守著門(mén),一剎那間,他突然改變了主意,下一站,他下車(chē)來(lái)到站點(diǎn)派出所,投案自首了。
有人說(shuō)這是信任的力量,警察對(duì)犯人的不信任,使得犯人自暴自棄,越獄逃跑,那位姑娘對(duì)犯人的信任,卻讓也頓然醒悟,決心認(rèn)罪。其實(shí),最大的區(qū)別在于:警察知道囚犯的歷史,而姑娘不知,如果姑娘知道為她把門(mén)的是一位囚犯,很難說(shuō)故事還會(huì)有這么美麗的結(jié)局。
我由此想到了教育中的一種情形。每到開(kāi)學(xué),接手的新班的老師總習(xí)慣去了解學(xué)生的過(guò)去,犯過(guò)什么錯(cuò)誤沒(méi)有?有什么壞毛?。繉?duì)于學(xué)生的錯(cuò)誤,一些老師可能在頭腦 “回收站”里留下“案底”以便哪天再度犯錯(cuò)時(shí)拿來(lái)作“參考”,知道了學(xué)生的過(guò)去,往往就會(huì)用“有色眼睛去看人,原諒一個(gè)人的過(guò)錯(cuò)不難,忘記一個(gè)人的過(guò)錯(cuò)卻很難”。
我認(rèn)為,接手新班的老師對(duì)學(xué)生要一視同仁,給予同樣的關(guān)懷、信任和理解。老師不知學(xué)生的過(guò)去,用一樣的眼光看學(xué)生,給予學(xué)生積極的關(guān)注和良好的期待,可以使那些有過(guò)失的學(xué)生重新樹(shù)立自信。
我班學(xué)生韓振生通過(guò)初步接觸,我發(fā)現(xiàn)該生能說(shuō)會(huì)道組織能力很強(qiáng),很有魄力,可學(xué)習(xí)成績(jī)卻一般,我一直沒(méi)有去了解他的過(guò)去,而是經(jīng)常表?yè)P(yáng)他的一些優(yōu)點(diǎn)。前一段時(shí)間,他被大家選為小隊(duì)長(zhǎng),在當(dāng)天的作業(yè)中他夾了一個(gè)紙條寫(xiě)道:“老師,你難道不知道,我以前經(jīng)常不做作業(yè)嗎?李老師不喜歡我,謝謝您給我的信任和鼓勵(lì)!”這幾天,他還幫我訓(xùn)練集體舞,并指出誰(shuí)不守紀(jì)律,誰(shuí)動(dòng)作不到位”。
的確,我不想去了解學(xué)生的過(guò)去,只想以欣賞的目光去尋找他們的閃光點(diǎn),“你的過(guò)去,我一概不知,我只看你現(xiàn)在的表現(xiàn)?!蔽覍?duì)每一位同學(xué)說(shuō):“我想給學(xué)生一個(gè)平等的機(jī)會(huì),也給自己一個(gè)寧?kù)o的心境。”
【關(guān)鍵詞】青年結(jié)直腸癌;微轉(zhuǎn)移;淋巴結(jié);聚合酶鏈反應(yīng)
【中圖分類(lèi)號(hào)】R56 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1004-7484(2013)03-0189-02
結(jié)直腸癌是世界上胃腸道惡性腫瘤的重要死因,在美國(guó)位居第一位【1】。,隨著人們生活方式和飲食習(xí)慣的改變,在我國(guó)近20年來(lái)尤其在大城發(fā)病率明顯上升,且有明顯的年輕化趨勢(shì);臨床工作發(fā)現(xiàn),青年結(jié)直腸癌患者,發(fā)現(xiàn)晚、惡性程度高、預(yù)后差,對(duì)家庭、社會(huì)危害影響更大。因此對(duì)青年結(jié)直腸癌患者更應(yīng)特別關(guān)注。目前外科手術(shù)治療依舊結(jié)直腸癌患者首選方法,由于臨床ⅠⅡ期病例尚缺乏全身輔助化療對(duì)延長(zhǎng)生存期有力證據(jù),臨床上多數(shù)不進(jìn)行化療。然而臨床上有20%~30%的局限于腸壁、“無(wú)轉(zhuǎn)移”的早期病例,雖然施行標(biāo)準(zhǔn)根治術(shù),但術(shù)后易復(fù)發(fā),影響了術(shù)后5年生存率。究其原因,最可能解釋是微轉(zhuǎn)移(micrometastasis,MM)將臨床期Ⅲ的漏診,而未行化療。隨著對(duì)于結(jié)直腸癌診治的研究提高。逐漸認(rèn)識(shí)到淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的最重要因素之一,近幾年來(lái),不少學(xué)者通過(guò)研究結(jié)直腸癌淋巴結(jié)的微轉(zhuǎn)移來(lái)提高結(jié)直腸癌治療效果以期改善預(yù)后,提高5年生存率。細(xì)胞角蛋白(cytokeratin,CK)是細(xì)胞骨架系統(tǒng)中間絲組成成分之一。廣泛存在于上皮組織細(xì)胞中,而間葉組織中缺乏表達(dá),故成為上皮腫瘤細(xì)胞較為敏感和特異的指標(biāo),由于它在正常淋巴結(jié)中不表達(dá),因而最常用來(lái)檢測(cè)微轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物【2】。RT-PCR被認(rèn)為是檢測(cè)隱匿性癌轉(zhuǎn)移的高度敏感的方法,本文探討RT-PCR檢測(cè)CK19mRNA在診斷青年(40歲以下)結(jié)直腸癌患者區(qū)域淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的價(jià)值及其臨床應(yīng)用。
1 材料與方法
1.1 病歷選擇 收集2007年9月至2011年9g0OOS+i+S4tOW6iuinguWvn2QCCQ9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTIxFeW4g+mygeawj+iPjOeXhemYsuayuxXluIPpsoHmsI/oj4znl4XpmLLmsrtkAgoPZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzUyMjI1M+S+i+iEkeWHuuihgOeXheS6uuW5tuWPkeiCuumDqOaEn+afk+S4tOW6iuWIhuaekDI1M+S+i+iEkeWHuuihgOeXheS6uuW5tuWPkeiCuumDqOaEn+afk+S4tOW6iuWIhuaekGQCCw9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTIzS+iFueiFlOmVnOS4i+Wkp+W+hOe6v+WtkOWuq+iCjOWjgemXtOiCjOeYpOWJlOmZpOacr+eahOWPr+ihjOaAp+S4juWuieWFqOaAp0vohbnohZTplZzkuIvlpKflvoTnur/lrZDlrqvogozlo4Hpl7TogoznmKTliZTpmaTmnK/nmoTlj6/ooYzmgKfkuI7lronlhajmgKdkAgwPZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzUyNDPnu4/mo5rplYfppJDppa7lhbflpKfogqDoj4znvqTmsaHmn5PnirblhrXnmoTosIPmn6Uz57uP5qOa6ZWH6aSQ6aWu5YW35aSn6IKg6I+M576k5rGh5p+T54q25Ya155qE6LCD5p+lZAIND2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1MjUjTWFsbG9yeeKAlFdlaXNzMzDkvovliIbmnpDlj4rmsrvnlpcjTWFsbG9yeeKAlFdlaXNzMzDkvovliIbmnpDlj4rmsrvnlpdkAg4PZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzUyNkXmtYXosIjnpL7ljLrlrZXkuqflpofkv53lgaXmnI3liqHlu7rorr7kuI7pooTpmLLkuqflkI7lrZDnl6vnmoTlhbPns7tF5rWF6LCI56S+5Yy65a2V5Lqn5aaH5L+d5YGl5pyN5Yqh5bu66K6+5LiO6aKE6Ziy5Lqn5ZCO5a2Q55er55qE5YWz57O7ZAIPD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1Mjcu5be05bee5Yy6MjIwNuS+i+aJi+i2s+WPo+eXhea1geihjOeJueW+geWIhuaekC7lt7Tlt57ljLoyMjA25L6L5omL6Laz5Y+j55eF5rWB6KGM54m55b6B5YiG5p6QZAIQD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1Mjgq5LiN6KeE5YiZ5oqX5L2T562b5p+l5LiO6L6T6KGA5YWz57O75o6i6K6oKuS4jeinhOWImeaKl+S9k+etm+afpeS4jui+k+ihgOWFs+ezu+aOouiuqGQCEQ9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTI5LuiEkeail+atu+S6muaApeaAp+acn1QxV0npq5jkv6Hlj7fnl4Xlm6DliIbmnpAu6ISR5qKX5q275Lqa5oCl5oCn5pyfVDFXSemrmOS/oeWPt+eXheWboOWIhuaekGQCEg9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTMwT+WMlueWl+aCo+iAhVBJQ0Pnva7nrqHmnK/lkI7kvb/nlKjkuK3lpK7pnZnohInnva7nrqHmnK/mjaLoja/ljIXnmoTkuLTluormjqLorqhP5YyW55aX5oKj6ICFUElDQ+e9rueuoeacr+WQjuS9v+eUqOS4reWkrumdmeiEiee9rueuoeacr+aNouiNr+WMheeahOS4tOW6iuaOouiuqGQCEw9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTMxKueUt+aAp+WMu+eUn+WcqOWmh+S6p+enkemXqOiviuaJgOmBh+mXrumimCrnlLfmgKfljLvnlJ/lnKjlpofkuqfnp5Hpl6jor4rmiYDpgYfpl67pophkAhQPZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzUzMjnigJznlJjnsr7og7DlspvntKDigJ3msrvnlpfliJ3lj5Ey5Z6L57OW5bC/55eFNDDkvovop4Llr5854oCc55SY57K+6IOw5bKb57Sg4oCd5rK755aX5Yid5Y+RMuWei+ezluWwv+eXhTQw5L6L6KeC5a+fZAIVD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1MzM6MuWei+ezluWwv+eXheaCo+iAheacjeiNr+S+neS7juaAp+WvueihgOezluaOp+WItueahOW9seWTjToy5Z6L57OW5bC/55eF5oKj6ICF5pyN6I2v5L6d5LuO5oCn5a+56KGA57OW5o6n5Yi255qE5b2x5ZONZAIWD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1MzRJ6YeN57uE5Lq65bmy5omw57SgyZExYuWcqOWptOW5vOWEv+i9rueKtueXheavkuaAp+iCoOeCjuS4reeahOeWl+aViOinguWvn0nph43nu4TkurrlubLmibDntKDJkTFi5Zyo5am05bm85YS/6L2u54q255eF5q+S5oCn6IKg54KO5Lit55qE55aX5pWI6KeC5a+fZAIXD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1MzUw5Lqn56iL5Zu+5Zyo5Yid5Lqn5aaH5aS05L2N5YmW5a6r5Lqn5LiK55qE5YiG5p6QMOS6p+eoi+WbvuWcqOWIneS6p+Wmh+WktOS9jeWJluWuq+S6p+S4iueahOWIhuaekGQCGA9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTM2MOWuieWIqeaQj+ayu+eWl+WFheihgOaAp+W/g+WKm+ihsOerreeWl+aViOinguWvnzDlronliKnmkI/msrvnlpflhYXooYDmgKflv4PlipvoobDnq63nlpfmlYjop4Llr59kAhkPZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzUzNy3kuI3lkIzlv4Plip/og73mgqPogIVQQ0nmnK/lkI7lr7nmr5TliYLogr7nl4Ut5LiN5ZCM5b+D5Yqf6IO95oKj6ICFUENJ5pyv5ZCO5a+55q+U5YmC6IK+55eFZAIaD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1Mzg9MjAxMeW5tOaIkemZoumXqOiviuWkhOaWueaKl+iPjOiNr+eJqeS9v+eUqOaDheWGteiwg+afpeWIhuaekD0yMDEx5bm05oiR6Zmi6Zeo6K+K5aSE5pa55oqX6I+M6I2v54mp5L2/55So5oOF5Ya16LCD5p+l5YiG5p6QZAIbD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1MzlO5rOw5bCU6IyC5Yqo6ISJ6YeH6KGA6ZKI5LiO5Lyg57uf5rOo5bCE5Zmo5Zyo6IKh5Yqo6ISJ6YeH6KGA5Lit55qE5bqU55So5q+U6L6DTuazsOWwlOiMguWKqOiEiemHh+ihgOmSiOS4juS8oOe7n+azqOWwhOWZqOWcqOiCoeWKqOiEiemHh+ihgOS4reeahOW6lOeUqOavlOi+g2QCHA9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTQwSOWmiuWooOWQiOW5tuWtkOWuq+iCjOeYpOihjOWJluWuq+S6p+acr+S4reWJlOmZpOS4tOW6iuayu+eWl+aViOaenOinguWvn0jlporlqKDlkIjlubblrZDlrqvogoznmKTooYzliZblrqvkuqfmnK/kuK3liZTpmaTkuLTluormsrvnlpfmlYjmnpzop4Llr59kAh0PZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzU0MSgyMDEx5bm05ryz5bee5biC5rWB5oSf55uR5rWL57uT5p6c5YiG5p6QKDIwMTHlubTmvLPlt57luILmtYHmhJ/nm5HmtYvnu5PmnpzliIbmnpBkAh4PZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzU0MjPohILogqrogp3ov5DliqjooYzkuLrlj4rppa7po5/lubLpooTnmoTnlpfmlYjop4Llr58z6ISC6IKq6IKd6L+Q5Yqo6KGM5Li65Y+K6aWu6aOf5bmy6aKE55qE55aX5pWI6KeC5a+fZAIfD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1NDMn5bC66aqo5Yag54q256qB6aqo5oqY55qE6K+K5pat5Y+K5rK755aXJ+WwuumqqOWGoOeKtueqgemqqOaKmOeahOiviuaWreWPiuayu+eWl2QCIA9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTQ0KuWNleS+p+WKqOecvOelnue7j+m6u+eXueS4tOW6iuiviuayu+WIhuaekCrljZXkvqfliqjnnLznpZ7nu4/purvnl7nkuLTluoror4rmsrvliIbmnpBkAiEPZBYCZg8VBAANemdiczIwMTMwMzU0NTznu7TmjIHmgKfooYDmtrLpgI/mnpDmgqPogIXmipHpg4HnirbmgIHlj4rnm7jlhbPlm6DntKDliIbmnpA857u05oyB5oCn6KGA5ray6YCP5p6Q5oKj6ICF5oqR6YOB54q25oCB5Y+K55u45YWz5Zug57Sg5YiG5p6QZAIiD2QWAmYPFQQADXpnYnMyMDEzMDM1NDYz5ZG85ZC45YaF56eR5bqU55So5oqX6I+M6I2v54mp5bmy6aKE55qE55aX5pWI5YiG5p6QM+WRvOWQuOWGheenkeW6lOeUqOaKl+iPjOiNr+eJqeW5sumihOeahOeWl+aViOWIhuaekGQCIw9kFgJmDxUEAA16Z2JzMjAxMzAzNTQ3aeeUsuedvumFrueJh+iBlOWQiOS4ueiOquWmh+W6t+eFjuiGj+ayu+eWl+WtkOWuq+WGheiGnOW8guS9jeeXh+WSjOWtkOWuq+iFuuiCjOeXhTIyMOS+i+S4tOW6iuaViOaenOWIhuaekGnnlLLnnb7pha7niYfogZTlkIjkuLnojqrlpoflurfnhY7oho/msrvnlpflrZDlrqvlhoXohpzlvILkvY3nl4flkozlrZDlrqvohbrogoznl4UyMjDkvovkuLTluormlYjmnpzliI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淋巴結(jié)分類(lèi)Ⅰ期5例,Ⅱ期13例,Ⅲ期7例,Ⅳ期5例;共采集腫瘤標(biāo)本的30例;淋巴結(jié)108個(gè)。另取同期因良性疾病結(jié)直腸(結(jié)直腸息肉、憩室等)手術(shù)的20例患者的正常腸周淋巴結(jié)20枚作為對(duì)照組。每個(gè)新鮮淋巴結(jié)標(biāo)本平均分為兩塊(每次切開(kāi)淋巴結(jié)之前,用生理鹽水沖洗刀片,以免造成污染),一塊用福爾馬林固定,石蠟包埋后切片行常規(guī)病理檢查(HE染色),另一塊經(jīng)液氮速凍后-
80℃ 保存用于提取RNA。對(duì)于常規(guī)病理檢查無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的淋巴結(jié)標(biāo)本提取RNA。
1.2 引物設(shè)計(jì) 引物由上海生工公司合成。CK19引物的序列設(shè)計(jì)見(jiàn)表1
1.3 總RNA抽提及鑒定 30例結(jié)直腸癌組織,108枚淋巴結(jié)和20例正常組織分別加入提起試劑(Invitrogen)1ml,電動(dòng)勻漿1~2min,勻漿液室溫放置5min后加氯仿200?l,震蕩15s,12000r/min4℃離心15min;上層水相移人另一Eppendorf管中,加入異丙醇500?l混勻室溫放置10 min。4℃12000 r/min離心15 min,棄掉上清,加1ml75%乙醇洗滌RNA沉淀,7500 r/min, 4℃離心5min,棄掉上清。
1.4 依據(jù)RT―PCR試劑盒說(shuō)明書(shū) 在美國(guó)產(chǎn)MJ―Research擴(kuò)增儀上,將反應(yīng)體系混勻后進(jìn)行擴(kuò)增,逆轉(zhuǎn)錄體積為50?l。擴(kuò)增步驟如下:(1)42℃孵育30min;(2)95℃孵育3min;(3)95℃預(yù)變性10s;(4)55℃預(yù)變性30s;(5)72℃ 1min ;(6)重復(fù)3~5步驟4次;(7)95℃預(yù)變性5s;(8)60℃預(yù)變性30s;(9)讀?。唬?0)重復(fù)7~9步驟35次;(11);40℃預(yù)變性1s。用紫外分光光度儀定量觀(guān)察并照相記錄結(jié)果。
2 結(jié)果
患者常規(guī)病理組織學(xué)方法檢查確診為結(jié)直腸癌患者,RT-PCR法同時(shí)檢測(cè)30例結(jié)直腸癌患者大體標(biāo)本均有CK19mRNA表達(dá);108個(gè)淋巴結(jié)中有47個(gè)存在CK19mRNA陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性率 43.5%;常規(guī)病理檢查有25枚有癌轉(zhuǎn)移,陽(yáng)性率23.2 % RT-PCR方法和常規(guī)病理方法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;20例良性病變患者30枚淋巴結(jié)中CK19mRNA表達(dá)為陰性。CK19mRNA在結(jié)直腸癌組織及淋巴結(jié)中表達(dá)(圖-1)
3 討論
1980年由Sloane首先提出微轉(zhuǎn)移細(xì)胞概念以來(lái),大量的研究工作集中到各種上皮源性腫瘤患者的淋巴結(jié),骨髓和血液微轉(zhuǎn)移狀況對(duì)預(yù)后的影響,目前微轉(zhuǎn)移已逐漸被接受為一項(xiàng)有用的指標(biāo),用來(lái)確定癌癥患者的腫瘤分期。結(jié)直腸癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,在我國(guó)近20年來(lái)尤其在大城發(fā)病率明顯上升,且有年輕化趨勢(shì)。目前結(jié)直腸癌治療療效較過(guò)去已經(jīng)明顯提高,但轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處復(fù)發(fā)依舊是治療失敗的主要原因。探求高特異性的腫瘤轉(zhuǎn)移潛力和臨床預(yù)后的預(yù)測(cè)指標(biāo),并探討高敏感的檢測(cè)手段以指導(dǎo)臨床綜合治療已成為臨床腫瘤研究的特點(diǎn)。常規(guī)病理未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,術(shù)后復(fù)發(fā)率高達(dá)近一半【3】。最可能解釋是微轉(zhuǎn)移(micrometastasis,MM)將臨床期Ⅲ的漏診,而未行化療。微轉(zhuǎn)移是指在非血液系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)展過(guò)程中,播散并存活于淋巴系統(tǒng)、骨髓、肝等組織器官中的微小瘤灶,常無(wú)臨床表現(xiàn),而這正是造成腫瘤轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)重要原因之一,也是目前腫瘤防治中被關(guān)注熱點(diǎn)之一。目前研究認(rèn)為可能是淋巴系統(tǒng)、骨髓、肝等組織器官中的微小瘤灶導(dǎo)致結(jié)直腸癌臨床無(wú)法及時(shí)和正確治療。故淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響結(jié)直腸癌預(yù)后的最主要因素之一。傳統(tǒng)病理學(xué)檢查是通過(guò)對(duì)其具有代表性的一個(gè)切面經(jīng)HE染色作普通光鏡檢查得知的,但陽(yáng)性率較低,漏診率較高。文獻(xiàn)報(bào)道漏診率高達(dá)10~30%【4】因此,尋求高特異性、高敏感性的及時(shí)準(zhǔn)確判斷淋巴結(jié)有無(wú)早期轉(zhuǎn)移具有重要臨床意義。隨著分子生物技術(shù)發(fā)展,利用分子生物技術(shù)可以發(fā)現(xiàn)常規(guī)HE染色不能發(fā)現(xiàn)的單個(gè)癌細(xì)胞,由于這些微轉(zhuǎn)移可能發(fā)展為致命顯性,故微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)目前為人們重視并成為腫瘤研究熱點(diǎn)。
細(xì)胞角蛋白(cytokeratin CK)是上皮細(xì)胞骨架的組成成分,表達(dá)在正常的上皮及上皮源性腫瘤及其轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞,CK家族由分子量為40×.103~68×103U不等的20個(gè)成員組成,CK19常見(jiàn)的角蛋白之一,其表達(dá)范圍嚴(yán)格,它非常局限在胃腸上皮細(xì)胞,幾乎所有結(jié)直腸癌都明顯的表達(dá),CK19是上皮細(xì)胞細(xì)胞的標(biāo)志性基因,已有研究表CK19在結(jié)直腸癌細(xì)胞株的表達(dá)達(dá)100%;且在侵襲、轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散到其它組織器官始終保持穩(wěn)定。可作為結(jié)直腸在淋巴結(jié)、骨骼和外周血等間葉組織轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物。正常骨髓、血液、淋巴組織中不表達(dá),因其具有較高的敏感性和特異性而被應(yīng)用于腫瘤微轉(zhuǎn)移的檢測(cè),結(jié)直腸癌區(qū)域淋巴結(jié)陽(yáng)性表達(dá)表示存在轉(zhuǎn)移,通過(guò)檢測(cè)CK19的表達(dá)可監(jiān)測(cè)結(jié)直腸癌淋巴轉(zhuǎn)移。
許多文獻(xiàn)報(bào)道,通過(guò)免疫組織化學(xué),檢測(cè)某種上皮源性抗原,其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌檢出率比HE染色高,但這種方法多采用連續(xù)切片,既耗費(fèi)時(shí)間又不切實(shí)際,臨床病理常規(guī)檢查難以實(shí)現(xiàn),而且,免疫組織化學(xué)是對(duì)一個(gè)淋巴切面的檢測(cè)。RT-PCR技術(shù) 具有敏感性高、特異性強(qiáng),能夠萬(wàn)倍的擴(kuò)增特異性的DN段,具有簡(jiǎn)單快速的優(yōu)點(diǎn)??稍?06~107個(gè)正常細(xì)胞中檢測(cè)出1個(gè)癌細(xì)胞【5,6】。通過(guò)這種方法,我們可以了解整個(gè)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況。其檢測(cè)結(jié)果直觀(guān),易于判斷,避免常規(guī)病理學(xué)檢測(cè)時(shí)帶有的主觀(guān)性。結(jié)直腸癌是常見(jiàn)的來(lái)源于上皮組織的惡性腫瘤之一,本研究利用RT-PCR方法檢測(cè)結(jié)直腸癌區(qū)域淋CK19的表達(dá),應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)CK19mRNA,對(duì)30例結(jié)直腸癌患者的癌組織標(biāo)本和108個(gè)腸旁、系膜及系膜旁淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)良性疾病結(jié)直腸(結(jié)直腸息肉、憩室等)手術(shù)的20例患者的正常腸周淋巴結(jié)20枚作為對(duì)照組。結(jié)果表明30例結(jié)直腸癌患者均有CK19mRNA表達(dá), 108個(gè)淋巴結(jié)中有47個(gè)存在CK19mRNA陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性率 43.5%;常規(guī)病理檢查有25枚有癌轉(zhuǎn)移,陽(yáng)性率23.2 %;20例良性病變患者30枚淋巴結(jié)CK19mRNA表達(dá)為陰性。提示RT-PCR方法對(duì)檢測(cè)CK19mRNA具有很高特異性,應(yīng)盡可能在臨床上推廣應(yīng)用這一方法。本研究顯示K19 mRNA在癌組織、有轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中有表達(dá),而在非腫瘤的正常淋巴結(jié)不表達(dá),說(shuō)明K19mRNA特異性高,驗(yàn)證CK19可作為結(jié)直腸癌區(qū)域淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移特異性。表明該技術(shù)對(duì)結(jié)直腸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測(cè)具有高敏感性,因結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移直接影響結(jié)直腸癌預(yù)后,提示手術(shù)中應(yīng)規(guī)范行淋巴結(jié)切除,術(shù)后對(duì)高?;颊咭扇〖磿r(shí)、適當(dāng)?shù)木C合治療,如對(duì)結(jié)直腸癌行新輔助放化療及輔助化療,規(guī)范化療、聯(lián)用靶向治療藥物。許多研究表明,微轉(zhuǎn)移的患者預(yù)后明顯差于無(wú)轉(zhuǎn)移者,無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌患者,五年生存率高達(dá)90%,反之則減半【7】本研究通過(guò)RT―PCR法擴(kuò)增檢測(cè)K19 mRNA來(lái)判斷結(jié)直腸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移比常規(guī)病理組織學(xué)檢查敏感且特異性高,可測(cè)出低水平表達(dá)的K19 mRNA,及時(shí)發(fā)現(xiàn)常規(guī)病理無(wú)法發(fā)現(xiàn)的淋巴結(jié)隱匿轉(zhuǎn)移即微轉(zhuǎn)移,篩選出高度復(fù)發(fā)危險(xiǎn)的患者,提高了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移診斷率,有助于對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶作出早期診斷,提高腫瘤分期準(zhǔn)確性從而更好地制定術(shù)后個(gè)體性化療方案。早期結(jié)直腸癌患者,只要淋巴結(jié)發(fā)現(xiàn)有微轉(zhuǎn)移,則預(yù)后差,術(shù)后需要行化療等綜合治療,而不存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,術(shù)后可不化療,從而可以節(jié)省社會(huì)醫(yī)保資源,減輕病人痛苦。
參考文獻(xiàn):
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[關(guān)鍵詞] 乳腺癌;CA15-3;放射免疫分析;全身骨掃描
[中圖分類(lèi)號(hào)]R737.9 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B [文章編號(hào)]1673-7210(2008)08(b)-093-02
乳腺癌是婦女常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率近年來(lái)有上升趨勢(shì)。乳腺癌具有趨骨性,患者術(shù)后極易發(fā)生骨轉(zhuǎn)移,發(fā)生率為28%~73%[1]。因此,早期診斷乳癌骨轉(zhuǎn)移對(duì)制定治療方案、判斷預(yù)后具有十分重要的價(jià)值。本文通過(guò)對(duì)52例乳腺癌患者的血清糖類(lèi)抗原15-3(CA15-3)水平進(jìn)行測(cè)定,并結(jié)合放射性核素全身骨顯像結(jié)果進(jìn)行對(duì)照分析,評(píng)價(jià)其在乳腺癌骨轉(zhuǎn)移診斷中的臨床價(jià)值。
1 對(duì)象與方法
1.1對(duì)象
52例乳腺癌患者均經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)。均為女性,年齡26~69歲,平均45.3歲,按核素骨顯像結(jié)果分為兩組:骨顯像陽(yáng)性組34例;骨顯像陰性組18例;對(duì)照組20例,女性,年齡20~66歲, 平均42.7歲,為正常體檢者,無(wú)心、肝、肺、腎等重要器官疾患,肝腎功能試驗(yàn)正常,無(wú)乳腺良性疾病史。
1.2血清CA15-3測(cè)定
乳腺癌患者和健康體檢者均于早晨空腹采血,分離血清,保存于-20℃冰箱待測(cè),血樣采集距骨顯像檢查時(shí)間不超過(guò)10 d。CA15-3(正常值
1.3核素全身骨顯像
乳腺癌患者靜脈注射99mTc-MDP( 锝亞錫亞甲基二膦酸鹽)(740~925)MBq,于3 h后行全身骨顯像檢查,顯像前囑患者排空小便并取出身上攜帶的金屬配件。檢查儀器用德國(guó)SIMENS Diacam SPECT,采集條件為低能高分辨準(zhǔn)直器,矩陣128×512,掃描速度為20 cm/min,常規(guī)行前后、后前位全身顯像,必要時(shí)行局部靜態(tài)顯像。
1.4評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)
結(jié)果評(píng)定由固定的兩位專(zhuān)科醫(yī)師閱片審核,病變部位放射性高于健側(cè)或鄰近的正常骨組織且排除假陽(yáng)性因素,出現(xiàn)多個(gè)異常放射性濃聚,伴全身或局部骨痛及叩痛,可考慮為骨轉(zhuǎn)移。
1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
數(shù)據(jù)以x±s表示,兩組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)。
2 結(jié)果
2.1骨顯像陽(yáng)性組、骨顯像陰性組及對(duì)照組的CA15-3檢測(cè)結(jié)果
52例乳腺癌患者骨顯像中,34例診斷為骨轉(zhuǎn)移, 骨顯像陽(yáng)性組患者血清CA15-3顯著高于骨顯像陰性組和正常對(duì)照組(P
與其他兩組相比較,*P0.05
2.2 52例乳腺癌骨轉(zhuǎn)移區(qū)域數(shù)與CA15-3含量關(guān)系
乳腺癌骨轉(zhuǎn)移病灶數(shù)量多則患者血清CA15-3水平明顯升高,見(jiàn)表2。
3討論
核素全身骨顯像對(duì)轉(zhuǎn)移性骨腫瘤有很高的靈敏度,能夠較早地發(fā)現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移病灶,一般認(rèn)為能比X射線(xiàn)早3~6個(gè)月發(fā)現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移病灶[2]。乳腺癌常發(fā)生骨轉(zhuǎn)移,核素全身骨顯像可以作為臨床判斷乳腺癌有無(wú)骨轉(zhuǎn)移病灶的一個(gè)“金標(biāo)準(zhǔn)”,為臨床診斷和治療提供可靠依據(jù)。為此,根據(jù)核素全身骨顯像將乳腺癌病例分為骨顯像陽(yáng)性和骨顯像陰性?xún)山M,并檢測(cè)血清CA15-3水平,以評(píng)價(jià)血清CA15-3對(duì)乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者的臨床應(yīng)用價(jià)值。
CA15-3是一種相對(duì)分子量為(300~400)×103的大分子糖蛋白,主要存在于正常乳腺上皮管腔面,細(xì)胞惡變時(shí)含量明顯增多,是一種特異性較強(qiáng)的標(biāo)志物。Wojtacki等[3]研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的患者中CA15-3的敏感率為91.4%,而且CA15-3對(duì)于1處和2處以上骨轉(zhuǎn)移的敏感率分別為50%和100%。本研究表明,骨顯像陽(yáng)性組患者血清CA15-3顯著高于骨顯像陰性組和正常對(duì)照組(P
核素全身骨顯像對(duì)轉(zhuǎn)移性骨腫瘤有很高的靈敏度,但特異性較差。我們認(rèn)為,在行全身骨顯像的同時(shí),檢測(cè)CA15-3水平能提高其特異性,減少誤診,有助于乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的診斷、治療和療效觀(guān)察。
[參考文獻(xiàn)]
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關(guān)鍵詞:參芪抑瘤方;胃癌;MKN-45細(xì)胞;細(xì)胞周期;COX-2蛋白;PTEN蛋白;大鼠
DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2016.04.017
中圖分類(lèi)號(hào):R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1005-5304(2016)04-0064-04
Effects of Shenqi Yiliu Decoction Medicated Serum on Blocking Cell Cycle and Inhibiting Invasion and Metastasis of Gastric Cancer Cell Lines MKN-45 MA Chun-lin1, WU Hong-yan1,2,3, LI Hai-long1,2, CHEN Jie1, ZHANG Xuan1 (1. Gansu University of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China; 2. Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Excavation Innovation and Transformation of Gansu Province, Lanzhou 730000, China; 3. Laboratory for TCM New Products Development Engineering of Gansu Province, Lanzhou 730000, China)
Abstract: Objective To investigate the relevant mechanism of different concentrations of Shenqi Yiliu Decoction medicated serum on blocking cell cycle and inhibiting invasion and metastasis of gastric cancer cell lines MKN-45. Methods Sixty SPF Wistar rats were randomized into Shenqi Yiliu Decoction low-, medium-, and high-dose groups and control group, with 15 rats in each group. Low-, medium- and high-dose groups were fed with different concentrations of TCM liquid from which containing crude medicine (0.25, 0.50, 1.00 g/mL) separately for gavage. Rats in the blank group were given the same amount of drinking water for gavage, twice a day, for 7 days. 2 h after the last gavage, rat blood was taken and serum was separated. After MKN-45 cells were dealt with different concentrations of medicinal serum, FCM was used to detect cell cycle and immunohistochemistry technology was used to detect the expressions of COX-2 and PTEM proteins. Results FCM analysis showed that medicated serum could increase G0-G1 phase and shorten S phase of cells; medicated serum could reduce the positive expression rate of COX-2 of the MKN-45 cells and increase positive expression rate of PTEN proteins (P
Key words: Shenqi Yiliu Decoction; gastric cancer; MKN-45 cell; cell cycle; COX-2; PTEN; rats
優(yōu)勢(shì),并越來(lái)越受到關(guān)注。當(dāng)歸貝母苦參丸出自《金匱要略》,原用于治療妊娠小便困難。現(xiàn)代研究顯示,其對(duì)肝癌、胃癌細(xì)胞等有明顯的抑制作用[1-3]。參芪抑瘤方為臨床經(jīng)驗(yàn)方,用于多種腫瘤疾病的治療,由當(dāng)歸貝母苦參丸加黃芪、全蝎、山慈菇等組成,契合了腫瘤正氣不足,痰(濕)濁、癌毒、瘀血內(nèi)阻的發(fā)病機(jī)制[4]。方中藥材所含有效成分黃芪多糖、當(dāng)歸多糖、貝母堿、苦參堿等對(duì)多種癌細(xì)胞有明顯的抑制作用[5-8]。本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探索其抗腫瘤的相關(guān)作用機(jī)制,為抗腫瘤中藥研發(fā)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 動(dòng)物
60只SPF級(jí)Wistar大鼠,雌雄各半,6~8周齡,體質(zhì)量(200±20)g,甘肅中醫(yī)藥大學(xué)科研中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室,合格證號(hào)SYXK(甘)2001-0001。室溫20~25 ℃、濕度45%~55%分籠飼養(yǎng),喂標(biāo)準(zhǔn)飼料(甘肅中醫(yī)藥大學(xué)科研中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供),自由飲水。
1.2 藥物和細(xì)胞
參芪抑瘤方由苦參、黃芪、山慈菇、全蝎、當(dāng)歸、浙貝母等組成,所有飲片購(gòu)自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房,經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室楊扶德教授鑒定符合《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定。胃癌MKN-45細(xì)胞,中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所提供。
1.3 主要試劑與儀器
DMEM高糖培養(yǎng)基(Gibco公司),四季青胎牛血清(杭州四季青公司),胰蛋白酶(Gibco公司),二抗(中杉金橋生物技術(shù)有限公司),RNAisoTMPlus(D9810A),the PrimeScript RT reagent、kit(DRRO37A),SYBR Premix Ex TaqTM(DRR081A,TakarBio),國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭ū本┗瘜W(xué)試劑公司)。細(xì)胞培養(yǎng)箱(上海申力,HF212),高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司,5804R),倒置顯微鏡(日本OLYMPUS公司,CKX41+DP21),流式細(xì)胞儀(美國(guó)COULTER EPICS XL)。
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 分組、給藥及藥物血清制備
將60只SPF級(jí)Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和參芪抑瘤方低、中、高劑量組,每組15只。參芪抑瘤方低、中、高劑量組予0.25、0.50、1.00 g原藥材/mL藥液灌胃,對(duì)照組予等量飲用水灌胃。給藥體積均為1.5 mL/100 g,每日2次,連續(xù)7 d。末次灌胃2 h后取血,3000 r/min低溫離心15 min,分離血清,0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾,56 ℃、30 min滅活,-80 ℃保存。
2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
MKN-45細(xì)胞經(jīng)常規(guī)傳代培養(yǎng),采用含10%滅火胎牛血清及青鏈霉素(100 U/mL)的DMEM培養(yǎng)基,于37 ℃、5%CO2飽和濕度恒溫培養(yǎng)箱中貼壁生長(zhǎng),每2~3 d換液1次。倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞情況,當(dāng)生長(zhǎng)狀態(tài)良好且鋪滿(mǎn)瓶底時(shí),采用25%胰酶消化、傳代,并取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MKN-45細(xì)胞周期
取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MKN-45細(xì)胞接種于6孔板中,增殖為80%時(shí),加入20%藥物血清處理48 h,檢測(cè)前用胰酶消化,1500 r/min離心5 min,棄上清液,PBS洗2次,70%乙醇固定,4 ℃固定過(guò)夜。用PBS配制成單細(xì)胞懸液,50 μg/mL碘化丙啶染色液室溫染色30 min后,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期。
2.4 免疫組化檢測(cè)MKN-45細(xì)胞COX-2、PTEN蛋白表達(dá)
將無(wú)菌10 mm×10 mm的24片蓋玻片置入24孔培養(yǎng)板中,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MKN-45細(xì)胞消化后,制成單細(xì)胞懸液,以500 μL/孔接種于24孔培養(yǎng)板中。待細(xì)胞貼壁后,對(duì)照組加50 μL完全培養(yǎng)基,余孔依次加空白血清和高、中、低劑量藥物血清各50 μL,每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。細(xì)胞爬滿(mǎn)蓋玻片后,取爬片浸入4%多聚甲醛中過(guò)夜。用PBS洗3次,5 min/次,加50 μL 0.1%Triton X-100室溫下孵育15 min后,再用PBS洗5 min×3次,加3%H2O2室溫下孵育30 min,繼續(xù)用PBS洗5 min×3次,滴加50 μL 5%BSA封閉液。室溫封閉20 min后,甩去多余液體,滴加50 μL稀釋過(guò)的Rabbit Anti-collagen TypeⅡ(1∶100),置濕盒中4 ℃孵育過(guò)夜。并以PBS代替一抗,作為陰性對(duì)照,PBS洗3次,2 min/次,加生物素化山羊抗兔IgG,37 ℃孵育20 min,再用PBS洗2 min×3次。然后加SABC,37 ℃繼續(xù)孵育20 min,PBS洗5 min×4次。DAB顯色,自來(lái)水沖洗1 min。蘇木素復(fù)染5 min,0.5%鹽酸乙醇分化10 s,氨水返藍(lán)10 s。梯度乙醇脫水干燥,每一梯度5 min,二甲苯透明10 s,甘油封片。倒置相差顯微鏡觀(guān)察爬片,每組選6張爬片,每張爬片選擇3個(gè)高倍視野照相,用Leica Qwin病理圖像分析系統(tǒng)對(duì)所拍照片進(jìn)行分析,測(cè)定相對(duì)灰度值。
3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以―x±s表示,根據(jù)方差齊性檢驗(yàn)結(jié)果,多組間比較采用方差分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
4 結(jié)果
4.1 參芪抑瘤方藥物血清對(duì)MKN-45細(xì)胞周期的影響
10%濃度藥物血清處理后MKN-45細(xì)胞較對(duì)照組細(xì)胞G0/G1期比例升高,S期低于對(duì)照組,見(jiàn)表1、圖1。表明藥物血清可有效抑制細(xì)胞進(jìn)入增殖周期,降低細(xì)胞S期,阻滯細(xì)胞于G0~G1期。
4.2 參芪抑瘤方藥物血清對(duì)MKN-45細(xì)胞COX-2、PTEN蛋白表達(dá)的影響
對(duì)照組細(xì)胞COX-2以強(qiáng)陽(yáng)性和陽(yáng)性表達(dá)為主,而藥物血清干預(yù)組細(xì)胞著色逐漸變淺,COX-2呈弱陽(yáng)性或陰性表達(dá);對(duì)照組細(xì)胞著色較淺,PTEN呈弱陽(yáng)性或陰性表達(dá),藥物血清干預(yù)組細(xì)胞著色逐漸變深,PTEN表達(dá)逐漸增強(qiáng),呈強(qiáng)陽(yáng)性或陽(yáng)性表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P
5 討論
胃癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素、多步驟、多基因參與的復(fù)雜病理過(guò)程。正常情況下,胃黏膜上皮細(xì)胞的增殖和凋亡之間保持動(dòng)態(tài)平衡。這種平衡的維持有賴(lài)于癌基因、抑癌基因及一些細(xì)胞因子等共同調(diào)控。多種因素會(huì)影響上述調(diào)控體系,共同參與胃癌的發(fā)生。
中醫(yī)認(rèn)為,胃癌是牽涉整體的全身性疾病的局部表現(xiàn),多由先天稟賦不足、邪毒侵襲、痰凝血瘀等因素,引起機(jī)體陰陽(yáng)失衡,臟腑經(jīng)絡(luò)功能失調(diào),進(jìn)而導(dǎo)致局部癌變。其主要病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí),本虛為素體虛弱或先天稟賦因素,標(biāo)實(shí)不外乎氣滯、血瘀、痰凝、毒聚。中醫(yī)藥治療在個(gè)體化、多層次、多靶點(diǎn)控制腫瘤生長(zhǎng)、抗轉(zhuǎn)移、減少?gòu)?fù)發(fā)等方面具有獨(dú)到的優(yōu)勢(shì),是胃癌的重要輔助治療方法。胃癌早期采用中西醫(yī)結(jié)合治療,可有效逆轉(zhuǎn)病情的惡化。利用中醫(yī)藥的整體調(diào)節(jié)作用,胃癌術(shù)后放化療過(guò)程中,使患者對(duì)放化療藥物的耐受性增強(qiáng),免疫功能得到提高,抑瘤效果得以強(qiáng)化,痛苦明顯緩解,生存期延長(zhǎng),生活質(zhì)量提高。
COX-2是前列腺素合成關(guān)鍵限速酶環(huán)氧合酶的一種亞型,近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),COX-2高表達(dá)與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),在腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡過(guò)程中起重要作用,其表達(dá)可延長(zhǎng)癌細(xì)胞的生存期,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。在正常胃黏膜COX-2幾乎不表達(dá),而在胃癌變時(shí)則過(guò)表達(dá),對(duì)胃癌細(xì)胞的異常增殖、細(xì)胞凋亡、抑制血管形成及轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)有重要生物學(xué)作用。COX-2過(guò)表達(dá)可上調(diào)黏附因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移;上調(diào)腫瘤細(xì)胞周?chē)苌梢蜃?,促進(jìn)腫瘤血管生成。研究表明,其在正常胃黏膜、淺表性胃炎、萎縮性胃炎伴腸化、不典型增生及胃癌組織中的表達(dá)呈逐漸遞增趨勢(shì)[9]。
作為抑癌基因的PTEN低表達(dá)會(huì)激活PPI3K-Ark 信號(hào)通路,從而縮短細(xì)胞的分裂周期,促進(jìn)細(xì)胞增殖,與腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[10]。PTEN的表達(dá)過(guò)低、受到抑制或缺失都會(huì)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的無(wú)限增殖,從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生[11-13]。PTEN蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵襲程度密切相關(guān)。胃癌組織中PTEN蛋白的檢測(cè)可了解與判斷腫瘤增生、侵襲及轉(zhuǎn)移的能力和程度。
綜上,參芪抑瘤方藥物血清能明顯阻滯胃癌細(xì)胞于G0/G1期,減少S期細(xì)胞數(shù)量,有效抑制細(xì)胞進(jìn)入增殖周期,誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞周期阻滯。參芪抑瘤方藥物血清可能通過(guò)抑制COX-2的表達(dá)從而抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的活性,降低細(xì)胞間E-鈣黏蛋白活性,減弱腫瘤細(xì)胞的侵襲能力,也可能通過(guò)升高PTEN的表達(dá)量,使其去磷酸化作用增強(qiáng),進(jìn)而抑制細(xì)胞周期,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和分化,抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等,從而發(fā)揮抗胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用。
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