一周學(xué)習(xí)計劃精選(九篇)
前言：一篇好文章的誕生，需要你不斷地搜集資料、整理思路，本站小編為你收集了豐富的一周學(xué)習(xí)計劃主題范文，僅供參考，歡迎閱讀并收藏。
第1篇：一周學(xué)習(xí)計劃范文
關(guān)鍵詞：益氣活血藥；毛細(xì)血管密度；周細(xì)胞計數(shù)；心肌梗死；大鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.07.015
中圖分類號：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1005-5304（2013）07-0038-05
Change of Capillary Pericapillary Cells in Rats with Myocardial Infarction and Effect of Supplementing Qi and Activating Blood Circulation Herbs HUANG Kun， YANG Dan-dan， GUO Shu-wen， SUN Qing， ZHANG Lu， QI Xin， WAN Ting， ZHENG Cheng-long （Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029 ， China）
Abstract：Objective To observe the change of capillary pericapillary cells in rats with myocardial infarction and the influence of supplementing qi and activating blood circulation herbs， and explore its mechanism of improving myocardial perfusion. Methods The rat model was established by ligaturing the left anterior descending coronary artery. On the base of ECG evaluation， successfully modeled rats were randomly divided into the model group， group treated with supplementing qi and activating blood circulation Chinese medicine （activating blood and supplementing qi group）， group treated with Perindopril （Perindopril group）， group treated with Tongxinluo Capsules （Tongxinluo group）. The sham-operation group was taken as the control. There were totally 5 groups. The model group and the sham-operation group were treated with normal saline. The changes of myocardial capillary density （MCD） and number of pericapillary cells on the 7th， 28th day after medicinal administration were observed. Results On the 7th and 28th day， the MCD decreased significantly and the number of capillary pericapillary cells increased significantly in the model group compared with the sham-operation group （P
Key words：supplementing qi and activating blood circulation herbs；myocardial capillary density；number of pericapillary cells；myocardial infarction；rats
研究顯示，心肌梗死患者雖然經(jīng)過搭橋或支架置入術(shù)后使梗死相關(guān)冠脈再通，或經(jīng)冠脈造影證實已達(dá)TMI3級血流的梗
基金項目：國家自然科學(xué)基金（81173142）
通訊作者：郭書文，E-mail：
死相關(guān)血管，有超過25%的患者心肌組織水平的血流灌注并未恢復(fù)[1]。因此，減少缺血心肌再灌注損傷、保持心肌微血管的完整性、改善缺血心肌血供狀態(tài)、恢復(fù)心肌細(xì)胞功能，是目前研究的熱點問題。
前期的系列研究結(jié)果顯示，益氣活血方能明顯促進(jìn)大鼠缺血心肌微血管生成而改善心肌缺血，并能抑制心肌細(xì)胞凋亡，對相關(guān)蛋白及細(xì)胞因子有顯著調(diào)節(jié)作用[2-4]。本研究采用結(jié)扎冠狀動脈的方法建立大鼠急性心肌梗死后心衰模型，利用免疫組織化學(xué)方法觀察模型大鼠心肌毛細(xì)血管周細(xì)胞的變化，以及益氣活血中藥對其的影響，進(jìn)一步探討益氣活血中藥改善心肌血流灌注的作用機制。
1 實驗材料
1.1 動物
健康雄性SD大鼠，體質(zhì)量（200±20）g，清潔級，8周齡，中國科學(xué)院動物研究所提供，許可證號：SCXK（京）2012-0001。
1.2 藥物
益氣活血藥由黃芪、人參、當(dāng)歸、川芎、三七粉等組成。根據(jù)前期研究結(jié)果[5-6]選擇益氣活血藥（2∶1）的劑量組合[5-6]。依口服劑工藝制備，按處方比例稱取中藥材，加9倍量水，煎煮2次，每次2.5 h，共5 h，水煎液過濾，濃縮，加乙醇調(diào)含醇量至50%，過濾，回收乙醇，過濾，調(diào)整濃度為相當(dāng)原藥材2 g/mL，北京中醫(yī)藥大學(xué)藥廠提供。
對照藥物選用通心絡(luò)膠囊，石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號110723-120116；培哚普利片，施維雅（天津）制藥有限公司，批號P2009971052951。
1.3 試劑與儀器
BA3414 兔抗鼠CD34抗體（武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品），BM0002小鼠抗α-SMA抗體（武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品），血清內(nèi)皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO），南京建成生物工程公司提供。RSP1002型小動物呼吸機（Kent Scientific Corporation）。
2 實驗方法
2.1 造模
采用左冠狀動脈前降支結(jié)扎方法[7]。用1%戊巴比妥鈉腹腔注射（40 mg/kg）麻醉后，背位固定，行氣管插管，連接小動物呼吸機，在左側(cè)第3、4肋間切開皮膚，鈍性分離肌層，打開胸腔，用開胸器推開胸腺擴大手術(shù)視野，充分暴露心臟，用帶線縫合針在左心耳與肺動脈圓錐之間于左心耳下約2 mm處，無張力的狀態(tài)下將左前降支連同少量的心肌組織一起結(jié)扎，然后迅速將心臟復(fù)位，關(guān)閉胸腔。全部手術(shù)過程在30 min內(nèi)完成，嚴(yán)格無菌操作。術(shù)后連續(xù)3 d肌肉注射青霉素預(yù)防感染。以結(jié)扎部位以下心肌變灰白、搏動減弱、心電圖肢體導(dǎo)聯(lián)出現(xiàn)ST段弓背向上明顯抬高為造模成功的標(biāo)志。假手術(shù)組手術(shù)過程相同，僅繞過左冠狀動脈，打松結(jié)。
2.2 分組與給藥
將大鼠按隨機數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組、中藥組、培哚普利組、通心絡(luò)組。
各組于造模的第1日開始分別灌胃相應(yīng)藥物，每日1次。通心絡(luò)組每日給予通心絡(luò)膠囊30 mg/kg體質(zhì)量，培哚普利組每日給予培哚普利片0.72 mg/kg體質(zhì)量，益氣活血組每日給予益氣活血中藥21 g/kg體質(zhì)量[5-6]。各干預(yù)藥物均溶于無菌蒸餾水中，在保證藥物劑量的前提下，調(diào)整濃度使每只動物給藥容積均為10 mL/（kg?d）。假手術(shù)組和模型組每日以相同容積無菌蒸餾水灌胃。連續(xù)灌胃28 d。
2.3 標(biāo)本采集
稱取大鼠體質(zhì)量，用1%戊巴比妥鈉麻醉，剪開腹腔，從腹主動脈取血，分離出血清待測。然后剪斷肋骨和胸肌，暴露胸腔取出心臟，用生理鹽水洗去血污，剔除血管、脂肪等非心肌組織，從左心室最大橫徑處切開，將切好的下半部分心臟放入預(yù)先準(zhǔn)備的4%多聚甲醛液中固定備用，進(jìn)行常規(guī)組織學(xué)方法處理，制作石蠟切片。據(jù)各組大鼠在實驗過程中的成活數(shù)量分別觀察第7、28日2個時間點指標(biāo)的變化情況。
2.4 心肌病理形態(tài)學(xué)觀察
將心肌組織用不同濃度酒精梯度脫水，二甲苯透明，浸蠟、包埋、切片，脫臘，二甲苯透明，HE常規(guī)染色，梯度酒精脫水，二甲苯透明，樹膠封固，光學(xué)顯微鏡觀察。
2.5 心肌毛細(xì)血管密度
石蠟切片脫蠟至水；3%過氧化氫室溫孵育8 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性；蒸餾水沖洗3次（每次2 min），電爐加熱沸騰后斷電，間隔7 min，反復(fù)2次，冷卻后PBS（pH 7.2～7.6）洗滌2次，滴加5%牛血清白蛋白封閉液，室溫20 min，甩去多余液體，滴加CD34一抗（濃度為1∶100），4 ℃過夜，第2日早晨滴加生物素山羊抗小鼠IgG，室溫20 min，PBS洗3次（每次2 min），滴加SABC，室溫20 min，PBS洗4次（每次5 min），DAB顯色，取1 mL蒸餾水，A、B、C試劑各加1滴，混勻后加至切片，室溫顯色，鏡下控制時間，蒸餾水沖洗，蘇木素輕度復(fù)染，1～2 s即可，梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。
2.6 免疫組化染色法檢測周細(xì)胞
石蠟包埋，切片（厚度4 ?m，每只鼠各取3張切片），脫蠟，高溫高壓抗原修復(fù)，噴氣后計時2 min，自然冷卻，水洗。4 ℃下于1∶300 α-SMA單克隆抗體孵育24 h，每張切片滴加50 ?L EnVisionTM試劑，室溫下孵育30 min。滴加新鮮配制的顯色劑（DAB），蘇木素復(fù)染。顯微鏡下觀察，胞漿顯棕黃色者為陽性細(xì)胞。按下法計數(shù)：先在100×視野下隨機選擇血管密度高的5個區(qū)和血管密度低的5個區(qū)作為計數(shù)部位，后在400×視野下計數(shù)微血管旁胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒的周細(xì)胞數(shù)，每只大鼠計數(shù)20個視野，最后以平均每個視野（400×）的周細(xì)胞數(shù)表示。小動脈平滑肌細(xì)胞亦為α-SMA陽性表達(dá)，根據(jù)血管壁厚度及結(jié)構(gòu)可與周細(xì)胞相區(qū)別，此類陽性細(xì)胞不在計數(shù)范圍內(nèi)。
2.7 血清內(nèi)皮素-1、一氧化氮測定
采用雙抗體夾心ELISA法測定各組大鼠血清ET-1、NO的變化，具體方法嚴(yán)格按試劑盒說明操作。根據(jù)各組大鼠在實驗過程中的成活數(shù)量分別觀察第7、28日2個時間點指標(biāo)的變化情況。
3 統(tǒng)計學(xué)方法
用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。一般資料采用描述性分析，計量資料以―x±s表示，計數(shù)資料以頻數(shù)及百分?jǐn)?shù)描述；多個樣本計數(shù)資料用χ2檢驗，計量資料符合正態(tài)性分布采用t檢驗，如不符合正態(tài)性分布采用非參數(shù)檢驗，比較各項指標(biāo)在治療前后之間的差異，多組間差異性統(tǒng)計采用方差分析，若方差不齊，則用Games-Howell分析，雙側(cè)檢驗。P
4 結(jié)果
4.1 模型建立情況
采用冠狀動脈結(jié)扎法致大鼠急性心肌梗死后，肢導(dǎo)Ⅱ?qū)?lián)心電圖ST段呈弓背向上抬高，缺血心肌很快變蒼白色。共手術(shù)100只，造模成功81只，死亡19只，其中手術(shù)中死亡8只，急性心肌梗死造模成功后24 h內(nèi)死亡3只，給予藥物治療后死亡3只，注射麻藥后行心臟超聲檢查后死亡5只，死亡原因為呼吸停止、室顫和大出血，造模成功率81.0%。第7日觀察大鼠42只，第28日觀察大鼠39只。
4.2 各組大鼠心肌形態(tài)學(xué)觀察
第7日：假手術(shù)組大鼠心外膜未見纖維素滲出及未見炎細(xì)胞浸潤；模型組心肌梗死區(qū)炎癥反應(yīng)明顯，有泡沫狀組織細(xì)胞聚集，大量中性粒細(xì)胞浸潤，心肌纖維斷裂、排列紊亂，壞死的心肌組織由新生的肉芽組織取代；梗死區(qū)邊緣有充血、出血及炎細(xì)胞帶，心外膜有炎性及纖維素性滲出物。培哚普利組病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小。通心絡(luò)組病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，較培哚普利組病變范圍小。益氣活血組病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，較培哚普利組及通心絡(luò)組病變范圍較小。見圖1。
第28日：假手術(shù)組大鼠心外膜未見纖維素滲出及未見炎細(xì)胞浸潤。模型組大鼠心肌梗死區(qū)由纖維母細(xì)胞、纖維細(xì)胞及致密的膠原纖維束組成，呈束狀或平行排列，膠原纖維束之間有極少殘存的心肌組織，炎性細(xì)胞浸潤明顯減少，地圖狀瘢痕組織形成；心室腔擴大，室壁變薄。培哚普利組大鼠病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，且梗死區(qū)有島狀或細(xì)帶狀的心肌組織。通心絡(luò)組大鼠病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，且梗死區(qū)有島狀或細(xì)帶狀的心肌組織，但較培哚普利組病變范圍大。益氣活血組大鼠病理改變與模型組相似，但病變范圍較模型組明顯減小，且梗死區(qū)有島狀或細(xì)帶狀的心肌組織，但較培哚普利組病變范圍大。見圖2。
假手術(shù)組 模型組
益氣活血組 培哚普利組 通心絡(luò)組
圖1 第7日HE染色大鼠心肌病理形態(tài)（×50）
假手術(shù)組 模型組
益氣活血組 培哚普利組 通心絡(luò)組
圖2 第28日HE染色大鼠心肌病理形態(tài)（×100）
4.3 益氣活血中藥對心肌梗死大鼠血清內(nèi)皮素-1、一氧化氮水平的影響
與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清ET-1含量明顯升高，NO水平下降（P
表1 各組大鼠血清ET-1、NO水平比較（―x±s，pg/mL）
組別 術(shù)后第7日 術(shù)后第28日
只數(shù) ET1 NO 只數(shù) ET1 NO
假手術(shù)組 10 5.37±1.06 31.12±2.57 9 6.38±1.73 30.38±4.00
模型組 7 13.67±1.68## 19.41±3.24## 7 14.60±2.38## 16.23±3.05##
益氣活血組 9 8.06±1.21** 41.71±4.43** 8 8.97±1.07** 40.11±5.51**
培哚普利組 8 10.65±1.12** 33.02±2.68** 8 7.30±1.37** 45.26±6.60**
通心絡(luò)組 8 9.87±0.73** 37.76±3.34** 7 9.57±1.57** 35.06±5.20**
注：與假手術(shù)組比較，##P
4.4 益氣活血中藥對心肌梗死大鼠毛細(xì)血管密度的影響
在病理圖像分析系統(tǒng)下測定各組大鼠心肌梗死邊緣區(qū)平均毛細(xì)血管密度（MCD）。第7日：模型組較假手術(shù)組心肌梗死邊緣區(qū)MCD明顯降低（P
表2 各組大鼠心肌MCD比較（―x±s）
組別 n 第7日 第28日
假手術(shù)組 20 612.79±33.35 611.11±25.67
模型組 20 533.67±20.27## 493.27±19.38##
益氣活血組 20 1178.50±33.27** 1051.30±30.12**
培哚普利組 20 1010.10±33.27** 1099.30±33.98**
通心絡(luò)組 20 1094.30±33.12** 974.75±35.41**
4.5 益氣活血中藥對心肌梗死大鼠毛細(xì)血管周細(xì)胞計數(shù)影響
第7日：模型組較假手術(shù)組心肌梗死邊緣區(qū)周細(xì)胞計數(shù)明顯增加，益氣活血中藥組、培哚普利組、通心絡(luò)組與模型組比較，梗死邊緣區(qū)的周細(xì)胞計數(shù)減少（P
表3 各組大鼠心肌周細(xì)胞計數(shù)比較（―x±s，個）
組別 n 第7日 第28日
假手術(shù)組 20 0.8±0.84 1.2±0.84
模型組 20 8.2±1.30## 14.0±1.58##
益氣活血組 20 4.2±0.84* 4.4±1.14**
培哚普利組 20 5.8±0.84** 3.6±1.14**
通心絡(luò)組 20 4.4±0.55** 5.8±1.30**
注：與益氣活血組比較，P
P
5 討論
臨床研究表明，急性心肌梗死患者多存在“氣虛血瘀”的中醫(yī)病理[8]。實驗的中藥組方中，生曬參、黃芪大補元氣、廣益五臟，針對氣虛的主要病機；三七、川芎、當(dāng)歸為臣，活血通絡(luò)、止血消瘀。諸藥相合，氣行則血行，血行則氣實，諸藥合用，標(biāo)本兼治，相得益彰，共奏益氣活血、化瘀通絡(luò)之功效。
冠脈微血管結(jié)構(gòu)完整性與功能正常，是確保心肌收縮力儲備和局部功能恢復(fù)的先決條件，是心肌存活的必備條件，當(dāng)發(fā)生微小動脈和阻力血管的功能及結(jié)構(gòu)變化時，冠脈血流速率和血流儲備的變化可引起心肌缺血。低灌注梗死區(qū)和正常心肌之間的慢復(fù)流區(qū)域毛細(xì)血管內(nèi)皮腫脹、突出甚至脫落，受周邊的壞死組織壓迫，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能和結(jié)構(gòu)完整性受損，心肌毛細(xì)血管周細(xì)胞功能失調(diào)。血管壁在結(jié)構(gòu)上由血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管周圍細(xì)胞組成，它們分別構(gòu)成血管的內(nèi)外壁。周細(xì)胞又叫壁細(xì)胞，可以分化為巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等，具有收縮能力，從而調(diào)節(jié)微循環(huán)的灌流量和通透性[9-10]。
有研究顯示，早期心肌缺血缺氧性壞死中周細(xì)胞數(shù)量在4 h后明顯增多，12 h后開始下降，48 h后顯著低于正常水平，推測周細(xì)胞作為心肌中的間質(zhì)細(xì)胞可能是心肌纖維化發(fā)生發(fā)展中的主要效應(yīng)細(xì)胞[11]。本實驗結(jié)果表明，使用益氣活血中藥后，毛細(xì)血管周細(xì)胞的計數(shù)減少，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P
本實驗結(jié)果顯示，益氣活血組較模型組心肌梗死邊緣區(qū)域MCD明顯增加，可見周細(xì)胞對毛細(xì)血管生長起到調(diào)控的作用。研究發(fā)現(xiàn)新生血管的生長和維持主要由周細(xì)胞的募集和分化所推動[12-13]。周細(xì)胞募集并伴隨發(fā)生基底膜重塑[14-15]?？梢姡芗?xì)胞的募集對血管新生是必不可少的。
此外，益氣活血中藥可提升內(nèi)皮分泌NO水平，并相應(yīng)降低ET-1水平。NO和ET-1是由血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的一對作用相反的血管活性分子，NO的含量與生物活性的變化能夠反映內(nèi)皮功能的狀態(tài)。與益氣活血組模型組比較，ET-1下降，NO升高，說明益氣活血中藥具有保護血管內(nèi)皮功能的作用。
總之，益氣活血中藥可以通過降低心肌梗死大鼠毛細(xì)血管周細(xì)胞計數(shù)，維持血管的相對完整性，改善局部微循環(huán)的血流，減少梗死面積，并促進(jìn)血管新生，調(diào)節(jié)NO/ET-1的平衡，從而達(dá)到改善局部心肌血供的目的。
參考文獻(xiàn)：
[1] Skyschally A， Leineweber K， Gres P， et al. Cornary micro enbolization[J]. Basic Res Cardiol，2006，101（5）：373-382.
[2] 黃培培，郭書文，楊蟠儲，等.心肌缺血大鼠血清TNF-α、IL-6變化及益氣活血藥對其的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010，33（9）：614-617.
[3] 張九峰.益氣活血藥對心力衰竭大鼠心肌細(xì)胞凋亡及其調(diào)控分子的影響[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2011.
[4] 周劍宇.益氣活血藥防治大鼠心力衰竭心臟重塑的調(diào)節(jié)機制研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2011.
[5] 郭書文，崔巍，王碩仁，等.血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡與增殖的時相特征及益氣活血藥對其影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005，25（11）：1004-1007.
[6] 郭書文，王國華.益氣活血藥配合西醫(yī)治療冠心病心絞痛臨床研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（9）：12-13.
[7] 劉開宇，田海，孫露，等.標(biāo)準(zhǔn)化大鼠心肌梗死模型的制作[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2007，41（6）：531-534.
[8] 易慧智，吳偉康，侯燦.中藥防治心肌缺血再灌注損傷的進(jìn)展[J].中西醫(yī)結(jié)合雜志，1995，15（8）：509-511.
[9] Kurz H， Fehr J， Nitschke R， Burkhardt H. Pericytes in the mature chorioallantoicmembrane capillary plexus contain desmin and alpha- smooth muscle actin：relevance for non-sprouting angiogenesis[J]. Histochemistry and Cell Biology，2008，130（5）：1027-1040.
[10] Oishi K， Kamiyashiki T， Ito Y. Isometric contraction of microvascular pericytes from mouse brain parenchyma[J]. Microvascular research，2007，73（1）：20-28.
[11] 李永梅，任立群，王心蕊.早期心肌缺血缺氧性壞死中周細(xì)胞數(shù)量的變化[J].心臟雜志，2009，21（2），211-214.
[12] Paquet-Fifield S， Schluter H， Li A， et al. A role for pericytes as micro environmental regulators of human skin tissue regeneration[J]. The Journal of clinical investigation，2009， 119（9）：2795-2806.
[13] Lin SL， Kisseleva T， Brenner DA， et al. Pericytes and perivascular fibroblasts are the primary source of collagen producing cells in obstructive fibrosis of the kidney[J]. The American Journal of Pathology，2008，173（6）：1617-1627.
[14] Greenberg JI， Shields DJ， Barillas SG， et al. A role for VEGF as a negative regulator of pericyte function and vessel maturation[J]. Nature，2008，456（7223）：809-813.
第2篇：一周學(xué)習(xí)計劃范文
【摘要】 目的 對亞洲牛帶絳蟲成蟲延伸因子-1(elongation factor 1， EF-1)基因進(jìn)行克隆、表達(dá)和免疫學(xué)初步研究。方法 將亞洲牛帶絳蟲成蟲EF-1克隆到原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)中，在大腸桿菌BL-21/DE3中用異丙硫代-β-D半乳糖苷誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物通過十二烷基磺酸鈉－聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進(jìn)行鑒定，用鎳離子金屬螯合劑親和層析柱進(jìn)行純化，用蛋白印跡法(Western blotting)進(jìn)行免疫學(xué)分析。結(jié)果 PCR、雙酶切及DNA測序結(jié)果均表明重組質(zhì)粒pET-28a(+)-EF-1構(gòu)建成功。重組蛋白可被感染了亞洲牛帶絳蟲患者血清和豬血清識別，表明其具有免疫反應(yīng)性。結(jié)論 亞洲牛帶絳蟲成蟲EF-1基因可在原核表達(dá)系統(tǒng)中獲得具有免疫學(xué)活性的表達(dá)，為進(jìn)一步研究該蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】 亞洲牛帶絳蟲；延伸因子-1；基因克??；原核表達(dá)
ABSTRACT: Objective To clone and express the novel gene named elongation factor 1 (EF-1) of Taenia saginata asiatica in order to analyze the immunogenicity of the recombinant protein. Methods By screening the full length cDNA plasmid library， the coding region of EF-1 was amplified with PCR， and cloned into the prokaryotic expression vector pET-28a(+) and then expressed in E.coli BL21 with IPTG induction. The recombinant protein was detected by SDS-PAGE and purified by Ni-IDA affinity chromatography， and its immunogenicity was analyzed by Western blotting. Results PCR， double enzyme digestion and DNA sequencing confirmed that the recombinant expression plasmid was successfully constructed. Western blot analysis of EF-1 recombinant protein testified that the recombinant protein could be recognized by immunizing the serum of swine and patient， therefore indicating its immunogenicity. Conclusion A novel gene coding EF-1 of Taenia saginata asiatica was cloned and expressed successfully. The purified protein of EF-1 will be of importance for further research on the biological function of the gene.
KEY WORDS: Taenia saginata asiatica; elongation factor 1(EF-1); molecular cloning; prokaryotic expression
亞洲牛帶絳蟲(Taenia saginata asiatica)是近30年來發(fā)現(xiàn)的一種成蟲形態(tài)與牛帶絳蟲相似，而囊尾蚴卻與豬囊尾蚴相似并以豬作為中間宿主的人體帶絳蟲。2006年我們在前期研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步系統(tǒng)地開展對亞洲牛帶絳蟲在分類地位、分子診斷和疫苗等方面的研究［1-4］，為制定預(yù)防人體帶絳蟲病策略提供依據(jù)。本研究從亞洲牛帶絳蟲成蟲cDNA質(zhì)粒文庫中篩選出一個延伸因子-1(elongation factor 1， EF-1)的同源基因，構(gòu)建了pET-28a(+)-EF-1原核表達(dá)載體，并對其原核表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了初步的免疫學(xué)研究，為進(jìn)一步研究其生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 血清來源
感染亞洲牛帶絳蟲豬血清由貴陽醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室提供，患者血清采自亞洲牛帶絳蟲流行區(qū)貴州省都勻市米秀鄉(xiāng)，健康人血清由中山大學(xué)熱帶病重點實驗室提供。
1.1.2 文庫、質(zhì)粒、菌株
蟲體標(biāo)本采自亞洲牛帶絳蟲流行區(qū)貴州省都勻市米秀鄉(xiāng)，亞洲牛帶絳蟲成蟲全長cDNA質(zhì)粒文庫的構(gòu)建、EST測序及Unigene 分析與上海聯(lián)合基因有限公司合作完成。原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)和大腸桿菌BL-21/DE3由中山醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)實驗室保存。
1.1.3 主要試劑和工具酶
Ex Taq酶(含dNTP)、EcoRⅠ、XhoⅠ、T4 DNA連接酶及DNA標(biāo)準(zhǔn)(DL2000)均購自大連寶生物工程公司；異丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)購自美國Promega公司；Ni-IDA Agarose(cat No：69670)購自美國Novagen公司；蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)購自立陶宛MBI公司；DNA凝膠回收試劑盒、質(zhì)粒純化試劑盒購自北京賽百盛基因公司；辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗豬IgG二抗、DAB(3，3二氨基聯(lián)苯胺)顯色試劑盒均購自武漢博士德有限公司；PVDF膜購自Millipore公司；TMB顯色試劑盒購自美國BD公司；SDS、丙烯酰胺、亞甲叉雙丙烯酰胺、過硫酸胺、尿素等試劑均購自上海申友生物科技公司。
1.1.4 引物合成和DNA測序
基因擴增引物和重組質(zhì)粒DNA測序由Invitrogen上海生物技術(shù)有限公司合成。
1.2 方法
1.2.1 EF-1基因的識別
將獲得的亞洲牛帶絳蟲unigene進(jìn)行Blastx分析，獲得編碼亞洲帶絳蟲成蟲延伸因子-1基因文庫質(zhì)粒編號為T.a HC23-E9，GenBank登錄號為EF420501的同源基因；并通過瑞士生物信息學(xué)研究所的蛋白分析專家系統(tǒng)(ExPASY， ca.expasy.org/)預(yù)測其理化特性。
1.2.2 EF-1基因的擴增 根據(jù)已獲得的EF-1編碼序列，利用DNAClub和PCRdesign設(shè)計引物。上游引物：CTAGAATTCATGGAGTGTGCGTTGAAGTTC，帶EcoRⅠ酶切位點；下游引物：GGGCTCGAGTTACAATTTGTTGAAGGAAG，帶XhoⅠ酶切位點。以亞洲牛帶絳蟲成蟲cDNA文庫中EF-1基因的克隆質(zhì)粒為模板，94 ℃預(yù)變性5 min后，熱循環(huán)參數(shù)為94 ℃ 1 min，57 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，共35個循環(huán)，最后72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物10 g/L瓊脂糖凝膠電泳回收。
1.2.3 重組原核表達(dá)質(zhì)粒［pET-28a(+)-EF-1］的構(gòu)建及鑒定
將PCR產(chǎn)物和原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a(+)經(jīng)EcoRⅠ、XhoⅠ雙酶切后回收，連接、轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL-21/DE3感受態(tài)細(xì)胞，卡那霉素篩選陽性克隆。對陽性克隆提取質(zhì)粒進(jìn)行PCR、雙酶切和測序鑒定。
1.2.4 重組蛋白的表達(dá)
將確定能表達(dá)重組蛋白的單菌落接種于5 mL LB培養(yǎng)基中，過夜培養(yǎng)后1∶100轉(zhuǎn)接到1 000 mL培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至A600約為0.6時加入IPTG至終濃度為1 mmol/L，28 ℃、250 r/min進(jìn)行誘導(dǎo)。誘導(dǎo)4 h后離心收菌，用SDS-PAGE檢測蛋白質(zhì)的表達(dá)。
1.2.5 菌體的裂解、重組蛋白可溶性判斷及待純化融合蛋白上清的制備
取單菌落接種于1 000 mL含卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37 ℃震蕩培養(yǎng)至A600為0.6時，加入IPTG使其終濃度為1 mmol/L，28 ℃震蕩培養(yǎng)4 h，4 ℃離心(6 000 g×10 min)，收集菌液，按文獻(xiàn)［5］的方法，每克菌(濕重)加入3 mL裂解緩沖液，重懸細(xì)菌沉淀，裂解液冰上超聲破碎(160 W，超聲1 s，停2 s，超聲5 min)，4 ℃ 13 000r/min離心20 min，收集上清和沉淀，分別取上清10 μL加入4×SDS上樣緩沖液和沉淀微量加1×SDS上樣緩沖液，煮沸5-10 min后行150 g/L SDS-PAGE判斷重組蛋白的可溶性。
1.2.6 尿素變性純化重組蛋白
在得到的包涵體(超聲后沉淀)中加入A液10 mL重懸，4 ℃ 12 000 r/min離心15 min，棄上清，重復(fù)2次，再用B液洗滌1次，4 ℃ 6 000 r/min離心15 min。將洗滌后的包涵體沉淀加入8 mol/L尿素(溶于基礎(chǔ)液)18 mL放置1 h左右，沉淀完全溶解，溶液清亮透明。采用透析法，逐步降低尿素濃度(8-6-5-4-3-2-1 mol/L PBS溶液)。
1.2.7 Western blotting檢測重組蛋白的免疫反應(yīng)性
將純化的蛋白進(jìn)行120 g/L SDS-PAGE電泳，使用電轉(zhuǎn)移儀于100 V冰浴轉(zhuǎn)印1.5 h，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，將含預(yù)染蛋白Marker條帶剪下，PVDF膜轉(zhuǎn)入感染亞洲牛帶絳蟲豬和患者血清中(1∶100稀釋)，室溫孵育2 h，PBS洗滌3次，每次5 min。然后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗豬和抗人IgG(1∶2 000稀釋)，室溫孵育1 h，PBS洗滌3次，每次5 min，DAB顯色至出現(xiàn)目的條帶，超純水終止反應(yīng)［6］。
2 結(jié) 果
2.1 生物信息學(xué)分析
該基因與細(xì)粒棘球絳蟲EF-1基因(登錄號為AAF641192.1)的氨基酸序列的一致性達(dá)87%，相似性達(dá)91%；全長988 bp，編碼區(qū)67-868，編碼269個氨基酸。理論分子質(zhì)量和等電點分別是28 067.8 u和4.88［7］。
2.2 原核重組質(zhì)粒的鑒定
將重組質(zhì)粒進(jìn)行PCR和雙酶切鑒定，產(chǎn)物進(jìn)行10 g/L瓊脂糖凝膠電泳。結(jié)果顯示在500-1 000 bp之間有一清晰的條帶，與目的基因的大小基本相符，證明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功(圖1)。
2.3 蛋白表達(dá)純化結(jié)果
將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到E.Coli BL-21/DE3中表達(dá)，SDS-PAGE電泳分析結(jié)果如圖2中第4、5泳道所示，大約在34 ku左右處出現(xiàn)表達(dá)條帶，與目的蛋白分子量基本相符。通過破包涵體，將蛋白進(jìn)行純化，結(jié)果如圖2中第6、7泳道所示，其位置與目的蛋白相符，證明目的蛋白純化成功。
2.4 Western blotting鑒定
感染亞洲牛帶絳蟲的豬血清以及感染亞洲牛帶絳蟲的患者血清對純化蛋白的Western blotting均顯示出清晰的條帶(圖3)。
3 討論
研究表明，EF-1是一種在細(xì)胞內(nèi)普遍存在且大量表達(dá)的多聚體核糖體蛋白質(zhì)，在基因表達(dá)、翻譯過程中起重要作用［8］。EF-1可能由α、β、γ、δ四個亞基組成，其中EF-1α屬于G蛋白家族，它和氨酰tRNA、GTP一起組成復(fù)合體，通過正確地識別mRNA上的密碼子和tRNA上的反密碼子，負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運氨酰tRNA 到80S核糖體，并具有低水平GTP酶的活性。EF-1β具有鳥苷酸交換活性，在EF-1α從核糖體離開并且構(gòu)象由GDP形式變成GTP準(zhǔn)備與新的AA-tRNA相互作用的過程中，需要EF-1β作為催化劑。EF-1γ常與EF-1β形成復(fù)合物，具有增加后者鳥苷酸交換的功能。至少在脊椎動物中，EF-1還有第四個亞基EF-1δ，尤其在其羧基端與EF-1β具有同源性，而在氨基端無同源性，表明它們可能具有不同的功能［9-10］。我們從亞洲牛帶絳蟲cDNA文庫中識別出了一個EF-1的全長編碼基因，其編碼的氨基酸序列與GenBank中細(xì)粒棘球絳蟲的EF-1基因 (登錄號為AAF64192.1)的氨基酸序列的一致性達(dá)87%，相似性達(dá)91%，推測其為亞洲牛帶絳蟲EF-1基因，并且含有完整的開放閱讀框，是一個全長cDNA序列。
通過生物信息學(xué)分析，該蛋白的理論分子質(zhì)量為28 067.8 u，而質(zhì)粒pET-28a(+)的載體標(biāo)簽序列的分子質(zhì)量為6 ku，所以重組蛋白的分子質(zhì)量大約應(yīng)為34 ku。圖2的4泳道顯示的重組蛋白條帶與預(yù)期的大小是一致的，并且條帶很濃，但從該圖的5泳道看出上清沒有表達(dá)，說明該蛋白是以包涵體的形式表達(dá)，通過尿素變性純化重組蛋白，得到了條帶很濃的純化蛋白(圖2第7泳道)。本研究為包涵體蛋白的純化積累了經(jīng)驗，同時還證實了重組蛋白在純化后具有免疫反應(yīng)性，獲得了具有免疫活性的重組蛋白，為進(jìn)一步研究其生物學(xué)功能以及在診斷尤其是疫苗研究方面的作用奠定了基礎(chǔ)。
參考文獻(xiàn)
［1］Fan PC， Lin CY， Chung WC. Experimental infection of philippine Taenia in domestic Animals ［J］. In J Parasitol， 1992， 22(2):235-238.
［2］包懷恩. 我國亞洲牛帶絳蟲研究的現(xiàn)狀和展望 ［J］. 熱帶醫(yī)學(xué)雜志， 2002， 2(3):215-219.
［3］黃江，胡旭初，包懷恩，等. 亞洲帶絳蟲成蟲全長cDNA質(zhì)粒文庫的構(gòu)建及EST測序 ［J］.熱帶醫(yī)學(xué)雜志， 2007， 7(2)116-118.
［4］黃江，胡旭初，包懷思，等. 亞洲帶絳蟲成蟲鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶B基因的克隆和生物信息學(xué)分析 ［J］. 中國病原生物學(xué)雜志， 2008， 3(1):56-59.
［5］薩姆布魯克J，弗里奇EF，曼尼阿蒂斯T. 分子克隆實驗指南 ［M］. 第2版. 北京：科學(xué)出版社， 2002:822-849.
［6］Harlow E， Lane D. 抗體技術(shù)實驗指南 ［M］. 第1版，北京：北京科學(xué)出版社， 2002:161-170.
［7］龐建新，黃江，胡旭初，等. 亞洲帶絳蟲成蟲延伸因子-1基因的克隆和分析 ［J］. 熱帶醫(yī)學(xué)雜志， 2007， 7(6):513-515.
［8］Andersen Gr， Nissen P， Nyborg J， et al. Elongation factors in protein biosynthesis ［J］. Trends Bio Sci， 2003， 28:434-440.
第3篇：一周學(xué)習(xí)計劃范文
關(guān)鍵詞：慢性乙型肝炎；外周血；T淋巴細(xì)胞；共刺激分子；表達(dá)變化
慢性乙型肝炎源于機體細(xì)胞免疫功能紊亂，不能有效清除體內(nèi)病毒，其中T淋巴細(xì)胞在主導(dǎo)機體免疫功能方面發(fā)揮著重要的作用[1]。筆者主要探討慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細(xì)胞表面共刺激分子的表達(dá)變化及臨床意義，將結(jié)果報告如下：
1 資料與方法
1.1一般資料 本次選取的40例研究對象均為南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院于2013年4月～2015年1月收治的慢性乙型肝炎患者作為觀察組，所有患者均知情同意，其中男29例，女11例，年齡37～68歲，平均年齡（45.3±5.6）歲；職業(yè)：教師16例、農(nóng)民工4例、企業(yè)高管8例、退休在家12例。所有患者經(jīng)檢查，均符合慢性乙型肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除神經(jīng)系統(tǒng)障礙、嚴(yán)重心腦血管疾病、全身免疫系統(tǒng)疾病、凝血及造血功能障礙、甲型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎等患者。同時選取健康患者39例作為對照組，其中男30例，女9例，年齡36～69歲，平均年齡（45.8±5.7）歲；職業(yè)：教師15例、農(nóng)民工5例、企業(yè)高管9例、退休在家11例。兩組患者在性別、年齡等資料方面無顯著差異（P>0.05），具有可比性。
1.2方法
1.2.1試劑 在測定過程中，需要用到的試劑：鼠抗人CD3-APC、CD8-FIT、CTLA-4-PE、PD-1-PE熒光素標(biāo)記單克隆抗體，LgG-FITC、lgG-PE、lgG-APC同型對照融血劑，由美國BD公司提供；另外需要乙型肝炎病毒及耐藥突變檢測試劑盒、HBV標(biāo)志物檢測試劑盒、ALT檢測試劑盒。
1.2.2儀器 流式細(xì)胞儀、擴增儀、高速冷凍離心機、全自動生化分析儀、全自動酶免分析儀、低溫冰箱。
1.2.3測定 外周血T淋巴細(xì)胞表面共刺激分子檢測具體方法：患者晨起空腹抽取外周靜脈血3 ml，抗凝混勻后分別置于5支不同的測定管中：其中第一管加入CD3、CD8、CD28，第二管中加入單抗CD3、CD8、CTLA-4，第三管中加入CD3、CD8、PD-1，第四管中加入單抗CD3、CD8、Tim-3，第五管中加入lgG-FTTC lgG-PE lgG-APC作為同型對照管，所有試管中均加入單抗20 μl，搖勻后在常溫下狀態(tài)下放置30 min，然后加入新鮮配置的溶血劑搖勻，在光線暗處放置15 min并離心5 min，使用磷酸鹽緩沖液進(jìn)行3次洗滌，并且每管中加入0.3 ml PBS，在4°C中放置后在1 d內(nèi)檢測。為了使結(jié)果更加精準(zhǔn)，輔助測定方法：并采用定時熒光定量PCR檢測技術(shù)測定血清中HBV（乙型肝炎病毒）、DNA（脫氧核糖核酸）含量；采用雙抗體夾心時間分辨熒光免疫分析法檢測乙型肝炎病毒；采用全自動生化分析儀監(jiān)測丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶含量。
1.3觀察指標(biāo) 將觀察組分為為治療組、治療無效組、治療有效組，與對照組作比較。分析兩組患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群相對表達(dá)量[2]。分析兩組患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群絕對表達(dá)量[3]。
1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SSPS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理與分析，表示計量數(shù)據(jù)資料，采用t檢驗，（%）表示計數(shù)資料，并進(jìn)行χ2檢驗，P
2 結(jié)果
2.1患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群相對表達(dá)量分析 觀察組三組CD4*、CD8*T淋巴細(xì)胞亞群絕對表達(dá)量均明顯下降，低于對照組 （P
2.2患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群絕對表達(dá)量分析 CD8*T淋巴細(xì)胞亞群絕對表達(dá)量明顯高于對照組。另外未治療組、治療無效組CD4*/CD8*比值明顯高于治療有效組、對照組（P
3 討論
與對照組相比較，觀察組CD4*、CD8*等表達(dá)量出現(xiàn)明顯下降，另外未治療組CD4*、PD-1*表達(dá)量明顯高于對照組、治療有效組、治療無效組?？傮w而言，觀察組CD4*T淋巴細(xì)胞亞群相對表達(dá)量、絕對表達(dá)量均明顯低于對照組，但是CD8*T淋巴細(xì)胞亞群相對表達(dá)量升高，絕對表達(dá)量下降。研究表明，共刺激分子的絕對表達(dá)量更能反應(yīng)患者的免疫功能狀態(tài)[4]。
綜上所述，進(jìn)行共刺激分子表達(dá)變化研究可以為慢性乙型肝炎治療提供一定的依據(jù)，為深入評價細(xì)胞免疫功能提供了新的研究角度。
參考文獻(xiàn)：
[1]宋華峰.負(fù)性共刺激分子BTLA/HVEM在慢性乙肝患者外周血T細(xì)胞上的表達(dá)特性及其臨床意義[D].江蘇：蘇州大學(xué)，2014.
[2]王琳.外周血T細(xì)胞免疫功能與乙肝慢性化的相關(guān)性研究[D].江蘇：蘇州大學(xué)，2014.
[3]曹麗娟.負(fù)性共刺激分子在慢性乙肝患者外周血Treg的表達(dá)特性及其臨床意義[D].江蘇：蘇州大學(xué)，2013.
第4篇：一周學(xué)習(xí)計劃范文
胞、Th1/Th2比值、IL17+Th17細(xì)胞的量及平均熒光強度、培養(yǎng)上清中IL17水平均低于治療前， 而與健康對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)， 且聯(lián)合治療組降低的幅度均大于MTX治療組; 治療前后Th17細(xì)胞的量與C反應(yīng)蛋白(CRP)、 疾病活動指數(shù)(DAS28)的消長呈正相關(guān)(P
【關(guān)鍵詞】 關(guān)節(jié)炎 類風(fēng)濕 流式細(xì)胞術(shù) 依那西普 Th亞群 Th17細(xì)胞
依那西普(etanercept)是II型腫瘤壞死因子(tumer necrosis factor， TNF)受體P75的細(xì)胞外部分和人IgG1的Fc段基因工程融合的蛋白二聚體(rhTNFR: Fc)， 可特異性阻斷TNFα與其細(xì)胞表面受體的相互作用， 實驗證實抗TNFα治療可明顯改善類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid
arthritis， RA)患者的病情［1］。TNFα除了在RA免疫發(fā)病及炎癥過程中發(fā)揮重要作用外， 尚促進(jìn)IL2、 集落刺激因子(colonystimulating factor， CSF)和INFα等細(xì)胞因子的產(chǎn)生， 增加高親和力IL2受體的表達(dá)， 促進(jìn)T細(xì)胞增殖［2］， 推測抑制TNFα可能對T細(xì)胞及其亞群有下調(diào)作用。本研究中分離依那西普治療前后RA患者及健康人外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells， PBMC)， 用細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測定Th1、 Th2及Th17細(xì)胞的表達(dá)和ELISA法測定培養(yǎng)上清中相應(yīng)的細(xì)胞因子水平并與患者病情進(jìn)行相關(guān)性分析， 旨在探討依那西普治療RA對Th細(xì)胞亞群的影響， 進(jìn)一步探討此療法的免疫機制。
1 材料和方法
1.1 材料
依那西普凍干粉針劑(etanercept， 商品名益賽普) 由上海中信國健藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。PerCP小鼠抗人CD4單克隆抗體(mAb)IgG1、FITC抗人IFNγmAb IgG1/PE抗人IL4 mAb IgG1及同型對照IgG1、Cytofix/ Cytoperm液及Perm/Wash液、流式細(xì)胞儀均購自美國BD公
司。FITC抗人IL17mAb IgG1及同型對照IgG1購自美國Ebioscience公司。淋巴細(xì)胞分離液購自天津TBD生物技術(shù)發(fā)展中心。佛波酯(phorbol 12myristate13acetate， PMA)、 離子霉素(Ionomycin)、 莫能菌素(Monensin)購自美國Sigma公司， RPMI1640培養(yǎng)液購自美國Gibco公司?？谷薎L4 ELISA試劑盒、 抗人IFNγ ELISA試劑盒購于美國R&D公司。抗人IL17 ELISA試劑盒購于美國Ebioscience公司。
1.2 方法
1.2.1 RA患者的分組及處理方法
20例RA患者(男6例， 女14例， 年齡25～67歲， 平均42歲)， 為200611/200705在西京醫(yī)院門診或住院RA
患者， 均符合美國風(fēng)濕病協(xié)會(ACR)1987年RA分類標(biāo)準(zhǔn)， 病程為2～20年(平均9年)。20例患者均為活動期中重度患者， 表現(xiàn)為6個或6個以上的關(guān)節(jié)腫脹; 6個或6個以上的關(guān)節(jié)觸痛; 并有以下3條標(biāo)準(zhǔn)中的任意2條: (1)晨僵持續(xù)時間≥45 min; (2)血沉≥28 mm/h; (3)C反應(yīng)蛋白(CRP)≥20 mg/dL。患者均已服用穩(wěn)定劑量的甲氨蝶呤(MTX， 每周7.5～15 mg)4周， 且未使用MTX以外其他病情緩解抗風(fēng)濕藥(DMARDs)?；颊唠S機分為2個治療組， 每組10例。聯(lián)合治療組， 給予MTX 7.5～15 mg口服， 每周1次， 同時給予皮下注射依那西普， 每次25 mg， 每周2次; MTX治療組， 為單用等量MTX治療; 療程均為12周。另設(shè)年齡、 性別匹配的健康獻(xiàn)血員10名作為正常對照。
1.2.2 RA患者病情活動性及療效評價指標(biāo)
記錄晨僵時間， 采用目測模擬標(biāo)尺評價休息痛(VAS)， 計數(shù)壓痛關(guān)節(jié)數(shù)、 腫脹關(guān)節(jié)數(shù)(包括雙手近端指間關(guān)節(jié)、 掌指關(guān)節(jié)、 腕關(guān)節(jié)、 肘關(guān)節(jié)、 肩關(guān)節(jié)及膝關(guān)節(jié)， 共28個關(guān)節(jié))， 記錄健康評估指數(shù)(HAQ)平均分， 魏氏法測ESR， 免疫比濁法測C反應(yīng)蛋白(CRP)， 并計算疾病活動指數(shù)(DAS28)。
1.2.3 標(biāo)本采集及細(xì)胞分離
分別抽取治療前、治療12周后RA患者和健康對照組外周靜脈血5 mL， 采用肝素鈉抗凝， Ficol1密度梯度離心法分離PBMC， 調(diào)整PBMC密度為1×109/L， 懸浮于含100 mL/L胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中， 同步取1 mL細(xì)胞懸液， 進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色FCM測定Th細(xì)胞亞群; 取2 mL細(xì)胞懸液加入PMA(50 μg/L)、離子霉素(1 μmol/L)置于37℃孵箱中培養(yǎng)過夜， 收集上清置于-70℃凍存待ELISA檢測。
1.2.4 細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色FCM測定Th細(xì)胞亞群 取上述PBMC懸液(1×109/L)置于48孔培養(yǎng)板內(nèi)， 每孔1 mL， 并加PMA (50 μg/L)、離子霉素(1 μmol/L)和蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑莫能菌素(2 μmol/L)以阻止細(xì)胞因子向細(xì)胞外分泌， 在37℃孵箱中培養(yǎng)5 h。收集細(xì)胞分為對照管和實驗管， 分別加入PercP小鼠抗人CD4 mAb IgG1 10 μL， 混勻， 室溫放置20 min對細(xì)胞表面抗原進(jìn)行染色。加入Cytofix/Cytoperm液200 μL， 4℃放置20 min， 通透和固定細(xì)胞并洗滌后， 進(jìn)行胞內(nèi)細(xì)胞因子染色， 實驗管分別加入IFNγ mAb IgG1/PE抗人IL4mAb IgG1或FITC抗人FITC抗人IL17 mAb IgG1各10 uL， 對照管加入同型對照抗體， 4℃避光孵育30 min后。用Perm/Wash液1 mL洗滌2次， 最后以300 μL洗滌液重懸細(xì)胞， 24 h內(nèi)采用FCM檢測分析。以CD4直方圖設(shè)門區(qū)分Th細(xì)胞(CD4+)， 最終以散點圖IFNγ、 IL4和IL17染色陽性表示Th1細(xì)胞、 Th2細(xì)胞和Th17細(xì)胞， 用Cellsquest軟件獲取并分析數(shù)據(jù)。
1.2.5 ELISA檢測PBMC培養(yǎng)上清中IFNγ、 IL4、 IL17的水平
取上述凍存PBMC培養(yǎng)上清， 采用ELISA法檢測上清中IFNγ、IL4、IL17水平， 具體操作按試劑盒提供的說明書進(jìn)行，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品均設(shè)3個復(fù)孔， 酶標(biāo)測試儀450 nm處讀數(shù)。
1.2.6 統(tǒng)計學(xué)處理
實驗結(jié)果用x±s表示， 采用SPSS11.0軟件分析， 各組間均數(shù)首先進(jìn)行方差齊性檢驗， 如滿足方差齊性， 采用兩樣本t檢驗， 如不滿足， 則采用秩轉(zhuǎn)換檢驗方法， Th1、 Th17細(xì)胞陽性率及Th1/Th2比值與病情活動指標(biāo)的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析， 以P
2 結(jié)果
2.1 RA患者治療前后病情變化
兩組患者在治療12周后， DAS28較治療前降低或明顯降低(MTX治療組P
療組患者的休息痛、 晨僵時間亦有改善(P
2.2 外周血Th細(xì)胞亞群的比較
細(xì)胞膜表面標(biāo)志和胞內(nèi)細(xì)胞因子染色FCM測定顯示， 活動期RA患者在治療前， 其外周血中CD4+IFNγ+Th1細(xì)
胞、 CD4+IL17+Th17細(xì)胞的數(shù)量以及Th1/Th2細(xì)胞比值均分別高于健康對照組［(27.0±2.9)% vs (23.2±1.7)%， P
2.3 PBMC培養(yǎng)上清中IFNγ、 IL4、 IL17的變化
ELISA法測得治療前活動期RA患者PBMC培養(yǎng)上清中IFNγ、 IL4水平與健康對照相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義， IL17水平明顯高于健康對照組， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義［(40±3.8) ng/L vs (30±2.0) ng/L， P
治療后IL17水平明顯低于治療前［(28±2.6) ng/L vs (40±3.8) ng/L， P
計學(xué)意義。聯(lián)合治療組治療后的IL17水平下降幅度明顯大于MTX對照組， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P
2.4 Th細(xì)胞亞群陽性率與病情活動指標(biāo)的相關(guān)性分析
對20例RA患者Th1、Th17細(xì)胞的量及Th1/Th2與CRP、 DAS28、 休息痛、 晨僵時間、HAQ平均分進(jìn)行相關(guān)性分析， 結(jié)果顯示RA患者Th17細(xì)胞的量與其CRP、 DAS28水平呈正相關(guān)(P
3 討論
依那西普治療RA的明顯作用已被大量實驗證明［3］， 但其治療機制未明， 可能通過減少關(guān)節(jié)腔內(nèi)炎細(xì)胞的浸潤， 降低滑膜中細(xì)胞黏附因子的表達(dá)， 阻斷炎性因子的相互作用而減輕炎癥［4］。既往研究發(fā)現(xiàn)RA發(fā)生發(fā)展與Th1、Th2細(xì)胞數(shù)量和比例失衡密切相關(guān)， 鑒于Th1細(xì)胞在RA患
者炎性關(guān)節(jié)中的聚集， 曾認(rèn)為RA是以Th1細(xì)胞占主導(dǎo)地位的疾病， 而近年發(fā)現(xiàn)， RA滑膜存在產(chǎn)生細(xì)胞因子IL17的T細(xì)胞和滑液中高水平表達(dá)的IL17， 以及CIA動物模型證實IL17促進(jìn)炎性細(xì)胞因子IL6、 TNFα的合成并參與RA的炎癥反應(yīng)和骨質(zhì)破壞， 提出以分泌IL17為主的
Th17細(xì)胞在RA發(fā)病中具有比Th1更重要的作用［5， 6］。本實驗檢測RA患者Th1、 Th2及Th17細(xì)胞亞群數(shù)量和比例， 試圖分析依那西普對其的影響， 進(jìn)一步闡述依那西普治療機制， 為臨床提供理論依據(jù)。
本研究通過胞內(nèi)細(xì)胞因子染色FCM檢測外周血中Th細(xì)胞數(shù)量和比例的變化， 發(fā)現(xiàn)治療前活動期RA患者Th1、 Th17細(xì)胞數(shù)量及平均熒光強度均高于健康對照組， 而Th2細(xì)胞無明顯差異， 導(dǎo)致Th1/Th2相對比例增高。進(jìn)一步通過ELISA分析體外培養(yǎng)PBMC上清中相應(yīng)細(xì)胞因子的水平， 證明IL17水平也高于健康對照組。研究結(jié)果提示， 在活動性RA患者外周血中， Th1尤其是Th17細(xì)胞亞群處于主導(dǎo)地位。與MTX組相比， 聯(lián)合治療組RA患者治療12周后， 其休息痛、 晨僵時間、 CRP及DAS28水平均明顯下降， 證實依那西普療效確實［7］。IFNγ+Th1細(xì)胞陽性率下降， Th2細(xì)胞無明顯改變， Th1/Th2比值相對下降， 提示依那西普可能通過影響Th1、Th2細(xì)胞亞群的平衡發(fā)揮作用， 推其可能是依那西普治療RA的機制之一。
聯(lián)合治療后Th17細(xì)胞陽性率及單個CD4+T細(xì)胞中IL17平均熒光強度明顯下降并接近健康對照， 且下降的幅度均高于MTX組。Th17細(xì)胞的量與RA患者CRP、 DAS28水平消長呈正相關(guān)， 提示Th17細(xì)胞可能參與RA發(fā)生發(fā)展。這些發(fā)現(xiàn)說明依那西普治療RA的明顯療效與Th17在RA中發(fā)揮重要作用有關(guān)。推測可能通過阻斷TNFα使前炎性因子釋放減少或反向信號抑制細(xì)胞增殖或通過caspase3途經(jīng)促進(jìn)T細(xì)胞的凋亡［8］， 從而下調(diào)分泌IL17的Th17細(xì)胞合成， 但二者在體內(nèi)相互作用的具體途徑有待于進(jìn)一步探索。
綜上所述， 本實驗表明活動期RA患者IL17+Th17細(xì)胞、 IFNγ+Th1細(xì)胞及Th1/Th2比值的增高， 可能參與RA發(fā)病機制; 依那西普治療后可明顯改善臨床癥狀和下調(diào)Th1和TH17細(xì)胞亞群， 可能通過調(diào)節(jié)Th細(xì)胞亞群治療RA。
參考文獻(xiàn)
［1］Maini RN， Taylor PC. Anticytokine therapy for rheumatoid arthritis［J］. Annu Rev Med， 2000， 51: 207-229.
［2］Choy EH， Panayi GS. Cytokine pathways and joint inflammation in rheumatoid arthritis［J］， New Engl J Med， 2001， 344(12): 907-916.
［3］Moreland LW， Baumgartner SW， Schiff MH， et al. Treatment of rheumatoid arthritis with a recombinant human tumor necrosis factor receptor (p75)Fc fusion protein［J］. New Engl J Med， 1997， 337(3): 141-147.
［4］Scott DL， Kingsley GH. Tumor necrosis factor inhibitors for rheumatoid arthritis［J］. New Engl J Med， 2006， 355(7): 704-712.
第5篇：一周學(xué)習(xí)計劃范文
周循環(huán)學(xué)習(xí)法如何實踐？
1、第一步：周日晚上制定周學(xué)習(xí)計劃。
根據(jù)自己總的學(xué)習(xí)進(jìn)度，制定一周的目標(biāo)。根據(jù)目標(biāo)計算周一到周六的學(xué)習(xí)量，制定可行的、但又必須完成的學(xué)習(xí)計劃。
2、第二步：周一至周六按計劃學(xué)習(xí)。
根據(jù)計劃學(xué)習(xí)量做好每日時間管理，每日結(jié)束前確認(rèn)一下計劃完成度，記錄學(xué)習(xí)日志；
3、第三步：周日徹底完成學(xué)習(xí)計劃。
把本周的學(xué)習(xí)完成情況總結(jié)一下。沒有完成的部分在周日徹底解決。一周計劃都完成了，就好好放松一下，然后做下周計劃。
一個相對完善的時間表，既要涵蓋每月的整體安排，又要包括每月以及每天、每
時的細(xì)節(jié)規(guī)劃。
復(fù)習(xí)計劃要留有余地，不要“滿打滿算”。比如，晚上7點到8點復(fù)習(xí)數(shù)學(xué)，8點開始復(fù)習(xí)英語，這樣安排就太緊了，當(dāng)中應(yīng)該有一個緩沖:7點到8點是數(shù)學(xué)時間，8點15分以后留給英語。這樣，數(shù)學(xué)復(fù)習(xí)完后喝口水，稍作休息，不要“連軸轉(zhuǎn)”。
而且，留有余地也可以確保上一段計劃的完成。還是以7點到8點復(fù)習(xí)數(shù)學(xué)為例，萬一時間到了，卻還差一道題沒做完怎么辦?留有15分鐘的余地，孩子就可以具體問題具體解決，而不致產(chǎn)生浮躁的情緒。
第6篇：一周學(xué)習(xí)計劃范文
有的同學(xué)在制定學(xué)習(xí)計劃時，只是寫上什么時間做什么，比如：6：00，起床；7：00，早讀；7：30-11：30，上課；12：00-1：30，午睡；1：30-4：30，上課；7：00-9：00，晚自習(xí)；10:00,熄燈。這樣得一份計劃太空洞，太無個性，任何人都可以適用。我們在制定計劃時，要從自己的實際情況出發(fā)，于自己的學(xué)習(xí)目標(biāo)相配合。自己各科學(xué)習(xí)的基礎(chǔ)不同，因而制定的各科學(xué)習(xí)目標(biāo)也不盡相同，那可比較薄弱，就應(yīng)該作為重點攻克的目標(biāo)，那么，在做計劃時就應(yīng)該分配較多的學(xué)習(xí)時間。因此，在制定計劃時，不能平均使用力量，要重點突出。
學(xué)習(xí)目標(biāo)一般可分為長期目標(biāo)、中期目標(biāo)和近期目標(biāo)，相應(yīng)地，學(xué)習(xí)計劃也應(yīng)分為學(xué)期計劃、月計劃和周計劃及每天學(xué)習(xí)計劃。學(xué)期計劃于學(xué)期目標(biāo)相對應(yīng)，訂出一個學(xué)期學(xué)習(xí)的重點及各自的計劃要點；月計劃要與單元目標(biāo)相對應(yīng)，訂出一周的學(xué)習(xí)重點及每天的計劃要點。
2、學(xué)習(xí)計劃要與教師的教學(xué)計劃相配合
在制定每天具體的學(xué)習(xí)計劃時，要與老師的教學(xué)計劃緊密配合。具體說就是要與每天課程表上計劃要上的課相配合，與每門課老師講授進(jìn)度相一致。例如，早晚自習(xí)時間學(xué)習(xí)計劃的安排，不但要于當(dāng)天課堂上老師講課的內(nèi)容相配合，而且還要與前一天和第二天老師的教學(xué)內(nèi)容掛鉤，不要拋開教師的教學(xué)進(jìn)度計劃，另搞一套。
3、學(xué)習(xí)計劃要有一定的靈活性
有的同學(xué)將每天除吃飯、睡覺以外的全部時間都安排了學(xué)習(xí)的內(nèi)容，排得滿滿的，連周六、周日都不安排一定休息的時間。這樣的計劃要執(zhí)行起來就相當(dāng)困難了。比如，星期天，同學(xué)一來玩，必然要陪同學(xué)一起玩，計劃就打亂了。因此，計劃要有一定的靈活性，不要把時間排的太滿、太死，要留出必要的休息和娛樂的時間，還應(yīng)留出一點激動時間應(yīng)付可能出現(xiàn)的緊急情況。
第7篇：一周學(xué)習(xí)計劃范文
在整個小學(xué)階段,每個學(xué)期都要開設(shè)幾門課程,每周、每日學(xué)習(xí)的內(nèi)容都不同,各主要學(xué)科都要布置課外練習(xí),如果沒有學(xué)習(xí)計劃,就會手忙腳亂,雜亂無章,影響學(xué)習(xí)效果。教師要讓小學(xué)生明白制定學(xué)習(xí)計劃的重要性,明確學(xué)習(xí)計劃的內(nèi)容,掌握制定學(xué)習(xí)計劃的方法。
學(xué)習(xí)計劃包括長期計劃和短期計劃兩種。長期計劃以一學(xué)期為宜,從總體上對各學(xué)科的學(xué)習(xí)作出全面的安排。短期計劃以一周為宜,對本周內(nèi)每天的學(xué)習(xí)內(nèi)容、學(xué)習(xí)目的、保障措施和作息時間作出詳細(xì)具體的安排。
學(xué)習(xí)計劃要具體、明確、切實可行,同時又要留有充分的余地,以保證計劃的靈活性和適應(yīng)性。在執(zhí)行中既要堅定不移,又要根據(jù)實際適當(dāng)調(diào)整,目的在于使學(xué)習(xí)計劃更加切合實際,更為有效地提高學(xué)習(xí)效果。
二、預(yù)習(xí)方法的輔導(dǎo)
預(yù)習(xí)也叫超前學(xué)習(xí),是指在教師上課之前,對所要學(xué)習(xí)的內(nèi)容提前進(jìn)行學(xué)習(xí)和理解的過程。預(yù)習(xí)既是有效的學(xué)習(xí)方法,也是良好的學(xué)習(xí)習(xí)慣。預(yù)習(xí)的方法是對第二天要講授的內(nèi)容認(rèn)真閱讀,仔細(xì)思考,把新的知識和以往學(xué)過的知識聯(lián)系起來,看看哪些懂了會了,哪些不懂不會,從而明確聽課的重點、難點和疑點,克服課堂學(xué)習(xí)過程中的被動性和盲目性,提高主動性和自覺性,以利于提高學(xué)習(xí)效果。
三、聽課方法的輔導(dǎo)
課堂是學(xué)校教育的中心環(huán)節(jié),是學(xué)生獲得科學(xué)文化知識的主要途徑。如果小學(xué)生不會聽課,聽不懂,學(xué)不會,就會增加課后復(fù)習(xí)的困難和壓力,造成不良循環(huán)。同時由于長期積累,可能導(dǎo)致厭學(xué)心理,既不利于提高學(xué)習(xí)效果,也不利于心理健康。為此,在課堂教學(xué)中,要引導(dǎo)小學(xué)生注意以下幾點。
(1)認(rèn)真聽。要求小學(xué)生聚精會神地聽講,充分理解教師講課的內(nèi)容及其表達(dá)方式的含義,如節(jié)奏的快慢、聲音的高低等。
(2)注意看。要求小學(xué)生全神貫注地注視教師板書的內(nèi)容,對教師用彩色粉筆標(biāo)記的部分、用電化教具突出演示的部分尤其要仔細(xì)觀察,認(rèn)真領(lǐng)會和重點記憶。
(3)多動腦。要引導(dǎo)小學(xué)生積極思考,要邊聽、邊看、邊思考,要與教師講課的進(jìn)程保持同步,要多問幾個為什么,要把新舊知識聯(lián)系起來思考,做到融會貫通,舉一反三。
(4)主動練。在課堂上要鼓勵小學(xué)生大膽發(fā)言,勤學(xué)多練,從而加深理解,提高聽課效果。
(5)做筆記。對教師講課中的要點、難點都要簡明扼要地寫在筆記上,以備課后復(fù)習(xí)。
(6)善歸納。對教師課堂講授的內(nèi)容,要抓住綱目,歸納要點,力求當(dāng)堂理解。
四、復(fù)習(xí)方法的輔導(dǎo)
復(fù)習(xí)是指對學(xué)過的知識重新學(xué)習(xí)的過程。復(fù)習(xí)包括課后復(fù)習(xí)和系統(tǒng)復(fù)習(xí)兩種。課后復(fù)習(xí)的主要目的在于理解和鞏固當(dāng)天學(xué)到的知識。系統(tǒng)復(fù)習(xí)的主要目的是對周、月、學(xué)期或?qū)W年學(xué)過的知識進(jìn)行全面深入的復(fù)習(xí),目的在于融會貫通,理解和掌握學(xué)科知識的體系。系統(tǒng)復(fù)習(xí)本質(zhì)上是對前段學(xué)習(xí)的知識進(jìn)行相對集中的再加工的過程。
課后復(fù)習(xí)的方法包括:
(1)回顧教師課堂講授的內(nèi)容及其過程,目的在于弄清哪些完全理解了,哪些沒有理解,使進(jìn)一步的復(fù)習(xí)具有鮮明的針對性和目的性;
(2)復(fù)習(xí)課本,目的在于深化;
(3)整理筆記,對課堂記得不完整或不準(zhǔn)確的地方加以補充和修正,使之更加系統(tǒng)、完整,便于復(fù)習(xí);
(4)對課本中不懂、不會的難點問題,查閱工具書或參考書,力求弄懂弄通,實在弄不明白的,問教師或與同學(xué)研究解決。
系統(tǒng)復(fù)習(xí)的方法也是多樣的。比如循環(huán)復(fù)習(xí)法,是指學(xué)過一個單元之后即及時復(fù)習(xí),然后再學(xué)下一單元,學(xué)完第二單元之后,再把這兩個單元綜合起來系統(tǒng)復(fù)習(xí),以此類推,循環(huán)至終。分配復(fù)習(xí)法,指學(xué)過的內(nèi)容及時復(fù)習(xí)之后在時間上每隔一定時期回過頭來再復(fù)習(xí),只是在時間間隔上逐漸拉長。比如上一單元講過的內(nèi)容及時復(fù)習(xí),一周后再復(fù)習(xí),兩周后再回頭簡略地復(fù)習(xí),一個月或一季度后再復(fù)習(xí)。事實表明,分配復(fù)習(xí)的效果優(yōu)于集中復(fù)習(xí)。當(dāng)然集中復(fù)習(xí)也有其優(yōu)勢,比如在期末總復(fù)習(xí)時,相對集中一段時間,對學(xué)習(xí)內(nèi)容中的重點、難點問題,重點突破,進(jìn)行系統(tǒng)化的復(fù)習(xí),也是十分重要的。
五、寫作業(yè)方法的輔導(dǎo)
寫作業(yè)是學(xué)生經(jīng)過獨立思考,自覺、有目的地分析問題、解決問題,將學(xué)得的知識運用于實際的智力活動過程。通過寫作業(yè)可以檢查學(xué)生學(xué)習(xí)的結(jié)果,加深對知識的理解和記憶,充分發(fā)揮學(xué)生的智慧和潛力,同時也有助于培養(yǎng)學(xué)生的思維能力,養(yǎng)成良好的學(xué)習(xí)態(tài)度和學(xué)習(xí)習(xí)慣,因而教師要引導(dǎo)小學(xué)生掌握寫作業(yè)的正確方法。
(1)先復(fù)習(xí)后寫作業(yè),即在認(rèn)真復(fù)習(xí)、充分理解的基礎(chǔ)上完成作業(yè)。
(2)仔細(xì)審題,即了解題意,明確習(xí)題的目的要求,弄清已知條件和未知條件及解決問題的關(guān)鍵所在,做到心中有數(shù)。
(3)認(rèn)真表述,即思路清晰,表述確切,書寫規(guī)范,答案準(zhǔn)確,干凈利落。
第8篇：一周學(xué)習(xí)計劃范文
1.提高自己在語文、數(shù)學(xué)等方面的學(xué)習(xí)潛力。
2.加強運動，提高身體素質(zhì)。
3.學(xué)會做簡單的家常菜。
二、暑假學(xué)習(xí)計劃具體方案：
1.針對自己的薄弱學(xué)科的學(xué)習(xí)態(tài)度、學(xué)習(xí)方法、學(xué)習(xí)目標(biāo)進(jìn)行反思，調(diào)整。
2.在家長的指導(dǎo)下，寫好自己切實可行的暑假生活、學(xué)習(xí)計劃。(安排好每一天復(fù)習(xí)進(jìn)度的明細(xì)資料)
3.把練習(xí)卷上做正確的題目進(jìn)行整理，確認(rèn)自己已經(jīng)掌握了哪些知識，具備了哪些運用潛力，樹立自己對本學(xué)科的信心。
4.把練習(xí)卷上做錯的題目進(jìn)行整理、抄錄，打開教科書，逐題進(jìn)行分析，找到錯誤的關(guān)鍵之處，進(jìn)行認(rèn)真的訂正后，再到教材上找到相關(guān)類型的題目，進(jìn)行練習(xí)、強化。(盡可能用自己的力量解決問題)
5.遇到無法解決的困難，按教科書的學(xué)習(xí)順序進(jìn)行梳理羅列。了解自己學(xué)習(xí)問題的共性薄弱點，然后能夠請老師一齊幫忙解決。
6.每周二次帶著學(xué)科的不懂之處和老師一齊分析、解決問題?；丶液筮\用老師解決問題的方法進(jìn)行自我強化練習(xí)，填補自己的學(xué)習(xí)漏洞。(這一點務(wù)必按照教材由淺入深的學(xué)習(xí)順序，切不可東一榔頭西一棒的無序)
7.每次完成習(xí)題的訂正，將錯題訂正的全過程，牢牢地記在腦海里(背出)，漸漸地構(gòu)成解題方法的量的積累。
8.看名著，中高考時，會出現(xiàn)名著中的經(jīng)典片段，看幾本必看的小說是中學(xué)生必需要做的事情之一，即可增長見識，又可陶冶情緒。
9.一星期打兩次球，游三次泳，增加運動，提高體能。(也能夠聽音樂等，做自己有興趣的事)
9.一星期跟著父母學(xué)做兩次家常菜，如炒茄子，蒸魚之類，再做一些力所能及的家務(wù)。
三、暑假計劃具體安排：
1.一星期學(xué)習(xí)五天，上午2.5小時，下午2.5小時。按一小時一節(jié)課安排好課表。
2.每一天的3點以后是運動或做家務(wù)的時間。(也能夠安排一些適宜的娛樂活動)
四、家長一齊參與孩子計劃：
1.設(shè)計好每一天的生活、學(xué)習(xí)評價表，對自己每一天的生活、學(xué)習(xí)作好評價。最新中學(xué)生暑假學(xué)習(xí)計劃最新中學(xué)生暑假學(xué)習(xí)計劃。
2.家長一周三次檢查學(xué)生的暑期生活、學(xué)習(xí)計劃執(zhí)行的狀況和進(jìn)度，及時幫忙解決執(zhí)行中的困難。
3.家長在幫忙學(xué)生執(zhí)行計劃時，也要尊重學(xué)生的要求，切不可急躁。要重視學(xué)生學(xué)習(xí)態(tài)度的調(diào)整和學(xué)習(xí)興趣的提高。
4.雙休日去看一些有益的展覽會，或參加一些有益的社會活動。
第9篇：一周學(xué)習(xí)計劃范文
20xx高一學(xué)生寒假學(xué)習(xí)計劃范文1末考試成績可以作為同學(xué)們制定學(xué)習(xí)計劃重難點復(fù)習(xí)安排的學(xué)習(xí)依據(jù)。學(xué)習(xí)的好壞最關(guān)鍵也最終取決于你的學(xué)習(xí)效率!”能學(xué)會有效率地做事，對你一生都有極大的幫助和提高。面對于中國的應(yīng)試教育，你在當(dāng)學(xué)生時，你必須學(xué)會兩樣：1.有效率地做事。2學(xué)會如何學(xué)習(xí)。
1、早晨合理安排30分鐘學(xué)習(xí)英語，聽網(wǎng)校的英語聽力，歷史和地理背誦。
2、利用2節(jié)課的時間分別完成2份寒假作業(yè)，要記住，獨立完成。
3、網(wǎng)校現(xiàn)已上傳一部分新卷子，集中一塊時間做一套。
4、下午和早晨一樣，利用2節(jié)課時間做2份寒假作業(yè)，但不可一下子貪多。要均衡、科學(xué)安排。
5、完成當(dāng)天寒假作業(yè)可以安排自由活動，(如果玩電腦游戲不可超過一小時)。
6、晚上是你自由活動的時間，但要看看新聞。積累實時材料，尤其是準(zhǔn)備學(xué)文科的學(xué)生。
7、在寒假期間有可能的話，每天讀一讀文學(xué)作品，寫一寫自己讀后的感想，字?jǐn)?shù)可多可少，但不能不寫。
8、寫寒假作業(yè)的過程中，發(fā)現(xiàn)自己本學(xué)期知識點學(xué)習(xí)不透徹的情況下可以通過網(wǎng)校來查漏補缺。
提高學(xué)習(xí)效率并非一朝一夕之事，需要長期的探索和積累，同學(xué)們必須充分結(jié)合自己的特點。影響學(xué)習(xí)效率的因素，有學(xué)習(xí)之內(nèi)的，但更多的因素在學(xué)習(xí)之外。高中生都有很好的自制力。首先要養(yǎng)成良好的學(xué)習(xí)習(xí)慣，合理利用時間，另外還要注意"專心、用心、恒心"等基本素質(zhì)的培養(yǎng)，對于自身的優(yōu)勢、缺陷等更要有深刻的認(rèn)識。
20xx高一學(xué)生寒假學(xué)習(xí)計劃范文2高一上學(xué)期期末考試已經(jīng)結(jié)束了，高一年級學(xué)生就要面臨高二的文理分科。高一寒假學(xué)習(xí)計劃對自身做個清晰、理性的分析，確定自身優(yōu)勢，為學(xué)文、學(xué)理尋找理由就顯得頗為重要。大概方向確定后，就要明確自己所選擇的方向中，哪些學(xué)科要參加高考，哪些只需通過會考，從現(xiàn)在起就可以相應(yīng)地制定出針對不同科目的不同“用力”方法，將自己高中的時間、精力做到合理分配。 依常規(guī)來看，多數(shù)學(xué)生會選擇學(xué)理——未來的升學(xué)、就業(yè)面相對更寬。學(xué)習(xí)理科，數(shù)、理、化就全部是考試科目，而數(shù)理化的難點都在高一。因此，高一寒假必須做的就是把上學(xué)期沒有學(xué)會的內(nèi)容學(xué)明白。有一些知識的掌握是為了以后更好應(yīng)對相關(guān)知識點，如果高一就出現(xiàn)漏洞，未來所有相關(guān)知識也都會關(guān)聯(lián)出現(xiàn)問題。
值得注意的是，高一的學(xué)習(xí)量很重，很多學(xué)生往往在第一學(xué)期還不太會調(diào)控。因此，高一學(xué)生第一學(xué)期的功課或多或少都會有落下的地方，這就需要利用寒假進(jìn)行調(diào)整、提高、填補工作，甚至可以說，寒假能否利用好，對未來三年的狀態(tài)會產(chǎn)生重要的影響。
高一寒假學(xué)習(xí)計劃時間安排：
7：00 起床
7：20 洗涑完畢 之后跑步：繞樓2樓(7：20----8：00)
8：05 吃飯
8：20---8：50 背單詞
8：55---9：25 背課文
9：35---10：35 數(shù)學(xué)
10：45---11：45 英語
11：45---12：00 課外書
12：00---13：00 午休
13：10---14：10 化學(xué)
14：20---15：10 物理
15：20—16：20 語文
16：20---吃晚飯前 free
吃完飯后—21：00 六科任選
21;00—22：00 電視，電腦，課外書
20xx高一學(xué)生寒假學(xué)習(xí)計劃范文3周一至周四 ：
1、每天在小筆記本上記下10~15個單詞(包括新舊單詞)，利用自己的課余時間將其背熟，一定要掌握，而且經(jīng)常拿出來復(fù)習(xí)。
2、晚飯前，先打開平臺，在“知識強化”欄目中找到當(dāng)天課堂所上過的內(nèi)容，認(rèn)真復(fù)習(xí)，該記住的要記住。
3、晚飯后，稍作休息，完成老師布置的作業(yè)。(注意：把回家作業(yè)當(dāng)考試做)
4、某一學(xué)科的一單元內(nèi)容結(jié)束，應(yīng)及時進(jìn)行總復(fù)習(xí)，然后完成 “在線測試”里的題目。完成的不夠好的，復(fù)習(xí)一遍后重做，有做錯的題目及時掌握。
5、預(yù)習(xí)第二天要上課的內(nèi)容，認(rèn)真做好記錄，把不懂的問題帶到課堂上認(rèn)真聽老師講解。
6、聽“同步聽力”和“在線聽力”10~15分鐘，培養(yǎng)一種語感。
周五：
1、同做“周一至周四”中的1、2、3點。
2、將學(xué)習(xí)過程中留下的問題在“名師答疑”中提問。
3、有空時可以先放松一下自己，聽點輕音樂、看些課外的書(通過平臺或自己買的都可以)。
周六：
1、早上起來先做些運動，鍛煉身體，然后朗讀英語或語文的文章，把一些該記的內(nèi)容記住。
2、繼續(xù)完成老師布置的作業(yè)。
3、下午可打開“名師面授”，選擇一些自己薄弱的知識點聽幾遍，適當(dāng)?shù)囟嘧鲆恍┰诰€測試。
4、把一周所學(xué)的復(fù)習(xí)一遍，通過“在線測試”欄目來檢查自己是否掌握。如果基礎(chǔ)不好的科目，學(xué)習(xí)“知識強化”。
5、針對自己的學(xué)科狀況針對性地選擇“名師答疑”的“精華區(qū)”中的問題，把它當(dāng)作自己的問題，先做一遍，再看老師的解答。
周日：
除做周六的內(nèi)容外，早晨或下午到分校進(jìn)行學(xué)習(xí)方法交流、測試、鞏固，晚上預(yù)習(xí)下周一的課程內(nèi)容。
