酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)思考

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【摘要】酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是廣泛應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)診斷的免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)，實(shí)驗(yàn)教學(xué)中采用該技術(shù)檢測(cè)“乙肝兩對(duì)半”。為適應(yīng)中職生教育人才培養(yǎng)模式的教學(xué)改革，使學(xué)生符合具有“理論知識(shí)適度、技術(shù)應(yīng)用能力強(qiáng)”的要求，我們對(duì)實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容和方法進(jìn)行改革，從適用性角度選題，通過(guò)實(shí)驗(yàn)操作考核，采取以考促學(xué)的手段，加強(qiáng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的訓(xùn)練力度，提高學(xué)生實(shí)驗(yàn)操作能力，培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立工作的能力。

【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；免疫學(xué)檢驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)；考核

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme－linkedimmunosorbentassay，ELISA)是廣泛應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)診斷的免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)。該技術(shù)集基本理論、基本技能為一體，能使學(xué)生能對(duì)前期所學(xué)的理論知識(shí)及技能進(jìn)一步加強(qiáng)和提高，是一個(gè)能為學(xué)生進(jìn)人臨床實(shí)習(xí)打好基礎(chǔ)的系統(tǒng)實(shí)訓(xùn)。目前該技術(shù)的臨床檢測(cè)多采用商品化的ELISA試劑盒，實(shí)驗(yàn)步驟較少，操作簡(jiǎn)單。然而，參與反應(yīng)的成分很多，如抗原抗體濃度、酶結(jié)合物濃度以及試劑的質(zhì)量控制等等，影響因素眾多。傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備、儀器的準(zhǔn)備及調(diào)試、標(biāo)本及試劑的處理等工作基本上是由教師包辦。實(shí)驗(yàn)的許多環(huán)節(jié)學(xué)生沒(méi)有親自做，因而在實(shí)驗(yàn)完成后，部分學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)還是一知半解，更談不上能力的鍛煉和培養(yǎng)［1］。為適應(yīng)中職生教育人才培養(yǎng)模式的教學(xué)改革，使學(xué)生符合具有“理論知識(shí)適度、技術(shù)應(yīng)用能力強(qiáng)”的要求，對(duì)免疫學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容和方法進(jìn)行改革勢(shì)在必行。為此我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)技能操作考核，采取以考促學(xué)的手段，加強(qiáng)了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)內(nèi)容的訓(xùn)練力度，也收到了一定的效果，以下談?wù)勎覀兊淖龇靶Ч?/p>

1精選考核內(nèi)容，以適應(yīng)臨床實(shí)踐的需要

考核內(nèi)容的選擇上以圍繞臨床實(shí)際進(jìn)行選擇，真正使學(xué)生做到學(xué)以致用。不但要讓學(xué)生了解、掌握先進(jìn)的免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)和操作方法，還必須著重培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)造性思維和綜合分析問(wèn)題的能力，從而全面提高學(xué)生素質(zhì)［2］。ELISA由于操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、可定性定量，在臨床檢驗(yàn)診斷中應(yīng)用最為廣泛。常用于如病毒性肝炎、艾滋病、皰疹等傳染性疾病的檢測(cè)診斷，還常用于補(bǔ)體、免疫球蛋白和腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)。要想在有限的課時(shí)里完成諸多的內(nèi)容訓(xùn)練，顯然是不現(xiàn)實(shí)的。因此我們僅選擇了最具有代表性的“乙肝兩對(duì)半”檢測(cè)作為該技術(shù)的訓(xùn)練及考核內(nèi)容?！耙腋蝺蓪?duì)半”共有五項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目，即HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，實(shí)驗(yàn)中所需要的實(shí)驗(yàn)器材均能由檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室提供，易于準(zhǔn)備，給學(xué)生提供了選擇和發(fā)揮的空間。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所需要的待測(cè)血清標(biāo)本為陽(yáng)性或陰性標(biāo)準(zhǔn)物，不具傳染性，保證了學(xué)生實(shí)驗(yàn)的安全性。學(xué)生只要掌握了“乙肝兩對(duì)半”的檢驗(yàn)程序和檢驗(yàn)方法，其他在臨床上需要用ELISA技術(shù)檢測(cè)的常見(jiàn)項(xiàng)目則觸類旁通，能起到事半功倍的效果，至于少見(jiàn)的、較為復(fù)雜的檢測(cè)項(xiàng)目可以在日后的實(shí)習(xí)及工作中繼續(xù)學(xué)習(xí)。

2調(diào)整考核內(nèi)容，可行性及針對(duì)性強(qiáng)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容在學(xué)時(shí)安排上有6課時(shí)，理論與實(shí)驗(yàn)課課時(shí)之比為1．1。以往的教學(xué)形式為先理論授課，教師講解實(shí)驗(yàn)的原理及檢驗(yàn)程序，實(shí)驗(yàn)教學(xué)中教師講解后進(jìn)行示范教學(xué)，學(xué)生照葫蘆畫瓢的再做實(shí)驗(yàn);實(shí)驗(yàn)操作考核只設(shè)HBsAg項(xiàng)目的考核，考核項(xiàng)目單一、形式單一。學(xué)生只需完成實(shí)驗(yàn)操作，報(bào)告結(jié)果即可。而現(xiàn)行的考核內(nèi)容是“乙肝兩對(duì)半”的共五項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目，各個(gè)項(xiàng)目的檢驗(yàn)過(guò)程如標(biāo)本的稀釋、試劑選擇、加樣順序有所不一。從限制考核時(shí)間的角度考慮，學(xué)生在考核時(shí)隨機(jī)抽考其中的一個(gè)項(xiàng)目，由考生自主選擇所需物品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，這樣增加了考試的隨機(jī)性和靈活性。雖然抽考使得考核難度增加，但能強(qiáng)化學(xué)生對(duì)ELISA檢測(cè)乙肝兩對(duì)半操作步驟的理解。當(dāng)學(xué)生抽到題目后，在熟悉操作步驟的基礎(chǔ)上，只要懂得該項(xiàng)目檢測(cè)時(shí)需注意的細(xì)節(jié)，如檢測(cè)HBcAb需將血清稀釋50倍，HBeAb的檢測(cè)需加入中和試劑，學(xué)生在對(duì)離心機(jī)、水浴箱及微量移液器的使用相當(dāng)熟悉的基礎(chǔ)上，不難將標(biāo)本中的結(jié)果如實(shí)地檢測(cè)出來(lái)。

3考核的形式

學(xué)生重理論、輕實(shí)驗(yàn)的現(xiàn)象普遍存在，有的學(xué)生每操作一步就看一下筆記，或者是詢問(wèn)其他同學(xué)，有的學(xué)生甚至希望教師能一步步的教，因而學(xué)生對(duì)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)缺乏系統(tǒng)的認(rèn)知。我們將考核的形式設(shè)計(jì)有理論測(cè)試(占30分)和操作考核(占70分)。通過(guò)調(diào)整考核內(nèi)容，將能力培養(yǎng)貫穿于整個(gè)訓(xùn)練過(guò)程，將單純理論教學(xué)融合于實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，能把理論知識(shí)激活，也強(qiáng)化了學(xué)生的實(shí)驗(yàn)操作能力及解決問(wèn)題、分析問(wèn)題能力。理論測(cè)試采用本教研室的計(jì)算機(jī)交互平臺(tái)進(jìn)行，根據(jù)教學(xué)內(nèi)容特點(diǎn)，理論測(cè)試我們進(jìn)行這樣的設(shè)計(jì)，首先收集乙肝兩對(duì)半檢測(cè)相關(guān)試題，建立題庫(kù)，內(nèi)容涉及實(shí)驗(yàn)原理、操作、材料、結(jié)果觀察及臨床意義。如(1)乙肝兩對(duì)半檢測(cè)涉及ELISA的哪些原理?分別檢測(cè)什么項(xiàng)目?(2)通過(guò)各反應(yīng)孔顯色，判斷疫苗接種者、病毒攜帶者、“大三陽(yáng)”、“小三陽(yáng)”;(3)手工洗滌有何要求;(4)加終止液的目的是什么;(5)ELISA常用的酶是哪種?其底物是什么。共組10套試題，學(xué)生抽簽后通過(guò)計(jì)算機(jī)交互平臺(tái)指向性地試題、進(jìn)行考試。考慮到學(xué)生對(duì)理論考試容易產(chǎn)生畏難情緒，在題型的設(shè)計(jì)上，設(shè)有填充題，標(biāo)示題、連線題及填空題等，內(nèi)容直觀、清晰，學(xué)生“寓考于樂(lè)”，在輕松愉快的心理環(huán)境下地完成理論測(cè)試。

4考試評(píng)分嚴(yán)謹(jǐn)，設(shè)計(jì)合理

理論考核從試題集中抽取出6道題組卷，每題5分，共30分。操作考核的評(píng)分項(xiàng)目包括:專業(yè)素質(zhì)(衣著儀表、考試態(tài)度、紀(jì)律)5分;實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備(實(shí)驗(yàn)用品、試劑的預(yù)處理、標(biāo)本處理、標(biāo)記記錄)5分;實(shí)驗(yàn)步驟(加樣、微量移液器的使用、孵育、洗滌、顯色)35分，結(jié)果觀察10分;操作后清場(chǎng)(試劑、器材歸位、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面清理)5分，綜合評(píng)價(jià)(規(guī)定時(shí)間完成、實(shí)驗(yàn)后清場(chǎng)、消毒等)10分，共70分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)于考試前告知學(xué)生，給學(xué)生能充分地復(fù)習(xí)和準(zhǔn)備，注意操作細(xì)節(jié)，提高考試質(zhì)量?？荚嚂r(shí)每個(gè)學(xué)生獨(dú)立完成試驗(yàn)，教師全程監(jiān)考，及時(shí)對(duì)出錯(cuò)環(huán)節(jié)扣分，評(píng)出總分。

5效果分析

在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，采用考核方式，取得了以下成效。

5．1利于調(diào)動(dòng)學(xué)生的主觀能動(dòng)性，激發(fā)起學(xué)習(xí)的熱情

實(shí)驗(yàn)操作考核綜合反映出學(xué)生的實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)、實(shí)驗(yàn)過(guò)程和實(shí)驗(yàn)態(tài)度等各方面的表現(xiàn)?？己顺煽?jī)占期末總成績(jī)的30%，將學(xué)生實(shí)驗(yàn)考核計(jì)入課程總成績(jī)后，學(xué)生上實(shí)驗(yàn)課的目的性增強(qiáng)，課上都搶著做實(shí)驗(yàn)，從以往實(shí)驗(yàn)缺乏主動(dòng)性，不預(yù)習(xí)，不復(fù)習(xí)，變?yōu)榉e極思考，認(rèn)真準(zhǔn)備。實(shí)驗(yàn)報(bào)告抄襲現(xiàn)象也明顯減少，改變了重理論輕實(shí)踐的現(xiàn)象［3］。從學(xué)生提出的問(wèn)題，如溶血標(biāo)本可以檢測(cè)“乙肝兩對(duì)半”嗎?如果用溶血標(biāo)本檢測(cè)，會(huì)有什么影響，會(huì)影響什么試劑?從這些問(wèn)題的提出可以看出，學(xué)生懂得對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行思考，也懂得遇到問(wèn)題主動(dòng)和老師商量，學(xué)生不斷發(fā)現(xiàn)問(wèn)題、思考問(wèn)題、解決問(wèn)題的能力得到提高。

5．2獨(dú)立工作能力的培養(yǎng)

獨(dú)立工作能力是一個(gè)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作者最基本素質(zhì)，中職生畢業(yè)后就業(yè)單位多是基層醫(yī)院，基層醫(yī)院的檢驗(yàn)科可能只有1至2名檢驗(yàn)員，每天的檢驗(yàn)工作任務(wù)都要獨(dú)立完成。因而學(xué)生在就學(xué)期間即應(yīng)注重獨(dú)立工作能力培養(yǎng)。在實(shí)驗(yàn)考核過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)物品的選擇、擺放，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后操作臺(tái)的清理等，是學(xué)生自己準(zhǔn)備和獨(dú)立完成。學(xué)生在考核時(shí)需考慮到考核時(shí)間的限制，因此只有熟悉基本的理論知識(shí)、熟練基本操作，才能在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)，得出正確的結(jié)果，考試前不做好準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)將無(wú)法順利完成。

5．3實(shí)驗(yàn)基本技能的訓(xùn)練

由于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)涉及環(huán)節(jié)多，通過(guò)考試能綜合考核學(xué)生的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)，如移液管的準(zhǔn)確吸樣，血清等倍稀釋的方法;能考察學(xué)生對(duì)常用儀器設(shè)備如離心機(jī)、恒溫孵育箱、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)的操作;在對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，使用過(guò)的物品如棉簽、試管、注射器的正確處置，能增強(qiáng)學(xué)生的無(wú)菌操作技術(shù)和觀念。

5．4學(xué)生的評(píng)價(jià)及反饋

此考核方案在2013、2014兩屆學(xué)生進(jìn)行了實(shí)施，通過(guò)操作考核，學(xué)生們得到較為系統(tǒng)的訓(xùn)練，對(duì)ELISA檢測(cè)乙肝兩對(duì)半的整個(gè)流程有了較為深刻的認(rèn)識(shí)。有必要開(kāi)展，通過(guò)考核能更好地將理論與實(shí)踐相結(jié)合，學(xué)生能自如地、成功地檢測(cè)出標(biāo)準(zhǔn)物血清標(biāo)本的正確結(jié)果，同時(shí)也很有成就感，增強(qiáng)了對(duì)實(shí)習(xí)及將來(lái)的工作的信心。在對(duì)2013級(jí)的學(xué)生進(jìn)行實(shí)習(xí)情況跟蹤、訪談中得知，學(xué)生普遍認(rèn)為，ELISA技術(shù)在臨床免疫檢驗(yàn)診斷中應(yīng)用廣泛，用此技術(shù)檢測(cè)的項(xiàng)目多，工作量較大。由于在操作考核強(qiáng)化了技能，在實(shí)習(xí)老師的指導(dǎo)下，能很快地進(jìn)入角色，增強(qiáng)了工作自信心。對(duì)學(xué)生進(jìn)行實(shí)驗(yàn)考核的同時(shí)，也對(duì)教師提出了更高要求。教師準(zhǔn)備的理論測(cè)試問(wèn)題在內(nèi)容上需與臨床免疫檢驗(yàn)接軌，使考核更科學(xué)合理化。規(guī)范實(shí)驗(yàn)教學(xué)，嚴(yán)謹(jǐn)、規(guī)范示作好示教。學(xué)生操作過(guò)程中，巡視督查，及時(shí)糾正學(xué)生的錯(cuò)誤。以考促學(xué)法強(qiáng)化酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)，補(bǔ)充和完善了免疫學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的內(nèi)容和方法，也希望能以此提高學(xué)生對(duì)其他課程學(xué)習(xí)的主動(dòng)性及激發(fā)起學(xué)習(xí)的熱情。

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作者：秦靜英 單位：南寧市衛(wèi)生學(xué)校