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1.1特殊的教學(xué)對象
1)目前多數(shù)學(xué)生是獨生子女,自我為中心的意識很強,他們渴望成功卻又缺乏吃苦耐勞的精神,心里想學(xué)習(xí)卻又不具備自我約束的能力;2)基礎(chǔ)課程的上課方式多為同專業(yè)、甚至是不同專業(yè)的多個班級的合班課,學(xué)生人數(shù)較多,化學(xué)基礎(chǔ)知識層次不齊,任課教師在課堂上很難做到照顧每一個學(xué)生的學(xué)習(xí)情況,再加上學(xué)時數(shù)的壓縮,學(xué)生的學(xué)習(xí)效果直接面臨一些困惑和難題:聽課效果不好、抄作業(yè)現(xiàn)象常有發(fā)生、考試結(jié)果不盡如人意、無法與后續(xù)專業(yè)課程銜接等等;3)非化學(xué)專業(yè)學(xué)生對化學(xué)基礎(chǔ)課的學(xué)習(xí)較被動,創(chuàng)新的主動性與積極性不強[3].以某高校園藝專業(yè)為例,在大一學(xué)年的第二學(xué)期,“分析化學(xué)”課程往往與英語及一些專業(yè)課程同時開課,相比而言,分析化學(xué)知識零碎,各類公式多,且抽象、難以理解,學(xué)生學(xué)習(xí)起來有枯燥無味之感,普遍反應(yīng)記不住,因而缺乏興趣,積極主動性不高,甚至出現(xiàn)畏懼心理;同時“重專業(yè)知識,輕基礎(chǔ)知識”的現(xiàn)象也普遍存在.因此如何激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)基礎(chǔ)課的興趣與主動性,最大程度地發(fā)揮他們的潛能,是擺在大學(xué)基礎(chǔ)課教師面前的一個新課題.
1.2繁雜的課程內(nèi)容
“分析化學(xué)”學(xué)科在整個學(xué)習(xí)階段起著承上啟下的作用.它由一系列分析方法所構(gòu)成,主要包括化學(xué)分析法和儀器分析法,經(jīng)典的化學(xué)分析法又可分為重量分析法和滴定分析法;儀器分析法主要有光學(xué)分析法、電化學(xué)分析法、色譜分析法等等,其中每一種分析方法因響應(yīng)信號機制不同還可進一步細分.不同的分析方法具有不同的原理、條件、儀器、特點和適用范圍等,既相互聯(lián)系又各自成體系,涉及的知識很廣,并且還在以日新月異的速度向前發(fā)展,各種新理論、新方法和新技術(shù)層出不窮.因此在這樣的大背景下,如何在“分析化學(xué)”學(xué)科的教學(xué)中營造一種活躍思維、主動學(xué)習(xí)、充分體現(xiàn)學(xué)生主體地位的氛圍,真正地提高課堂的教學(xué)效率,是每一位承擔(dān)這門課程的教師值得思考和探討的問題.
1.3機械的實驗教學(xué)
在實驗設(shè)計方面,簡單的驗證性實驗多,綜合設(shè)計的研究性實驗較少[4],實驗內(nèi)容不能及時反映分析化學(xué)的發(fā)展現(xiàn)狀與相關(guān)學(xué)科間的滲透交叉,并且多數(shù)實驗都是在教師的“精心安排”下進行“照方抓藥”,學(xué)生只需按部就班地跟著教材走就能完成實驗,獨立思考的機會不多,嚴重缺乏在方案設(shè)計、樣品前處理及數(shù)據(jù)處理等方面的創(chuàng)造性鍛煉.在實驗授課方面,多數(shù)實驗課程仍采用傳統(tǒng)的“教師先講解原理———學(xué)生接受,然后動手實驗”的模式.教師“傾囊相授”,希望將所有的知識點都傳授于學(xué)生,但與教師的教學(xué)熱情相反,學(xué)生的積極性卻往往不高,無動于衷,對實驗內(nèi)容的理解與設(shè)計基本依賴于教師的講解,缺乏對未知知識的探求精神以及獨立進行實踐操作的能力.在實驗操作方面,對于移液、稱量等基本操作,雖然教師已詳細講解并演示,學(xué)生操作仍不規(guī)范,如在減量法稱量時直接用手接觸稱量瓶,未用紙條和紙片;滴定時不注意觀察標準溶液滴落點周圍的顏色變化,卻不時地抬頭觀察滴定管的讀數(shù);未進行半滴操作等.還有一些儀器較為精密、貴重,數(shù)量偏少,不能保證每個學(xué)生都能掌握所有實驗細節(jié),再加上操作步驟較多,一些學(xué)生怕操作不當?shù)貌坏嚼硐氲臄?shù)據(jù),只簡單做一些輔助的配合工作,甚至站在旁邊“冷眼觀看”,基本上是學(xué)無所獲.綜上所述,不難看出,目前“分析化學(xué)”實驗教學(xué)相對比較機械.所以,如何建立新型的分析化學(xué)實驗課程體系,采用新穎的教學(xué)方法,賦予學(xué)生更廣闊、更自主的學(xué)習(xí)空間,使學(xué)生在知識和能力上獲得雙豐收,是一個巨大的挑戰(zhàn).
1.4單一的評價方式
多年來,“分析化學(xué)”課程的考核方式為期末閉卷考試這種單一的考核形式,課程最終成績?yōu)槠谀┛荚嚨木砻娉煽儭嶒灣煽兒推綍r成績加權(quán)后的總評成績.成績高的學(xué)生可能是“臨時抱佛腳”即考前幾天突擊復(fù)習(xí)的結(jié)果.這種考核方式雖然能較好地考察學(xué)生對“分析化學(xué)”課程基礎(chǔ)知識的儲備情況,卻不能很好地反映出他們綜合分析問題、解決問題的能力.因此,要使學(xué)生的創(chuàng)新能力、綜合運用知識能力得到真正的提高,必須要建立一套科學(xué)的評價方式.
2“分析化學(xué)”課程教學(xué)改革的主要措施
2.1激發(fā)學(xué)生興趣
美國教育家杜威指出:教育不是一件“告訴”和“被告訴”的事情,而是一個主動建設(shè)的過程.因此,在教學(xué)過程中應(yīng)充分調(diào)動學(xué)生的積極性,激發(fā)他們的學(xué)習(xí)興趣.為此,可采取在傳統(tǒng)授課方式的基礎(chǔ)上,增加圖片、動畫效果、視頻等多樣化的多媒體內(nèi)容幫助學(xué)生理解晦澀難懂的理論內(nèi)容,并注重與相關(guān)學(xué)科之間的銜接與聯(lián)系,適時地把一些化學(xué)史、應(yīng)用實例或社會熱點問題引入課堂,使學(xué)生認識到理論源于實踐,又能指導(dǎo)實踐.對于食品類專業(yè)的學(xué)生,在講解色譜分析法時,可介紹2008年我國發(fā)生的非法添加三聚氰胺的毒奶粉事件,進而向?qū)W生提出可用高效液相色譜法測定飼料和植物蛋白粉中的三聚氰胺,此外還可介紹引起社會廣泛關(guān)注的二噁英、蘇丹紅、瘦肉精等食品安全事件及奧運會期間興奮劑的檢測;針對生物學(xué)專業(yè)的學(xué)生,在介紹緒論“分析化學(xué)”課程的重要性及應(yīng)用性時,如果只是泛泛地說分析化學(xué)在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著非常重要的作用,學(xué)生其實并沒有深刻的體會,這時可列舉在生物大分子研究領(lǐng)域做出重大貢獻而獲得2002年諾貝爾化學(xué)獎的三位分析化學(xué)家約翰•芬恩、田中耕一和庫爾特•維特里希,緊接著介紹分析化學(xué)在他們熟知的領(lǐng)域,如基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)中發(fā)揮的重要作用.這種講授方法不但會使學(xué)生進一步認識到“分析化學(xué)”課程在其所學(xué)專業(yè)的重要地位和作用,而且還能開拓他們的視野,最大程度地激發(fā)他們的求知欲和創(chuàng)新性,進而參與到分析化學(xué)的科研工作中來.另一方面,還應(yīng)在現(xiàn)代教學(xué)理論的指導(dǎo)下,以“教師為主導(dǎo)、學(xué)生為主體,并凸顯主體”為研究突破口,發(fā)揮學(xué)生主觀能動性,把教師的“教”和學(xué)生的“學(xué)”統(tǒng)一起來,探索以學(xué)生為主體的教學(xué)模式,改變現(xiàn)在普遍存在的學(xué)生學(xué)得枯燥,教師教得艱難,大家都感到無所適從的局面,以達到在教學(xué)過程中,學(xué)生真正成為學(xué)習(xí)的主人,“快樂學(xué)習(xí)”、“學(xué)會學(xué)習(xí)”,最終達到提高人才培養(yǎng)質(zhì)量的目標.例如,在教學(xué)實踐中可采取學(xué)生參與的方式,先由教師提出分析任務(wù),如水環(huán)境中As含量的測定、重要藥物溶菌酶的測定[5]等,學(xué)生依據(jù)興趣自由分組,先完成綜述小論文,再由教師指導(dǎo)討論各種分析方法的優(yōu)缺點.這樣,學(xué)生先是對這些分析任務(wù)產(chǎn)生濃厚興趣,水環(huán)境中As的含量究竟是多少?國家標準允許的含量是多少?經(jīng)常飲用超標水,會對當?shù)厝?、畜產(chǎn)生怎樣的不良后果?在此基礎(chǔ)上,深刻認識到準確測定的重要性.通過查閱文獻資料,了解到As的測定方法有滴定分析法、原子吸收光度法、電分析方法及紫外-可見吸收光譜法等,最后根據(jù)環(huán)境水樣中As的含量范圍及實驗室現(xiàn)有的儀器資源,確定選用紫外-可見分光光度法.在此過程中,學(xué)生可將課堂中學(xué)到的分析方法的評價指標及各種分析方法的原理用于解決實際問題,逐步形成為達到分析目的而應(yīng)采取的分析化學(xué)專業(yè)思維的方式和方法.
2.2優(yōu)化教學(xué)內(nèi)容
“分析化學(xué)”課程教材難度大、內(nèi)容多、學(xué)時少,因此,教學(xué)改革首先要以優(yōu)化教學(xué)內(nèi)容為核心,重點突出專業(yè)性和實用性:
1)對課程內(nèi)容進一步優(yōu)化和精簡,壓縮同其他基礎(chǔ)課程中相同或相近的內(nèi)容,如氫離子濃度的計算等,這些在普通化學(xué)部分章節(jié)已經(jīng)提到,可略講甚至不講,讓學(xué)生自己去復(fù)習(xí).
2)對于相似的知識點,應(yīng)培養(yǎng)學(xué)生歸納、比較和觸類旁通的能力.在滴定分析法中,可精講酸堿滴定法,包括滴定分析法的共性(基本原理、滴定曲線、突躍范圍及影響因素、指示劑、終點誤差和應(yīng)用等),然后通過對比和歸納手段,講解配位滴定法和氧化還原滴定法;在講授紫外-可見分光光度法時,可以給學(xué)生列舉蛋白質(zhì)含量測定的光度方法,如考馬斯亮藍染色法、雙縮脲法(Biuret法),并將這些方法和之前學(xué)習(xí)的凱式定氮法相比較,使學(xué)生了解各種方法的優(yōu)缺點.通過這樣前后知識的貫通融合,達到了以點帶面、以小見大、觸類旁通的作用,不但大大節(jié)約了課時,也培養(yǎng)了學(xué)生自主學(xué)習(xí)的能力.
3)對于儀器分析內(nèi)容,應(yīng)把握教學(xué)重點,理清知識主線,突出方法間的聯(lián)系與區(qū)別[6].儀器分析的主要內(nèi)容實際上就是響應(yīng)信號與被測物性質(zhì)(與結(jié)構(gòu)有關(guān))、濃度之間的關(guān)系,教師應(yīng)讓學(xué)生徹底理解并掌握“利用峰位置可進行定性分析,峰高或峰面積可進行定量分析”這一基本規(guī)律.在三大類分析中(包括光譜分析、電分析和色譜分析),利用各自的峰位置可推斷被測物的結(jié)構(gòu)信息,而峰面積或峰高則可以反映被測物的含量或濃度信息.這種講授方法會使學(xué)生對儀器分析知識有一整體性的認識,在此基礎(chǔ)上再對不同方法進行比較.這樣不僅可以收到較好的教學(xué)效果,還能幫助學(xué)生掌握學(xué)習(xí)知識的方法,最終達到雙贏的目的.
4)將學(xué)科的前沿發(fā)展動態(tài)引入課堂教學(xué).徐光憲院士指出,應(yīng)把21世紀分析化學(xué)生龍活虎、立體多維的形象展示給學(xué)生,引起學(xué)生對該課程的極大興趣.因此在實際教學(xué)中,應(yīng)結(jié)合課程進度,適度地把學(xué)科最前沿的知識和最新的研究動態(tài)介紹給學(xué)生,注重知識面的補充和延伸.例如,在講解分光光度法時,可引進現(xiàn)今發(fā)展最為迅速的碳納米材料.碳材料的基本組成元素雖然相同,但由于這些元素的空間排布不同繼而可形成不同的形態(tài),有零維的碳點、一維的碳納米管、二維的石墨烯等,不同的碳材料在紫外-可見光區(qū)域有不同的吸收峰,根據(jù)吸收峰(尤其是最大吸收波長)的位置可進行定性分析,區(qū)分不同的碳材料,根據(jù)吸光度的大小可進行定量分析,確定碳材料的濃度或含量.同時可利用透射電鏡、原子力顯微鏡等進一步確定碳材料內(nèi)部的精確結(jié)構(gòu),用共聚焦顯微成像儀可觀察其在細胞內(nèi)的成像情況,為將其進一步應(yīng)用在重大疾病的診斷和治療方面提供理論依據(jù).另外,對于現(xiàn)代分析化學(xué)中單細胞實時分析、單分子檢測等前沿技術(shù),可以專題的形式介紹給學(xué)生.最后,還可以讓學(xué)生通過圖書館的網(wǎng)絡(luò)資源(如中文的CNKI和英文的WebofScience)追蹤相關(guān)領(lǐng)域的最新動態(tài),這樣不僅為課堂注入了新鮮血液,而且能激發(fā)學(xué)生探索科學(xué)的興趣,有利于創(chuàng)新能力的培養(yǎng).
2.3強化實驗環(huán)節(jié)
“分析化學(xué)”是一門以實驗為基礎(chǔ)的學(xué)科,實驗教學(xué)起著課堂教學(xué)不可替代的特殊作用,它不僅能使學(xué)生驗證和鞏固理論知識,而且能培養(yǎng)學(xué)生觀察、分析和解決問題的能力,養(yǎng)成嚴謹、細致、實事求是的科學(xué)態(tài)度.因此,如何使學(xué)生的實驗效率最大化,用“心”體會實驗內(nèi)容,一直是“分析化學(xué)”教育工作者長期以來不斷追求的目標.最近幾年,有關(guān)實驗教學(xué)的改革如火如荼,筆者所在的學(xué)校也積極響應(yīng)號召,針對“分析化學(xué)”實驗教學(xué)進行改革.
1)在實驗內(nèi)容的安排上,保留具有代表性的經(jīng)典實驗,通過這些實驗的練習(xí),使學(xué)生規(guī)范地掌握基礎(chǔ)實驗的分析方法和操作要領(lǐng).除此之外,增加一些與實際生活有緊密聯(lián)系的綜合設(shè)計性實驗,內(nèi)容的選擇注重各專業(yè)的通用性,如食醋中總酸度的測定、日用衛(wèi)生紙中熒光增白劑的檢測,并讓學(xué)生自行提供樣品.這些實驗很好地鍛煉了學(xué)生在文獻檢索、實驗方案設(shè)計、樣品前處理、儀器操作及用計算機軟件處理數(shù)據(jù)等方面的能力,大大地提高了學(xué)生的參與感和成就感,全方位地培養(yǎng)學(xué)生的化學(xué)素養(yǎng).
2)在實驗講授和學(xué)生的操作訓(xùn)練方面,摒棄教師“一切包辦”的理念和“老師講,學(xué)生聽”的單一模式.對于分析天平、滴定管等常規(guī)儀器,在課前預(yù)習(xí)的基礎(chǔ)上,教師對每一項基本操作技能(包括操作規(guī)范、操作要點和技巧、注意事項及影響實驗成敗的關(guān)鍵因素等)邊講邊示范,讓學(xué)生先在感官上對基本操作技能有初步的印象,然后再通過大量的獨立操作練習(xí)得以強化;對于一些涉及到精密貴重儀器的實驗內(nèi)容,可采用“虛擬實驗”的方式,通過圖片、視頻等多媒體仿真動畫教學(xué),將儀器工作原理和實驗過程通過三維虛擬動畫的模式直觀展現(xiàn)出來,教師要適時地對操作中可能出現(xiàn)的問題進行講解與引導(dǎo),盡可能提示操作可能出錯的地方以及出錯所導(dǎo)致的不良結(jié)果,增強學(xué)生的感性認識,減少實驗中由于操作不當?shù)仍斐傻牟槐匾膿p失和浪費.
2.4科學(xué)評價學(xué)生成績
要培養(yǎng)適應(yīng)社會發(fā)展需要的多元化創(chuàng)新人才,必須要有科學(xué)的評價方式.基于此,要改變以“考試分數(shù)論英雄”的做法,強化對學(xué)習(xí)過程、學(xué)習(xí)能力的評價,構(gòu)建多元評價體系.筆者在授課過程中均采用結(jié)構(gòu)評分來組成課程的總成績,即總成績=平時成績(10%)+實驗成績(30%)+期末考試成績(60%)綜合考察學(xué)生學(xué)習(xí)情況,其中平時成績改變以往所用的點名或簽到次數(shù)計算的方式,而是通過對學(xué)生在課前預(yù)習(xí)、隨堂練習(xí)、課堂討論及課后復(fù)習(xí)的總體表現(xiàn)來確定;實驗成績采用綜合評定標準,包括預(yù)習(xí)報告、實驗操作、實驗報告、紀律清潔四部分,學(xué)生編造實驗數(shù)據(jù)及結(jié)果的不良風(fēng)氣得以糾正.實踐證明,這種成績評定方式有利于調(diào)動學(xué)生學(xué)習(xí)的主動性,激發(fā)其學(xué)習(xí)熱情,真實地反映了學(xué)生對“分析化學(xué)”課程“三基”知識的掌握情況,最終達到提高教學(xué)質(zhì)量的目的.
3結(jié)語
堿基的組成和排列順序不同是DNA核苷酸之間存在差別的主要原因,因此,研究DNA分子中堿基的電化學(xué)性質(zhì)也具有十分重要的意義。本文僅對DNA鏈中的堿基在單壁碳納米管復(fù)合聚吖啶橙(SWNTs/POAO)電極上的電化學(xué)行為進行研究。
(一)堿基對的氧化現(xiàn)象SWNTs/POAO電極既具有較大的比表面積大的π電子體系及大量的活性電位特點,又具有導(dǎo)電聚合物地性能。因此,在SWNTs/POAO電極上,嘌呤堿基和嘧啶堿基的氧化電位都隨著其結(jié)構(gòu)環(huán)系上的取代基增多而產(chǎn)生反向移動,且氧化的峰電流會隨著濃度增加而出現(xiàn)線性增長。由于嘌呤堿基是由嘧啶和咪唑酬和而成的環(huán)系,多π芳雜環(huán)系和缺π芳雜環(huán)系都在其結(jié)構(gòu)中存在,所以鳥嘌呤(GUA)和腺嘌呤(ADE)容易發(fā)生氧化,且氧化電流較大;而嘧啶堿基結(jié)構(gòu)中只有缺π芳雜環(huán),致使其比嘌呤堿基的氧化電位較正,氧化電流較小。由上所述,可以得出嘧啶堿基電氧化反應(yīng)的靈敏度比嘌呤堿基低的結(jié)論。
(二)嘌呤堿基氧化過程分析以ADE和GUA為研究對象,分別分析研究了其在不同電極的反應(yīng)(見圖2)。在圖中可以發(fā)現(xiàn),只有嘌呤堿基對的氧化電流峰,而沒有還原峰,由此可以得知嘌呤堿基的電極反應(yīng)是不可逆的過程。在圖中還可以看出,ADE和GUA的氧化峰電流在GCE(玻碳電極)和POAO(聚吖啶橙電極)上基本相同且都較?。欢赟WNTs修屎電極上比在GCE上有明顯增加,這表明碳單壁納米管增加了GCE電極的有效面積,且其自身帶有的—COOH、—OH基團給電極提供了更多的反應(yīng)點,催化了GUA、ADE的反應(yīng),峰電流明顯增大。而在SWNTs/POAO電極上,嘌呤堿基的氧化電流增加更加明顯。
二、DNA堿基與金屬離子的相互作用
脫氧核糖核酸與金屬離子的相互作用,主要有其對金屬離子的吸附作用以及核糖核酸上特點結(jié)合點與金屬離子發(fā)生配位作用。本文僅對DNA嘧啶堿基與汞、銀離子的相互作用進行分析。
(一)汞離子與胸腺嘧啶的相互作用汞離子與DNA的相互作用在1952年時就已經(jīng)被Katz發(fā)現(xiàn),但其觀點是汞離子與DNA鏈中的磷酸骨架發(fā)生了互相作用,到后來Thomas用紫外光譜證實汞離子是與DNA中的堿基發(fā)生作用。在這個發(fā)現(xiàn)之后,Katz于1963年又提出了T-Hg-T的假設(shè),這個假設(shè)內(nèi)容是汞離子與T堿基是以1:2的比例形成新配合物。近年來,日本人Ono等人通過溶解曲線、質(zhì)譜以及核磁共振等手段進一步證實了T-Hg-T的假設(shè)[2]。由于有毒性是汞離子的具備的特點,利用DNA能夠與汞離子結(jié)合發(fā)生反應(yīng)的特性,可以來進行環(huán)境汞離子含量的檢測。
(二)核糖核酸與胞嘧啶的相互作用銀離子與胞嘧啶的相互作用是在2002年才由Tanaka小組開始研究,他們通過研究銀離子與人工合成DNA雙鏈(含有嘧啶(Pyridine)修飾堿基形成的P-P錯配)發(fā)生特異性結(jié)合的現(xiàn)象,證實了銀離子與嘧啶反應(yīng)能夠形成穩(wěn)定的P-Ag-P結(jié)構(gòu)。2008年,One小組提出了銀離子可以與胞嘧啶形成穩(wěn)定的C-Ag-C結(jié)構(gòu),并通過變溫紫外的研究手段證實了銀離子具有能夠使錯配的DNA雙鏈更加穩(wěn)定。根據(jù)銀離子的這種特性,可以將其設(shè)計成分子信標,應(yīng)用在醫(yī)學(xué)診斷、生物工程研究等各個領(lǐng)域。
三、結(jié)語
BrukerAV-300,AV-500型核磁共振光譜儀;X4型數(shù)字顯示顯微熔點測定儀(溫度未校正);Agilent1100LC/MSDSL;LABCONCO冷凍干燥儀;JASCOP-1020旋光測定儀半制備型高效液相色譜儀Waters600型;檢測器Waters2487紫外雙波長檢測器;Agilent-1100高效液相色譜儀;柱色譜材料為硅膠(200-300目)、RP-C18(YMC;12nm)及SephadexLH-20(AmershamBiosciences);柱色譜試劑均為分析純,高效液相色譜試劑均為色譜純。
白芷根于200403采自江蘇省鹽城市洋馬鎮(zhèn),經(jīng)江蘇省中國科學(xué)院植物研究所袁昌齊研究員鑒定,憑證標本現(xiàn)存放于江蘇省中國科學(xué)院植物研究所標本館內(nèi)。
2提取與分離
白芷根(38kg)用95%的乙醇提取3次,合并提取液,減壓濃縮至無醇味。提取液依次用石油醚、醋酸乙酯萃取,剩余部分為水部分。將水部分上樣于D101大孔樹脂柱,水-乙醇梯度洗脫,分為6個部分。其中50%洗脫部分分別進行硅膠柱層析,氯仿-甲醇(10∶1~7∶3)梯度洗脫,各流分采用薄層或高效液相檢識,合并相類似組分,反復(fù)反相柱層析分離,凝膠純化,得到6個化合物。
3結(jié)構(gòu)鑒定
3.1化合物1
白色無定形粉末(凍干),mp170~172℃,[α]21.7D=-52.40(c=0.065甲醇:水=40:60),紫外燈365,254nm下均顯示藍綠色熒光。ESI-MSm/z:509[M+Na]+,示其分子量為486,結(jié)合1H-NMR,13C-NMR譜數(shù)據(jù)推斷分子式為C21H26O13?;衔锏?H-NMR,13C-NMR,HMQC及HMBC譜數(shù)據(jù)詳見表1。綜合各譜數(shù)據(jù)及與文獻[1]對照鑒定化合物為7-O-β-D-Apiofuranosyl-(16)-β-D-Glucopyranosyl-Scopoletin(xeroboside)。表1化合物1的1H-NMR,13C-NMR,HMQC及HMBC譜數(shù)據(jù)(略)
3.2化合物2
白色無定形粉末(凍干),[α]21.7D=-55.20(c=0.065甲醇∶水=40∶60),紫外燈365nm及254nm下均顯示藍綠色熒光,ESI-MSm/z:495[M+Na]+,示其分子量為472,結(jié)合1H-NMR,13C-NMR譜數(shù)據(jù)推斷分子式為C20H24O13。化合物的1H-NMR,13C-NMR,HMQC及HMBC譜數(shù)據(jù)見表2。綜合以上各譜數(shù)據(jù)及與已知文獻[2]對照鑒定化合物為aesculetin-6-O-β-D-apiofuranosyl-(16)-O-β-D-glucopyranoside。
3.3化合物3白色無定形粉末(氯仿-甲醇),mp207℃,[α]21.7D=+47.75(c=0.07甲醇∶水=40∶60),紫外燈365,254nm下均顯示藍色熒光。ESI-MSm/z∶407[M+Na]+示其分子量為384,結(jié)合1H-NMR,13C-NMR譜數(shù)據(jù)推斷分子式為C17H20O10。化合物的1H-NMR,13C-NMR,COSY,HMQC及HMBC譜數(shù)據(jù)詳見表3。綜合各譜數(shù)據(jù)[3]鑒定化合物為tomenin。表2化合物2的1H-NMR,13C-NMR,COSY,HMQC及HMBC譜數(shù)據(jù)(略)表3化合物3的1H-NMR,13C-NMR,COSY,HMQC及HMBC譜數(shù)據(jù)(略)
3.4化合物4
白色無定形粉末(凍干),mp140~141℃,[α]19.4d=-52.30(c=0.06甲醇∶水=40∶60),紫外燈365及254nm下均顯示藍色熒光,結(jié)合1H-NMR,13C-NMR譜數(shù)據(jù)推斷分子式為C16H18O9。1H-NMR(Pyridine-d5500MHz)δ:6.27(1H,d,J=9.5Hz,3-H),7.56(1H,d,J=9.5Hz,4-H),7.62(1H,s,5-H),6.90(1H,s,8-H),3.70(3H,s,OCH3),5.65(1H,d,J=7.1Hz,1-H-Glc)。綜合以上數(shù)據(jù)及與已知文獻[4]對照鑒定化合物為isoscopolin。
3.5化合物5
白色無定形粉末(凍干),[α]21.7D=-55.20(c=0.065甲醇∶水=40∶60),ESI-MSm/z:455[M+Na]+,示其分子量為432,結(jié)合1H-NMR,13C-NMR譜數(shù)據(jù)推斷分子式為C19H28O11。1H-NMR(Pyridine-d5500MHz)δ:7.07(2H,d,J=8.5Hz,3-H和5-H),7.19(2H,d,J=8.6Hz,2-H和6-H),2.96(2H,t,J=7.4Hz,β-H),4.34(1H,dd,J=7.5,11.2Hz,3''''a-α),3.88(1H,dd,J=7.4,11.2Hz,3''''a-α),4.82(1H,d,J=7.1Hz,1-H-Glc),5.75(1H,d,J=2.6Hz,1-H-Api)。13C-NMR(Pyridine-d5125MHz)δ:129.53(C-1),130.50(C-2),116.13(C-3),157.23(C-4),116.13(C-5),130.50(C-6),71.12(C-α),35.88(C-β),104.58(C-1-Glc),74.95(C-2-Glc),78.45(C-3-Glc),71.12(C-4-Glc),77.08(C-5-Glc),68.87(C-6-Glc),111.07(C-1-Api),77.74(C-2-Api),80.37(C-3-Api),75.00(C-4-Api),65.48(C-5-Api)。綜合以上數(shù)據(jù)及與文獻[5]對照鑒定化合物為OsmanthusideH。
4結(jié)果與討論
前人從茜草科植物山石榴Xeromphisspinosa[1]以及Xeromphisobovata[6]中分到過此化合物1,故此次為首次從傘形科中分離得到。但化合物的熔點有文獻[1]報道為238~234℃,有文獻[2]報道為192~197℃,而本次實驗測得的熔點為170~172℃,具體原因有待進一步確定。
前人從忍冬科植物L(fēng)oniceragracilipes[3]中分得化合物2,但是只報道了1H-NMR,13C-NMR譜數(shù)據(jù),且C-6和C-7的歸屬顛倒了。本文通過對其進行HSQC,HMBC等二維譜的研究,糾正了前人的錯誤,豐富了該化合物的波譜數(shù)據(jù)。
日本學(xué)者Hasegawa[3]最早從薔薇科植物Prunustomentosa中分離得到化合物3,但沒有報道核磁數(shù)據(jù),以后未見此化合物的報道。本文完善了該化合物的核磁數(shù)據(jù),并且用二維譜進行了全歸屬,豐富了該化合物的波譜數(shù)據(jù),并首次報道了此化合物的旋光值。
化合物6在自然界植物中分布廣泛,但在傘形科植物中此類化合物較少見。
【參考文獻】
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一、化學(xué)科學(xué)知識水平
九年義務(wù)教育初中化學(xué)教學(xué)大綱,對初中化學(xué)教學(xué)的四大知識板塊分別提出了不同層次的教學(xué)要求,以確保學(xué)生在畢業(yè)時達到素質(zhì)教育所要求的知識水平。
1.對化學(xué)基本概念和原理、元素化合物這兩大知識內(nèi)容,按照學(xué)生的認知水平以及在初中化學(xué)中的重要性,教學(xué)要求分為常識性介紹、了解、理解、掌握四個不同層次;2.對化學(xué)基本計算教學(xué)要求的層次是掌握。要求學(xué)生熟練掌握有關(guān)化學(xué)式、化學(xué)方程式、溶液等方面的基本計算;3.對化學(xué)實驗的教學(xué)要求分為練習(xí)、初步學(xué)會兩個層次。在教學(xué)中,教師應(yīng)按要求認真做好每個演示實驗,對于學(xué)生實驗,要積極創(chuàng)造條件,力爭使每個學(xué)生都有動手做的機會。
新教材在編排上遵循大綱規(guī)定“初級中學(xué)的化學(xué)教學(xué)是化學(xué)教育的啟蒙階段”的原則,適當降低了理論要求和精減了一些次要概念。為了配合素質(zhì)教育,培養(yǎng)學(xué)生面向未來的適應(yīng)力,增加了一些金屬、有機物(包括高分子化合物)以及保護生態(tài)環(huán)境、“溫室效應(yīng)”、硬水、氫能源、水和人類的關(guān)系、金屬和人體的關(guān)系、化肥、農(nóng)藥等內(nèi)容,體現(xiàn)了化學(xué)與生活,化學(xué)與社會,化學(xué)與生產(chǎn)、科技的緊密聯(lián)系,為學(xué)生達到規(guī)定的化學(xué)科學(xué)知識水平創(chuàng)造了條件。應(yīng)該明確,在構(gòu)成化學(xué)科學(xué)素質(zhì)的諸多要素中,化學(xué)科學(xué)知識水平始終處于基礎(chǔ)和核心的地位。
二、化學(xué)科學(xué)能力
化學(xué)科學(xué)能力是指學(xué)生在學(xué)習(xí)化學(xué)知識、應(yīng)用化學(xué)知識解決實際問題的過程中,表現(xiàn)出的心理與個性特征。它包括對物質(zhì)形態(tài)與變化的觀察和感知;化學(xué)知識的記憶和想象;對微觀世界和化學(xué)現(xiàn)象的理解、概括、抽象、推理和論證;應(yīng)用化學(xué)科學(xué)知識解釋客觀世界和解決實際問題的能力。對于處在化學(xué)教育啟蒙階段的初中學(xué)生,應(yīng)從觀察能力、實驗?zāi)芰?、思維能力、自學(xué)能力等方面,培養(yǎng)和提高他們的化學(xué)科學(xué)能力。
1.觀察能力。觀察能力是知覺的特殊形式,是一種有目的、有計劃、主動的、持久的知覺過程,是和思維緊密結(jié)合的主動知覺活動。觀察能力是智力三要素(觀察、思維、創(chuàng)造)之一,是智力發(fā)展的基矗化學(xué)是一門以實驗為基礎(chǔ)的學(xué)科。觀察和實驗是化學(xué)最基本的研究方法。通過能動的、客觀的、定性、定量的綜合觀察,從實驗的宏觀現(xiàn)象入手,揭示和認識微觀變化的本質(zhì)。觀察能力不是單一的知覺感知,而是諸多因素綜合性的智力過程。新教材增加了多幅彩圖、插圖、章頭圖和多項演示實驗,并在學(xué)生實驗前增設(shè)了思考題,啟發(fā)學(xué)生養(yǎng)成自覺觀察的良好習(xí)慣。教師除應(yīng)做好每一個演示實驗外,還應(yīng)在課堂教學(xué)、課外活動中,激發(fā)學(xué)生的觀察興趣,教會他們?nèi)绾斡^察。通過學(xué)生動手動腦,由表及里,去粗取精,去偽存真的觀察和思考,不斷提高他們的觀察能力,避免只看“熱鬧”,不看“門道”的不良習(xí)慣。
2.實驗?zāi)芰?。實驗?zāi)芰κ怯心康牡卦谌藶榭刂茥l件下進行化學(xué)反應(yīng),認識和發(fā)現(xiàn)化學(xué)變化規(guī)律的能力。實驗?zāi)芰劝▽嶒灢僮髂芰Γ职ㄍ评?、計算、對?shù)據(jù)分析處理以及對實驗結(jié)論歸納總結(jié)、準確表述的能力。
教師應(yīng)從以下幾個方面培養(yǎng)和提高學(xué)生的實驗?zāi)芰Γ孩倌苷_操作實驗儀器和設(shè)備;②明確實驗?zāi)康?;③了解實驗原理;④掌握實驗方法;⑤對實驗現(xiàn)象進行準確的觀察和記錄;⑤對實驗結(jié)果進行分析處理,導(dǎo)出結(jié)論,寫出實驗報告。
教師應(yīng)積極創(chuàng)設(shè)實驗條件,努力完成全部必做實驗。有條件的適當做一些選做實驗,鼓勵和指導(dǎo)學(xué)生做一些家庭小實驗,克服“教師黑板上講實驗,學(xué)生考試背實驗”,只注重理論學(xué)習(xí),不重視實驗教學(xué)的弊端。充分發(fā)揮學(xué)生的獨立性和創(chuàng)造性,培養(yǎng)和提高他們動手、動腦能力,以及實事求是的科學(xué)態(tài)度和嚴肅認真的工作作風(fēng)。
3.思維能力。思維是人類在事物表象、概念的基礎(chǔ)上進行分析、綜合、判斷、推理等認識活動的過程。其中分析和綜合是思維的最基本的過程。新教材正確處理了知識的邏輯順序和學(xué)生生理、心理發(fā)展順序的關(guān)系,在敘述方法和行文方面,注意調(diào)動學(xué)生主動學(xué)習(xí)、思考的積極性,以提高他們的抽象思維能力和自學(xué)能力。例如,在介紹物質(zhì)結(jié)構(gòu)的初步知識時,通過實驗和類比,引導(dǎo)學(xué)生從宏觀現(xiàn)象深入到微觀結(jié)構(gòu)的本質(zhì),通過提出問題,引發(fā)思考,然后再概括出結(jié)論或概念,使學(xué)生從感性認識上升到理性認識。
4.自學(xué)能力。自學(xué)能力就是在已有知識水平和技能的基礎(chǔ)上,不斷獲取新知識并運用這些知識的能力?;瘜W(xué)教學(xué)的重要目的之一不僅是使學(xué)生“學(xué)會”,更重要是使學(xué)生“會學(xué)”。現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速,知識更新周期縮短,如果不“會學(xué)”,就無法適應(yīng)日新月異的社會發(fā)展需要。因此,現(xiàn)代教育的一個重要特點,就是培養(yǎng)學(xué)生不斷攝取新知識的自學(xué)能力,使學(xué)生受益終身。
三、化學(xué)科學(xué)思想水平
學(xué)生的化學(xué)科學(xué)思想水平包括以下幾個方面:
1.辯證唯物主義思想水平。?化學(xué)作為一門自然科學(xué),本身就具有豐富的辯證唯物主義素材。在化學(xué)教學(xué)中進行辯證唯物主義觀點的教育,應(yīng)結(jié)合教學(xué)內(nèi)容,通過有機滲透,使學(xué)生逐步樹立起辯證唯物主義的世界觀和方法論,用對立統(tǒng)一、事物發(fā)展的矛盾性和統(tǒng)一性、量變到質(zhì)變等觀點學(xué)習(xí)和認識化學(xué)問題,提高學(xué)生應(yīng)用辯證唯物主義觀點觀察問題和認識問題的能力。
2.實事求是的科學(xué)態(tài)度。?初中化學(xué)啟蒙教育階段,應(yīng)結(jié)合教學(xué)內(nèi)容、化學(xué)史教學(xué),對學(xué)生進行堅忍不拔的精神、實事求是的態(tài)度、嚴肅認真的作風(fēng)等方面的教育。通過多種方法與途徑培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)思維、研究方法和嚴謹求實的治學(xué)精神。使學(xué)生認識到一切科學(xué)知識都來源于實踐,又反過來指導(dǎo)實踐的道理。
3.愛國主義的思想水平。新教材結(jié)合教學(xué)內(nèi)容,注意對學(xué)生進行愛國主義教育。如教材中介紹了祖國在化學(xué)科技方面取得的卓越成就,以增強學(xué)生的民族自豪感和自信心。密切結(jié)合能源、材料、資源等教學(xué)內(nèi)容,進行國情教育和愛國主義教育,使學(xué)生樹立起為建設(shè)社會主義祖國而努力學(xué)習(xí)的使命感和遠大目標。
加里寧說,“我沒有看到一門不能教育青年熱愛祖國,并培養(yǎng)他們具有最好的公民情感的科目?!被瘜W(xué)也不應(yīng)例外。
4,環(huán)境保護意識水平。人類賴以生存的水圈、大氣圈、生物圈、巖石圈的物質(zhì)在不斷運動變化,并按一定程序循環(huán)著,組成了環(huán)境物質(zhì)的平衡體系。而人類在生產(chǎn)、生活中產(chǎn)生的污染卻破壞著人類賴以生存的環(huán)境。新教材的有關(guān)章節(jié)注意結(jié)合教學(xué)內(nèi)容,對學(xué)生進行防止污染、保護環(huán)境的教育。教師應(yīng)通過“我們只有一個地球”的教育,讓學(xué)生認識到環(huán)境保護的緊迫性和重要性,使學(xué)生從小養(yǎng)成愛護環(huán)境,保護環(huán)境的良好意識和習(xí)慣。
四、化學(xué)科學(xué)品質(zhì)
化學(xué)科學(xué)品質(zhì)指學(xué)生學(xué)習(xí)化學(xué)的動機、興趣、情感和意志等?;瘜W(xué)科學(xué)品質(zhì)是一種非智力因素,在一定條件下對學(xué)生的學(xué)習(xí)水平起著十分重要的作用。
1.化學(xué)學(xué)習(xí)動機。學(xué)習(xí)動機是指引起和維持學(xué)生進行學(xué)習(xí)活動,達到預(yù)定目的的意念。使學(xué)生明確學(xué)習(xí)目的是培養(yǎng)和激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)動機的最有效的方法?;瘜W(xué)是一門非常重要的自然科學(xué)?,F(xiàn)代社會,不管是高科技或日常生活,都與化學(xué)科學(xué)息息相關(guān)。學(xué)好化學(xué)是我國四化建設(shè)的需要,是科學(xué)發(fā)展和人類進步的需要。
在教學(xué)中應(yīng)始終貫穿理想教育這一主線,通過具體的實例,生動有趣的教學(xué),使學(xué)生明確學(xué)習(xí)目的,強化學(xué)生的學(xué)習(xí)動機。
2.化學(xué)學(xué)習(xí)興趣?;瘜W(xué)學(xué)習(xí)興趣是指學(xué)生對化學(xué)力求認識、趨近的一種心理傾向。興趣是學(xué)生學(xué)習(xí)的主要動力。學(xué)習(xí)興趣使學(xué)生始終對學(xué)習(xí)保持良好的心理狀態(tài),并在其中得到樂趣和滿足?;瘜W(xué)教學(xué)中豐富多采的實驗為培養(yǎng)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣創(chuàng)造了得天獨厚的教學(xué)情境。此外,使學(xué)生明確學(xué)習(xí)目的,采取有效的教學(xué)方法,教師淵博的知識等,都是激發(fā)和培養(yǎng)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣的有效因素。
3.情感。情感是人們在認識客觀世界時所表現(xiàn)出的不同的心理反應(yīng)和態(tài)度。學(xué)生在學(xué)習(xí)過程中的愉快、熱情的良好情感,可使學(xué)生產(chǎn)生積極向上的心理狀態(tài)。悲傷、灰心、冷漠、煩躁等不良情感可給學(xué)生的學(xué)習(xí)帶來消極的影響。因此,在教學(xué)中對學(xué)生(尤其對差生)的熱愛、信任和尊重,教師高尚的人格,以及生動有趣、形式多樣的教學(xué)方法,都是培養(yǎng)學(xué)生良好情感的重要因素。
4.意志。意志是人們在有意識、有目的的行動中表現(xiàn)出的一種契而不舍、克服困難的心理過程。任何學(xué)習(xí)過程都是復(fù)雜而艱辛的。學(xué)生在學(xué)習(xí)中會遇到不少困難與挫折,如深奧的原理難以理解,習(xí)題難懂難做,不良情緒的干擾等。如果沒有堅強的學(xué)習(xí)意志是不可能長期堅持單調(diào)學(xué)習(xí)并取得優(yōu)秀成績的。在化學(xué)教學(xué)中,教師應(yīng)通過多種方法和途徑培養(yǎng)和鍛煉學(xué)生的意志。如設(shè)計一項對環(huán)境污染進行監(jiān)測的任務(wù),讓學(xué)生長期堅持去做。還可結(jié)合化學(xué)史教學(xué),介紹有關(guān)科學(xué)研究工作者為人類進步不畏艱險、奮勇登攀的優(yōu)秀品質(zhì)。
學(xué)生的化學(xué)科學(xué)素質(zhì)的“四要素”既有區(qū)別,又相互影響和促進。在教學(xué)中,教師要處理好知識、技能和能力的關(guān)系。知識和技能是學(xué)生形成能力的基礎(chǔ),而能力是學(xué)生掌握知識和技能的必要條件,是促進他們提高學(xué)習(xí)水平的重要因素。
一、造成分化的原因
(一)缺乏學(xué)習(xí)數(shù)學(xué)的興趣和學(xué)習(xí)意志薄弱是造成分化的主要內(nèi)在心理因素。
對于初中學(xué)生來說,學(xué)習(xí)的積極性主要取決于學(xué)習(xí)興趣和克服學(xué)習(xí)困難的毅力。筆者對四處初中的抽樣調(diào)查表明,284名被調(diào)查學(xué)生中,對學(xué)習(xí)數(shù)學(xué)有興趣的占51%,其中有直接興趣的47人,占15%;有間接興趣的85人,占30%;原來不感興趣,后因更換老師等原因而產(chǎn)主興趣的17人,占6%;對數(shù)學(xué)不感興趣或興趣軟弱的占49%,其中直接不感興趣的20人,占7%,原來有興趣,后來興趣減退的118人,占42%。調(diào)查中還發(fā)現(xiàn),學(xué)習(xí)數(shù)學(xué)興趣比較淡薄的學(xué)生數(shù)學(xué)學(xué)習(xí)成績也比較差,學(xué)習(xí)成績與學(xué)習(xí)興趣有著密切的聯(lián)系。
學(xué)習(xí)意志是為了實現(xiàn)學(xué)習(xí)目標而努力克服困難的心理活動,是學(xué)習(xí)能動性的重要體現(xiàn)。學(xué)習(xí)活動總是與不斷克服學(xué)習(xí)困難相聯(lián)系的,與小學(xué)階段的學(xué)習(xí)相比,初中數(shù)學(xué)難度加深,教學(xué)方式的變化也比較大,教師輔導(dǎo)減少,學(xué)生學(xué)習(xí)的獨立性增強。在中小銜接過程中有的學(xué)生適應(yīng)性強,有的學(xué)生適應(yīng)性差,表現(xiàn)出學(xué)習(xí)情感脆弱、意志不夠堅強,在學(xué)習(xí)中,一遇到困難和挫折就退縮,甚至喪失信心,導(dǎo)致學(xué)習(xí)成績下降。
(二)掌握知識、技能不系統(tǒng),沒有形成較好的數(shù)學(xué)認知結(jié)構(gòu),不能為連續(xù)學(xué)習(xí)提供必要的認知基礎(chǔ)。
相比小學(xué)數(shù)學(xué)而言,初中數(shù)學(xué)教材結(jié)構(gòu)的邏輯性、系統(tǒng)性更強。首先表現(xiàn)在教材知識的銜接上,前面所學(xué)的知識往往是后邊學(xué)習(xí)的基礎(chǔ);其次還表現(xiàn)在掌握數(shù)學(xué)知識的技能技巧上,新的技能技巧形成都必須借助于已有的技能技巧。因此,如果學(xué)生對前面所學(xué)的內(nèi)容達不到規(guī)定的要求,不能及時掌握知識,形成技能,就造成了連續(xù)學(xué)習(xí)過程中的薄弱環(huán)節(jié),跟不上集體學(xué)習(xí)的進程,導(dǎo)致學(xué)習(xí)分化。
(三)思維方式和學(xué)習(xí)方法不適應(yīng)數(shù)學(xué)學(xué)習(xí)要求。
初二階段是數(shù)學(xué)學(xué)習(xí)分化最明顯的階段。一個重要原因是初中階段數(shù)學(xué)課程對學(xué)生抽象邏輯思維能力要求有了明顯提高。而初二學(xué)生正處于由直觀形象思維為主向以抽象邏輯思維為主過渡的又一個關(guān)鍵期,沒有形成比較成熟的抽象邏輯思維方式,而且學(xué)生個體差異也比較大,有的抽象邏輯思維能力發(fā)展快一些,有的則慢一些,因此表現(xiàn)出數(shù)學(xué)學(xué)習(xí)接受能力的差異。除了年齡特征因素以外,更重要的是教師沒有很好地根據(jù)學(xué)生的實際和教學(xué)要求去組織教
二、減少學(xué)習(xí)分化的教學(xué)對策
(一)培養(yǎng)學(xué)生學(xué)習(xí)數(shù)學(xué)的興趣
興趣是推動學(xué)生學(xué)習(xí)的動力,學(xué)生如果能在學(xué)習(xí)數(shù)學(xué)中產(chǎn)生興趣,就會形成較強的求知欲,就能積極主動地學(xué)習(xí)。培養(yǎng)學(xué)生數(shù)學(xué)學(xué)習(xí)興趣的途徑很多,如讓學(xué)生積極參與教學(xué)活動,并讓其體驗到成功的愉悅;創(chuàng)設(shè)一個適度的學(xué)習(xí)競賽環(huán)境;發(fā)揮趣味數(shù)學(xué)的作用;提高教師自身的教學(xué)藝術(shù)等等。
(二)教會學(xué)生學(xué)習(xí)
有一部分后進生在數(shù)學(xué)上費工夫不少,但學(xué)習(xí)成績總不理想,這是學(xué)習(xí)不適應(yīng)性的重要表現(xiàn)之一。教師要加強對學(xué)生的學(xué)習(xí)指導(dǎo),一方面要有意識地培養(yǎng)學(xué)生正確的數(shù)學(xué)學(xué)習(xí)觀念;另一方面是在教學(xué)過程中加強學(xué)法指導(dǎo)和學(xué)習(xí)心理輔導(dǎo)。
(三)在數(shù)學(xué)教學(xué)過程中加強抽象邏輯思維的訓(xùn)練和培養(yǎng)。
要針對后進生抽象邏輯思維能力不適應(yīng)數(shù)學(xué)學(xué)習(xí)的問題,從初一代數(shù)教學(xué)開始就加強抽象邏輯能力訓(xùn)練,始終把教學(xué)過程設(shè)計成學(xué)生在教師指導(dǎo)下主動探求知識的過程。這樣學(xué)生不僅學(xué)會了知識,還學(xué)到了數(shù)學(xué)的基本思想和基本方法,培養(yǎng)了學(xué)生邏輯思維能力,為進一步學(xué)習(xí)奠定較好的基礎(chǔ)。
(四)建立和諧的師生關(guān)系
一、溶膠是怎樣的概念
膠體從外觀上看貌似均勻,與溶液沒什么差異,因此膠體常稱為溶膠。溶膠與膠體是同一個概念。
二、對淀粉、蛋白質(zhì)等高分子溶于水形成的分散系,為什么有時稱其為溶液,有時又稱其為膠體
教材中是按分散質(zhì)微粒直徑的大小來給分散系分類的。淀粉、蛋白質(zhì)等高分子溶于水形成的分散系可稱為膠體。但是判斷一種分散系是屬于膠體還是溶液,單從分散質(zhì)微粒直徑的大小這一方面來考察,其結(jié)論是不全面的,甚至是錯誤的。正確判斷一種分散系是溶液還是膠體,還要看分散質(zhì)微粒的結(jié)構(gòu)。如果分散質(zhì)微粒的結(jié)構(gòu)簡單,比如是單個的分子或較小聚合度的分子或離子,那么這樣的分散系應(yīng)稱為溶液。由于淀粉、蛋白質(zhì)溶于水后都是以單個分子的形式分散在水中的,因此,盡管這些高分子很大,這些分散系仍應(yīng)稱為溶液。只是因為高分子的大小與膠粒相仿,高分子溶液才具有膠體的一些特性,如擴散慢、不通過半透膜、有丁達爾現(xiàn)象等?;瘜W(xué)上常把Fe(OH)3,AgI等難溶于水的物質(zhì)形成的膠體稱為憎液膠體,簡稱溶膠;而把淀粉、蛋白質(zhì)等易溶于水的物質(zhì)形成的分散系稱為親液膠體,更多地是稱為高分子溶液。
三、溶液是均一的,膠體也均一嗎
憎液溶膠的分散質(zhì)微粒是由很大數(shù)目的分子構(gòu)成,因此是不均一的;高分子溶液中的分散質(zhì)微粒是單個的分子,因此是均一的。
四、膠體能在較長時間內(nèi)穩(wěn)定存在的原因是什么
憎液溶膠的膠粒帶有相同的電荷,由于同性電荷的排斥作用而使憎液膠體可以穩(wěn)定存在。淀粉、蛋白質(zhì)等高分子中含有多個極性基團(如—COOH,—OH,—NH2等),可以與水高度溶劑化(高分子表面形成水膜),因此也可較長時間穩(wěn)定存在。很明顯,這兩類膠體穩(wěn)定存在的原因是不同的。
五、溶液中的溶質(zhì)微粒也作布朗運動嗎
膠體微粒在各個方向上都受到分散劑分子的撞擊,由于這些作用力不同,所以膠體微粒作布朗運動。溶液中的溶質(zhì)微粒和分散劑分子大小相仿,因此溶質(zhì)微粒的運動狀況與膠體的膠粒運動狀況是有差別的。由于膠體的丁達爾現(xiàn)象,用超顯微鏡才可以觀察到膠粒的布朗運動。溶液無丁達爾現(xiàn)象,因此用超顯微鏡觀察不到溶質(zhì)微粒的運動狀況。
六、凝聚與鹽析有何差別
凝聚是憎液(水)膠體的性質(zhì),膠體的凝聚過程就是膠粒聚集成較大顆粒的過程。由于憎液(水)膠體的分散質(zhì)都難溶于水,因此,再采用一般的溶解方法用水來溶解膠體的凝聚物是不可能的,也就是說,膠體的凝聚是不可逆的。鹽析實際上就是加入電解質(zhì)使分散質(zhì)溶解度減小而使其析出的過程。鹽析不是憎液膠體的性質(zhì),它是高分子溶液或普通溶液的性質(zhì),能發(fā)生鹽析的分散質(zhì)都是易溶的,如淀粉溶液、蛋白質(zhì)溶液、肥皂的甘油溶液,由于分散質(zhì)都是易溶的,所以鹽析是可逆的。
七、蔗糖溶于水形成的分散系是溶液,為什么在生物課的滲透實驗中,蔗糖分子卻不能通過半透膜
不同的半透膜,如羊皮紙、動物膀胱膜、玻璃紙等,其細孔的直徑是不同的,也就是說,不同的半透膜,其通透性是不一樣的。顯然,籠統(tǒng)地講半透膜能使離子或分子通過,而不能使膠體微粒通過是不恰當?shù)摹?/p>
八、憎液膠體與高分子溶液在性質(zhì)上有何異同
憎液膠體全面地表現(xiàn)出膠體的特性,高分子溶液則不然。這兩種分散系中的分散質(zhì)微粒都作布朗運動,都有丁達爾現(xiàn)象;憎液膠體有電泳現(xiàn)象,淀粉溶液無電泳現(xiàn)象,而蛋白質(zhì)溶液則較為復(fù)雜;使憎液膠體凝聚的方法有:加入電解質(zhì)、給膠體加熱、加入帶相反電荷的膠體,使高分子溶液中的分散質(zhì)沉淀,主要是破壞高子分與分散劑間的相互作用,如加入大量的電解質(zhì)也能使淀粉、蛋白質(zhì)沉淀,這一現(xiàn)象稱為鹽析,它是可逆的。
九、有沒有溶液能產(chǎn)生類似于膠體的電泳現(xiàn)象
由于溶液是均一的,不存在“界面”,因此,給溶液通電不會產(chǎn)生界面移動現(xiàn)象(即一極液面高,另一極液面低),但是有些溶液通電后卻可以產(chǎn)生一極溶液顏色加深,另一極溶液顏色變淺的現(xiàn)象。比如,給紫紅色KMnO4溶液通電一段時間后,陽極附近溶液的顏色就會變深,陰極附近溶液的顏色就會變淺。這是由于通電后,紫紅色的MnO4-向陽極移動,但卻不會在陽極放電(MnO4-遠比OH-難放電)的緣故。CuSO4溶液就不會產(chǎn)生類似的現(xiàn)象,因為Cu2+會在陰極放電。
現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明,花錨屬植物的主要化學(xué)成分為(口山)酮及(口山)酮苷類、裂環(huán)烯醚萜類、三萜類、黃酮類以及一些生物堿類化合物等。
1.1(口山)酮及(口山)酮苷孫洪發(fā)等[4]從橢圓葉花錨中得到五種(口山)酮成分,分別為1,7-二羥基-2,3,4,5-四甲氧基(口山)酮,1,5-二羥基-2,3,7-三甲氧基(口山)酮,1,2-二羥基-3,4,5-三甲氧基(口山)酮,1,5-二羥基-2,3-二甲氧基(口山)酮和1,7-二羥基-2,3-二甲氧基(口山)酮。
孫洪發(fā)等[5]又從橢圓葉花錨中得到3種(口山)酮苷成分,分別為1-o-[β-D-木吡喃糖-(1-6)-β-D-葡萄吡喃糖]-2,3,5,7-四甲氧基(口山)酮,1-o-[β-D-木吡喃糖-(1-6)-β-D-葡萄吡喃糖]-2,3,5-三甲氧基(口山)酮和1-o-[β-D-木吡喃糖-(1-6)-β-D-葡萄吡喃糖[-2,3,4,5-四甲氧基(口山)酮。其中1-o-[β-D-木吡喃糖-(1-6)-β-D-葡萄吡喃糖]-2,3,5,7-四甲氧基(口山)酮(花錨苷)和1-o-[β-D-木吡喃糖-(1-6)-β-D-葡萄吡喃糖[-2,3,5-三甲氧基(口山)酮(去甲氧基花錨苷)為該屬植物抗肝炎的兩種有效成分。
張德等[6]采用元素分析(EA)、核磁共振波譜(NMR)、質(zhì)譜(MS)、紅外光譜(IR)、紫外光譜(UV)、差示掃描量熱(DSC)等分析方法首次從藏藥花錨中分離得到兩種針狀結(jié)晶化合物,分別為1-羥基-3,7,8-三甲氧基(口山)酮(1-h(huán)ydroxy-3,7,8-trimethoxyxanthone)和1,7-二羥基-3,8-二甲氧基((口山))酮(1,7-dihydroxy-3,8-dimethoxyxanthone)。
高潔等[7]從橢葉花錨乙醇提取物醋酸乙酯萃取部分分離得到8個(口山)酮化合物,分別為1,7-二羥基-2,3,5-三甲氧基(口山)酮,1-羥基-2,3,4,7-四甲氧基(口山)酮,1,7-二羥基-2,3,4,5-四甲氧基(口山)酮,1,7-二羥基-2,3-二甲氧基(口山)酮,1,5-二羥基-2,3-二甲氧基(口山)酮,1-羥基-2,3,5-三甲氧基(口山)酮,1-羥基-2,3,4,5-四甲氧基(口山)酮和1-羥基-2,3,5,7-四甲氧基(口山)酮。
1.2其它成分Rodrigaez等[8]從花錨中分離得到了一種的黃酮類葡萄糖苷;高光躍等[9]從橢圓葉花錨全草中測出含有獐牙菜苦苷和當藥苷;Dhasmana等[10]從橢圓葉花錨全草中分離得到齊墩果酸和谷甾醇葡萄糖苷;Rodrigaez等[11]從花錨中分離得到了一種二糖酯裂環(huán)烯醚萜。
2藥理活性
花錨為藏蒙藥中治療肝膽系統(tǒng)疾病的常用藥物,其主要分布于我國的、青海、四川、甘肅等地藏民族地區(qū),目前對花錨藥理活性的研究報道較少,有待進一步深入研究。
2.1保肝降酶作用張經(jīng)明等[12]采用花錨煎劑(含花錨苷)對CCl4造成的肝損傷模型的研究表明,花錨苷可明顯增加核糖核酸;藥理實驗證明,花錨中的花錨苷和去甲氧基花錨苷具有明顯的保肝作用,可增加核糖核酸,增加肝糖元,促進蛋白質(zhì)的合成,促進肝細胞的再生,加速壞死組織的修復(fù),是該植物抗肝炎的主要有效成分。周富強[13]通過不同劑量西寧花錨對CCl4實驗性肝損傷后肝糖元的含量的研究,發(fā)現(xiàn)西寧花錨對CCl4損傷后小鼠肝糖元的儲存的恢復(fù)有一定的藥效,可顯著提高肝糖元的含量。
馬學(xué)惠等[14]在齊墩果酸防治CCl4引起的大鼠急性肝損傷作用的研究中,發(fā)現(xiàn)該藥物能使血清GPT明顯下降,肝內(nèi)甘油三酯積累量減少;同時,能使肝細胞變性、壞死明顯減輕,糖原蓄積增加,具有明顯的保肝降酶作用。宮新江等[15]的齊墩果酸對環(huán)磷酰胺所致大鼠肝細胞損傷的保護作用的研究表明,齊墩果酸能抑制環(huán)磷酰胺所致的肝細胞上清液ALT,AST及LDH活力升高,肝細胞MTT值減小,說明齊墩果酸可抗環(huán)磷酰胺所致肝細胞損傷。
王曉峰等[16]采用原代培養(yǎng)的小鼠肝細胞,以3H-胸腺嘧啶和3H-亮氨酸摻入的方法,研究經(jīng)齊墩果酸預(yù)處理后的小鼠的肝細胞DNA和蛋白質(zhì)合成速率的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)齊墩果酸能促進肝細胞DNA及蛋白質(zhì)合成,且合成速率明顯增高,具有保肝作用。另外王曉峰等[17]報道齊墩果酸在對小鼠肝內(nèi)谷丙轉(zhuǎn)氨酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶的直接作用時,小鼠血清樣品與不同濃度的齊墩果酸分別作用后,谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性則顯著降低,說明齊墩果酸對谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性具有明顯抑制作用。
2.2降血糖作用苗德田等[18]研究了齊墩果酸對大鼠血糖的影響,結(jié)果顯示,齊墩果酸對化學(xué)性高血糖模型大鼠有顯著的降血糖作用。柳占彪等[19]用齊墩果酸對高血糖大鼠治療,結(jié)果發(fā)現(xiàn)單一的齊墩果酸具有降低高血糖的作用,同時在血糖降低時肝糖原和血清胰島素均有明顯升高。
2.3抗炎作用戴岳等[20]采用多種實驗性炎癥模型證實齊墩果酸對二甲苯與乙酸引起的小鼠皮膚和腹腔毛細血管通透性增高及對角叉菜膠等多種致炎物引起的大量足墊腫脹都具有明顯抑制作用。
2.4抗氧化活性肝細胞膜的脂質(zhì)過氧化是造成肝損傷的重要原因之一,高潔等[7]在研究藏藥花錨中(口山)酮類成分及其抗氧化活性時,從橢葉花錨乙醇提取物醋酸乙酯萃取部分分離得到8個(口山)酮化合物,且該類化合物在一定程度上能顯著抑制Fe2+-Cys誘導(dǎo)大鼠肝微粒體丙二醛的生成,有效降低肝微粒體膜的氧化損傷。因此,具有一定的抗氧化活性。
2.5其他作用橢圓葉花錨的干浸膏可提高單核-巨噬細胞吞噬功能,具有調(diào)節(jié)體液免疫的作用,使降低的血清溶血素及脾細胞免疫溶血活性提高到正常水平[21]。另有報道橢圓葉花錨全草的氯仿可溶部分(富含口山酮葡萄糖苷)具有抗阿米巴作用[22]。
3人工栽培
高原野生重要植物資源的持續(xù)發(fā)展必須建立在生物資源可持續(xù)利用和生態(tài)環(huán)境保護的基礎(chǔ)上,培育地道地產(chǎn)中藏藥材是實現(xiàn)高原地區(qū)中藏藥資源可持續(xù)利用的主要途徑之一,也是保證中藏藥產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展的必然選擇。
3.1人工栽培的重要意義花錨屬與獐牙菜屬植物等同屬于藏茵陳類藥物,被稱為“藏藥中的奇葩”,是治療肝中毒、肝炎的最佳藥物之一。但是這種藥物資源一般生長在人跡罕至的高寒缺氧環(huán)境中,其再生周期較長甚至不能再生,藏茵陳供需矛盾也由此變得越來越突出。
盡管野生橢圓葉花錨在青藏高原地區(qū)分布廣泛,資源較為豐富。但是近十多年來,隨著我國民族醫(yī)藥特別是藏藥事業(yè)的迅速發(fā)展,越來越多的企業(yè)開始投資藏醫(yī)藥領(lǐng)域,橢圓葉花錨的藥用資源需求量快速增加。但是,藏藥產(chǎn)業(yè)一度出現(xiàn)重成品生產(chǎn)輕藥材來源、重開發(fā)輕保護的問題,造成過度的采挖及收購現(xiàn)象,特別是在植物生長階段的花期大量采收導(dǎo)致資源量銳減,野生植物資源日益枯竭。因此,對作為原料植物藥的橢圓葉花錨進行人工栽培的研究具有十分重要的意義。
3.2人工引種栽培為了解決藏茵陳類藥材資源嚴重短缺的實際問題,中國科學(xué)院西北高原生物研究所經(jīng)過3年的栽培與試驗,成功地解決了以往藏茵陳種子萌發(fā)率低、出苗率低、人工栽培難以成活等關(guān)鍵技術(shù)問題。3種藏茵陳類藥用植物——川西獐牙菜、抱莖獐牙菜和花錨人工種植成功,并通過鑒定。經(jīng)過專家的監(jiān)測和對比分析,這次人工栽培的3種植物,其主要有效成分齊墩果酸和芒果苷的含量基本接近于天然野生資源,川西獐牙菜的有效成分含量甚至顯著高于野生資源,人工條件下栽培藏茵陳類藥用植物的質(zhì)量及其本身的藥用價值完全可以得到保證。隨著青海省產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整,橢圓葉花錨人工引種栽培技術(shù)的開發(fā)研究,青海省橢圓葉花錨人工種植規(guī)模逐漸擴大。橢圓葉花錨人工引種栽培試驗在該省也初見成效。陳桂琛等[23]對橢圓葉花錨的引種栽培的研究表明,栽培的橢圓葉花錨植株在植株高度、分枝數(shù)量、單株生物量等生長狀況指標明顯高于野生植株,其有效化學(xué)成分接近野生狀態(tài)的水平,說明野生橢圓葉花錨的人工栽培是可行的。吉文鶴等[24]運用RP-HPLC建立了花錨中青蘭苷、去甲氧基花錨苷和花錨苷的含量分析方法,為栽培花錨替代野生花錨入藥提供一定的科學(xué)依據(jù)。研究表明,栽培花錨中花錨苷和去甲氧基花錨苷的含量和在野生花錨中的含量相比無明顯差別,可以初步證明栽培花錨可以替代野生花錨入藥。紀蘭菊等[25]在研究栽培花錨的品質(zhì)能否代替野生花錨入藥時,通過指紋圖譜的相似度分析,得出結(jié)論:同一產(chǎn)地的野生與栽培花錨藥材色譜分離圖疊加比較,顯示了良好的相似度。證明栽培花錨中的主要化學(xué)成分及數(shù)量符合花錨藥材的指紋特征,可以代替野生花錨藥材入藥。
3.3組織培養(yǎng)隨著對花錨屬植物藥用成分不斷深入的研究,藥用潛力的挖掘,該屬植物的需求量大大增加,造成了該屬植物野生資源的日益匱乏且面臨枯竭。該屬植物的人工引種栽培技術(shù)在一定程度上已經(jīng)可行,但是,還需要通過多種途徑來提高對其的培育效率。
藥用植物的組織培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用已有多年的發(fā)展歷史,但還有相當多的植物目前尚沒有相應(yīng)的離體培養(yǎng)技術(shù)。目前,花錨屬植物的組織培養(yǎng)技術(shù)至今尚未見成功的報道,仍然是個空缺。因此,建立該屬藥用植物的離體快繁技術(shù)的需求日漸增加,它也是實現(xiàn)高原地區(qū)中藏藥資源可持續(xù)利用的主要途徑之一。
4最佳采集時期
從生物量的角度考慮,花期的生物量高于果期,更高于其他時期。楊慧玲等[26]在研究不同地區(qū)和生長物候期藏藥花錨有效成分齊墩果酸的含量變化實驗中,比較了野生狀態(tài)下不同海拔、栽培條件下不同生長時期花錨的齊墩果酸含量,為確定該藥材的采收時期、不同地區(qū)藥材的質(zhì)量以及栽培地點的選擇提供理論依據(jù)。該研究發(fā)現(xiàn)花錨花期齊墩果酸含量最高,而幼苗期、蕾期和果期都低于花期的含量。因此,花期得到的藥材最多質(zhì)量也最好。
吉文鶴等[24]研究了花錨中去甲氧基花錨苷和花錨苷的含量隨著不同生長期的變化趨勢,為藥材的合理栽培和采收提供科學(xué)依據(jù)。該研究表明,去甲氧基花錨苷和花錨苷含量在營養(yǎng)期含量最高,從6~9月逐漸降低,從抗肝炎活性成分的含量角度考慮,6月份(營養(yǎng)期)為花錨的最佳采收期。
5結(jié)語
花錨屬植物是藏蒙藥中治療肝炎類疾病的常用藥物,全草入藥,具有重要的藥用價值。該屬植物的主要有效成分為(口山)酮及(口山)酮苷、裂環(huán)烯醚萜類、三萜類化合物及其它黃酮苷等,具有抗肝炎、抗氧化活性和降血糖等功效。在我國,該屬植物藥用歷史較長,故具有很高的藥理研究價值,特別是有關(guān)抗肝炎方面的研究顯示出較大的市場潛力,值得進一步深入研究;其降血糖作用、抗氧化活性和調(diào)節(jié)體液免疫的藥理活性研究報道較少,這些研究工作都亟待進一步的深入;另外對野生植物的過度采挖造成資源貧乏,采用人工的方法達到該藥物資源的可持續(xù)利用也已成為目前及今后對該屬植物重點研究的目標。
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[5]孫洪發(fā),胡柏林,等.花錨的三個新口山酮苷[J].植物學(xué)報,1987,29(4):422.
1脂類
1.1多烯炔類成分
Aratake等[2]從印度尼西亞海綿Haliclonasp.中分離得到一種多元不飽和溴代脂肪酸6-bromo-icosa-3Z,5E,8Z,13E,15E-pentaene-11,19-diynoicacid(1),并通過核磁數(shù)據(jù)確定了其結(jié)構(gòu)。將分離得到的該化合物純化后進行細胞實驗,研究表明其對NBT-T2大鼠膀胱上皮細胞有細胞毒性,半數(shù)抑制濃度(IC50)值為36μg/mL。Watanabe等[3]從Strongylophora屬海綿中分離得到3個多烯炔類成分strongylodiolA、B、C,它們對Molt-4腫瘤細胞有非常顯著的細胞毒活性,IC50值分別為0.35、0.85、0.80μg/mL。
1.2過氧化物
Plakinidae類過氧化物在海綿中比較常見,該類成分在C-3、6位存在過氧橋,同時在C-3、4、6位有烷基鏈取代。Ernesto等[4]從中國南海簡易扁板海綿Plakortissimplex中分離得到plakortideH(2)、I、J,運用波譜學(xué)和化學(xué)的方法解析了其平面結(jié)構(gòu),并利用改良的Mosher法確定C-3、4、6手性位點的絕對構(gòu)型。plakortideH、I、J對鼠纖維肉瘤細胞WEHI164顯示出較強的活性,其IC50值分別為7.1、9.5、8.2μg/mL。并闡述了該類化合物的構(gòu)效關(guān)系,認為過氧環(huán)是其具有細胞毒活性的活性位點,若過氧環(huán)被破壞,其細胞毒活性則會消失。Dai等[5]通過活性篩選及分離手段從海綿Diacarnuslevii中分離得到4種結(jié)構(gòu)新穎的norsesterterpene過氧化物diacarnoxidesA~D,其中diacarnoxideB(3)顯示出顯著的活性,可以抑制低氧狀態(tài)下腫瘤細胞的生長。海綿中分離得到的脂類化合物的結(jié)構(gòu)見圖1。
2大環(huán)內(nèi)酯類
來自海綿的大環(huán)內(nèi)酯類化合物結(jié)構(gòu)新穎、藥理活性多樣,其已經(jīng)引起越來越多的海洋藥物研究人員的關(guān)注。Johnson等[6]從海綿Cacospongiamycofijiensis中分離得到大環(huán)內(nèi)酯類聚酮化合物fijianolidesA(4)、B(5),及6種新型的fijianolidesD~I。fijianolidesA、B具有類似于紫杉醇的微管穩(wěn)定作用,其中fijianolidesB的作用強于fijianolidesA,且在嚴重聯(lián)合免疫缺陷(SCID)小鼠腫瘤細胞體內(nèi)評價中發(fā)現(xiàn):fijianolidesB可持續(xù)阻斷HCT-116腫瘤細胞的生長長達28d。fijianolidesD~I在體外實驗中也顯示了一定的抗HCT-116和MDA-MB-435細胞系活性,其中fijianolidesE、H可以阻斷細胞的有絲分裂。Chevallier等[7]從巴布亞新及利亞海綿Irciniasp.中分離得到一種有強細胞毒性的大環(huán)內(nèi)脂類化合物tedanolideC及其類似物。體外試驗表明該化合物對HCT-116細胞有強的細胞毒性,從細胞周期分析中發(fā)現(xiàn)其可使細胞分裂停留在S期。Singh等[8]從新西蘭海綿Mycalehentscheli中分離得到亞微克級的大環(huán)內(nèi)酯類化合物pelorusideA、B。其中pelorusideB可以促進微管的聚合,同紫杉醇一樣可以阻斷細胞的有絲分裂在G2期。
3肽類
在近30年中,研究人員從海綿中發(fā)現(xiàn)了大量結(jié)構(gòu)新穎且藥理活性強的肽類成分,部分化合物結(jié)構(gòu)見圖3。海綿肽類化合物的研究能夠取得如此大的進展,主要有以下幾個原因:(1)制備型高效液相色譜等分離純化技術(shù)的快速發(fā)展與應(yīng)用;(2)結(jié)構(gòu)54132鑒定方面,波譜解析技術(shù)的進展,特別是2D-NMR和質(zhì)譜等技術(shù)在海洋肽類結(jié)構(gòu)測定方面的巨大推動作用。很多海綿環(huán)肽類成分由于N-端的封閉、β-或γ-氨基酸殘基以及D-型氨基酸等新氨基酸存在,已經(jīng)不能通過Edman降解來獲取氨基酸序列的分析結(jié)果;(3)手性分離技術(shù)的發(fā)展,使研究人員能夠用極少量的樣品就可以確定某一氨基酸的絕對構(gòu)型。Ebada等[9]從印度尼西亞的加里曼丹島海綿Jaspissplendens中分離得到化合物jaspamide(6)和其兩個衍生物jaspamideQ、R。通過1D和2DNMR核磁數(shù)據(jù)、質(zhì)譜分析比較得到了jaspamide的準確結(jié)構(gòu)。jaspamideQ、R可以抑制小鼠淋巴瘤L5178Y細胞的增殖,IC50值<0.1μg/mL。Plaza等[10]從帕勞群島深水水域海綿Theonellaswinhoei中分離得到3種新的類似于anabaenopeptin的多肽類化合物paltolidesA、B、C。paltolidesA、B、C在細胞實驗中并沒有顯示出抗HIV-1活性或細胞毒性,但在亞微摩爾級顯示出對羧肽酶的選擇性抑制。Plaza等[11]從海綿Siliquariaspongiamirabilis中分離得到6種新的環(huán)肽化合物,它們分屬于celebesidesA、B、C(7~9)和theopapuamidesB、C、D。celebesidesA在單輪傳染性實驗中抗HIV-1活性的IC50值為(1.9±0.4)μg/mL,而在非磷酸化的模擬實驗中,celebesidesA即使在50μg/mL這樣的高濃度下仍無活性。theopapuamidesA、B、C對人體結(jié)腸癌細胞HCT-116顯示出細胞毒性,IC50值為2.1~4.0μg/mL,并且有強的抗真菌活性。Ratnayake等[12]從巴布亞新幾內(nèi)亞的海綿Theonellaswinhoei中分離得到一種結(jié)構(gòu)新穎的環(huán)肽theopapuamide,該化合物對CEM-TART和HCT-116細胞系均具有強的細胞毒性,半最大效應(yīng)濃度(EC50)值分別為0.5、0.9μmol/L。Robinson等[13]從兩種海綿Aulettasp.和Jaspissplendens中分離得到j(luò)asplakinolide和11個jasplakinolide類似物,其中有7個化合物為新化合物。jasplakinolideB顯示出非常強的細胞毒性,對人體直腸結(jié)腸惡性腺瘤細胞HCT-116的IC50值<1nmol/L,但是在細胞微絲試驗中,即使IC50值為80nmol/L時也沒有顯示出微絲破壞活性。
4生物堿類
生物堿類成分是海綿化學(xué)成分研究的一個非常重要的領(lǐng)域。該類成分結(jié)構(gòu)獨特,其中許多化合物具有抗腫瘤、降壓、廣譜抗菌、抗病毒等生物活性。因此藥物開發(fā)人員對從中尋找治療人類重大疾病的特效藥物寄予了厚望。
4.1吲哚類生物堿Dai等[14]從海綿Smenospongiacerebriformis中分離得到2個新化合物dictazolineA(10)、B(11),以及2個已知化合物tubastrindoleA、B,活性篩選結(jié)果表明該類化合物既沒有顯示出明顯的細胞毒性,也沒有抗菌活性。
4.2β-咔啉類生物堿Inman等[15]從巴布亞新幾內(nèi)亞海綿Hyrtiosreticulates中分離得到1個β-咔啉生物堿hyrtiocarboline(12),該化合物可選擇性抑制H522-T1肺非小細胞、MDA-MB-435黑素瘤細胞、U937淋巴癌細胞系的增殖。同時在該屬海綿中還分離得到dragmacidonamineA(13)、B。
4.3異喹啉類生物堿異喹啉類生物堿具有很好的抗微生物、抗腫瘤等藥理活性。ecteinascidin743(14)的開發(fā)成功使我們認識到了該類化合物具有廣闊的新藥開發(fā)前景[16]。Pettit等[17]從海綿Cribrochalinasp.中分離得到了3個異喹啉生物堿cribrostatin3(15)、4、5,并通過X單晶衍射確定了其立體構(gòu)型。cribrostatin3、4、5顯示出很強的抑制卵巢癌細胞Ovcar-3增殖的活性,其IC50值分別為0.77、2.20、0.18μmol/L,對鼠白血病細胞P388也有很好的抑制增殖的活性,IC50值為2.49、24.6、0.045μg/mL。另外,這3個化合物還具有一定的抗微生物活性。
4.4溴代酪氨酸類生物堿溴代酪氨酸類生物堿是一類生物活性廣泛的成分。Carney等[18]從海綿Pasammaplysillapurpurea中分離得到bastadine(16),其對多種腫瘤細胞均表7R1=PO3H2R2=C2H58R1=PO3H2R2=C2H59R1=PO3H2R2=C2H56·1436·現(xiàn)出較弱的細胞毒性,在2μg/mL時,對結(jié)腸腺癌、人肺癌細胞A5499、鼠淋巴白血病細胞P388和人體腫瘤細胞HT-2有毒性;當濃度為2.5μg/mL時,其對無腫瘤CV-1猴腎細胞有一定的毒性。另外,bastadine對拓撲異構(gòu)酶II(IC50值為2.0μg/mL)及脫氫葉酸鹽還原酶(IC50值為2.5μg/mL)有抑制作用。Galeano等[19]從加勒比海綿Verongularigida分離得到9種bromotyrosine衍生的化合物,其中purealidinB(17)、11-hydroxyaerothionin(18)在10、5μmol/L時對利什曼原蟲和瘧原蟲顯示出選擇性抗寄生蟲活性。
4.5吡咯類生物堿Mao等[20]從海綿Mycalesp.中分離得到18個結(jié)構(gòu)新穎的脂溶性的2,5-二取代吡咯類成分(19)。這些化合物具有一定的阻斷缺氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)活性的作用,IC50值<10μmol/L。作用機制研究表明,該類化合物在一定濃度下可通過阻斷NADH-泛醌氧化還原酶(復(fù)合物I)來抑制線粒體的呼吸作用,以此來阻斷HIF-1的活性。Liu等[21]通過活性追蹤及色譜方法從海綿Dendrillanigra中分離得到4個結(jié)構(gòu)新穎的具有分子靶向抗腫瘤活性的片羅素類成分neolamellarinA、neolamellarinB、5-hydroxyneolamellarinB和7-hydroxyneolamellarinA(20)。7-hydroxyneolamellarinA可以阻斷低氧誘導(dǎo)下T47D細胞中的HIF-1活性,IC50值為1.9μmol/L,也可以抑制血管內(nèi)皮生長因子(VEGF),使其停留在分泌蛋白水平。季紅等[22]從中國南海海綿Iotrochotasp.中分離得到purpurone(21),它是該屬海綿中的特征性成分和主要抗氧化活性成分,其清除DPPH自由基的IC50值為19μg/mL。
4.6其他Morgana等[23]從海綿Petrosaspongiamycofijiensis中分離得到mycothiazole及類似物8-O-acetylmycothiazole、4,19-dihydroxy-4,19-dihydromycothiazole;mycothiazole可以抑制低氧誘導(dǎo)下腫瘤細胞中HIF-1的生成,IC50值為1nmol/L,抑制體外低氧刺激下腫瘤血管的生成,并在體外實驗中還表現(xiàn)出一定的神經(jīng)毒性。Coello等[24]從肯尼亞的拉姆島海綿Mycalesp.中分離得到一種環(huán)狀二胺1,5-diazacyclohenicosane(22),并運用HR-ESI-MS和1D、2D-NMR等波譜學(xué)方法確定了其結(jié)構(gòu)。該化合物對A549、HT29和MDA-MB-231腫瘤細胞株顯示出中等強度的抑制增殖活性,IC50值分別為5.41、5.07、5.74μmol/L。Hermawan等[25]從海綿Leucettasp.中分離得到一種新型聚炔類生物堿2-(hexadec-13-ene-9,11-diynyl-methyl-amino)-ethanol(23),并通過核磁數(shù)據(jù)確定其結(jié)構(gòu)。該生物堿對NBT-T2細胞具有較強的細胞毒性,IC50值為2.5μg/mL。張浩等[26]從中國南海海綿Axinellasp.中分離得到hymenialdisine(24)和debromohymenialdisine(25)。這兩種化合物為吡咯烷生物堿成分,都是MAPK途徑抑制劑,其中hymenialdisine可以有效抑制影響絲裂原激活的蛋白激酶1的活性,其IC50值為6nmol/L,對GSK-3激酶以及CDK家族也顯示出很強的抑制活性,其IC50值為10~700nmol/L。debromohymenialdisine能夠具有抑制G2期DNA損傷檢查點、檢查點激酶1(Chk1)和2(Chk2)的活性,IC50值分別為8、3、315μmol/L。海綿中分離得到的生物堿類成分的結(jié)構(gòu)見圖4。
5甾醇
甾醇是一類分子中環(huán)戊烷駢多菲甾核的化學(xué)成分,是某些激素的前體,也是生物膜的重要組成部分。甾醇是存在于任何一種生物體內(nèi)的化學(xué)成分。目前在海洋生物中發(fā)現(xiàn)了200多種單羥基甾醇,大部分在海綿中都可以找到。另外,從海綿中還分離得到了大量的多羥基甾醇類成分,這些成分大都具有顯著的生理活性。Whitson等[27]從菲律賓海綿Spheciospongiasp.中分離得到3種新的甾醇硫酸鹽spheciosterolsulfatesA(26)、B、C,通過1D、2D-NMR和HR-ESI-MS等波譜方法確定了它們的結(jié)構(gòu)。這些化合物都可以阻斷蛋白激酶Cζ(PKCζ)的活性,IC50值分別為1.59、0.53、0.11μmol/L;在細胞實驗中顯示其也可以阻斷NF-κB的活性,EC50值為12~64μmol/L。黃孝春等[28]從我國南海的蓖麻海綿BiemnafortisTopsent中分離得到9個甾體。這些化合物均為首次從蓖麻海綿中分離得到,其中化合物cholest-4-ene-3,6-dione(27)在淋巴細胞轉(zhuǎn)移實驗中對T和B淋巴細胞的增殖顯示出顯著的抑制活性。另外,對蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酯酶PTP1B也有顯著的抑制活性,其IC50值為1.6μmol/L。Morinaka等[29]從海綿Phorbasamaranthus中分離得到5種新的甾體咪唑類化合物amaranzoleB(28)~F和已知結(jié)構(gòu)的amaranzoleA(29)。amaranzoleB~F屬于含有不同羥苯咪唑基側(cè)鏈的類似物。amaranzoleA、C、D中C24位的C-N被C-O鍵取代分別得到化合物amaranzoleB、E和F。這兩類咪唑類類似物很可能是因為烯丙基的重排,即C24-N和C24-O交換,同時伴隨CO2的脫去而形成的。人結(jié)腸癌細胞HTC-116細胞毒活性測試結(jié)果表明,amaranzoleA無顯著毒性(IC50>32μg/mL)。Whitson等[30]從菲律賓的科隆島海綿Lissodendoryx(Acanthodoryx)fibrosa樣品中分離得到3個新的硫酸取代的甾醇的二聚體化合物fibrosterolsulfatesA、B、C,其中化合物fibrosterolsulfatesA(30)、B(31)具有較強的蛋白激酶CPKCζ抑制活性,IC50值分別為16.4、5.6μmol/L。Fattorusso等[31]從Clionanigricans中分離得到兩個結(jié)構(gòu)骨架異常奇特的甾體clionastatinsA(32)、B(33)。clionastatinsA、B為首次發(fā)現(xiàn)在自然界中存在的多鹵代androstane類甾體,它們對鼠纖維肉瘤細胞WEHI164、鼠巨噬細胞RAW264-7和人單核細胞THP-1顯示出中等強度的細胞毒活性,其IC50值為0.8~2.0μg/mL。Lu等[32]從昆士蘭北部海床收集得到的海綿Sollasellamoretonensis中分離得到兩種A環(huán)為芳香環(huán)的膽汁酸3-hydroxy-19-nor-1,3,5(10),22-cholatetraen-24-oicacid和3-hydroxy-19-nor-1,3,5(10)-cholatrien-24-oicacid。從海綿中分離得到的部分甾醇類成分的結(jié)構(gòu)見圖5。
6萜類
萜類化合物是一類分子結(jié)構(gòu)中具有(C5H8)n單元的不飽和烷烴及其衍生物。海綿中的萜類化合物結(jié)構(gòu)類型多種多樣,并且具有強烈生理活性。
6.1倍半萜Xu等[33]從海綿Hyrtiossp.中分離得到一種新的倍半萜–二氫醌puupehanol(35)及已知的化合物puupehenone和chloropuupehenone。puupehenone顯示出強的抗新隱球菌和念珠菌活性,最低殺真菌濃度(MFC)值分別為1.25、2.50μg/mL。
6.2二倍半萜黃孝春等[34]從南海倔海綿屬海綿Dysideavillosa中分離得到5種scalarane型二倍半萜化合物??鼓[瘤活性篩選結(jié)果表明,scalaradial對HL-60、BEL-7402、MDA-MB-435等腫瘤細胞株具有顯著的抑制活性,IC50值分別為3.4、5.8、4.8μmol/L。邱彥等[35]從中國南海海綿Hyrtioserectus中分離得到8個二倍半萜類化學(xué)成分,通過采用多種色譜手段進行分離純化,應(yīng)用多種波譜分析技術(shù),并結(jié)合文獻對照,對所分離到的化合物進行了結(jié)構(gòu)鑒定。其結(jié)構(gòu)分別為furoscalarol、12-O-deacetyl-furoscalarol、16-deacetyl-12-epi-scalarafuranacetate、isoscalarafuran-A、scalarin(37)、12-O-deacetyl-19-deoxyscalarin、12-epi-deoxoscalarin、21-hydroxy-deoxoscalarin。印度尼西亞海綿Lendenfeldiasp.的脂類提取物可以抑制低氧誘導(dǎo)的T47D胸腺瘤細胞中hypoxiainduciblefactor-1的活性。Dai等[36]通過色譜分離技術(shù)分離得到結(jié)構(gòu)已知的homoscalarane型二倍半萜16β,22-dihydroxy-24-methyl-24-oxoscalaran-25,12β-olactone(38)、24-methyl-12,24,25-trioxoscalar-16-en-22-oicacid、12,16-dihydroxy-24-methylscalaran-25,24-olide、PHC-4andscalarherbacinA。它們不僅能夠抑制低氧誘導(dǎo)的HIF-1的活性(IC50值為0.64~6.9μmol/L),還有抑制T47D和MDA-MDA-MB-231胸腺腫瘤細胞的增殖活性。
6.3三萜海綿中三萜的種類和數(shù)量都相對較少,主要可以分為異臭椿型、siphonella型和羊毛甾烷型3大類。Dai等[37]通過活性篩選及多種分離手段從南非海綿Axinellasp.中分離得到7個結(jié)構(gòu)新穎的sodwanone三萜類化合物3-epi-sodwanoneK(39)、3-epi-sodwanoneK-3-acetate、10,11-dihydrosodwanoneB、sodwanonesT~W和結(jié)構(gòu)新穎的yardenone三萜類化合物12R-hydroxyyardenone,以及結(jié)構(gòu)已知的化合物sodwanoneA、sodwanoneB、yardenone。sodwanoneV可同時阻斷低氧誘導(dǎo)和鐵離子螯合劑(1,10-鄰二氮雜菲)誘導(dǎo)下T47D胸腺腫瘤細胞中HIF-1的活性(IC50值為15μmol/L)?;衔?-epi-sodwanoneK、sodwanonesT、10,11-dihydro-sodwanoneB和sodwanoneA可以抑制T47D細胞中HIF-1的活性。化合物3-epi-sodwanoneK-3-acetate對T47D細胞有一定的細胞毒性(IC50值為22μmol/L),化合物sodwanonesV對MDA-MB-231胸腺腫瘤細胞有一定的細胞毒性(IC50值為23μmol/L)。唐生安等[38]采用多種色譜手段對中國南海海綿Jaspissp.的化學(xué)成分進行了分離純化,應(yīng)用波譜分析技術(shù)(包括IR、MS、2D-NMR等),并結(jié)合文獻對照,對所分離到的化合物進行了結(jié)構(gòu)鑒定,分別為異臭椿類三萜化合物stellettinA(40)~D、H、I、rhabdastrellicacidA和geoditinB。該類化合物具有很強的抗腫瘤、抗病毒等生理活性,所以極具研究開發(fā)和應(yīng)用價值。
7展望
1.1儀器島津GCMS-QP-5000型氣質(zhì)聯(lián)用儀。
1.2試劑乙醚、無水Na2SO4(均為AR)。
1.3藥材金針菇樣品由廣東省蠶桑研究所提供,經(jīng)該所所員劉學(xué)銘研究鑒定,為白蘑科菌類植物金針菇Flammulinavelutipes。
2方法
2.1供試品溶液的制備藥材切成約1.5~2cm的段,取約80g,按照《中國藥典》附錄XD揮發(fā)油測定法——甲法[4]操作,加蒸餾水800ml,加熱4h,收取揮發(fā)油提取器中油層和部分芳香水層,乙醚萃取,萃取液用無水Na2SO4脫水后備用。
2.2GC-MS分析
2.2.1色譜條件GC:DB-1石英毛細管色譜柱(30m×0.25mm),樣口溫度250℃;接口溫度230℃;載氣為氦氣;流速1.3ml·min-1;柱壓80kPa;分流比10∶1;進樣量為1.0μl。升溫程序:初始柱溫60℃,保持1min,以10℃·min-1的速率升到280℃,保持5min。
2.2.2質(zhì)譜條件EI源(70ev),350V,雙燈絲;質(zhì)量范圍m/z40~450全程掃描,掃描間歇1.0s。檢測電子倍增器電壓1.4kV。檢索譜庫名稱NIST。
3結(jié)果
依法操作,得到揮發(fā)性成分的總離子流圖??鄢颐讶軇┍镜缀蠓蛛x得到30個組分,對相對含量較高的組分進行質(zhì)譜分析,通過計算機檢索并與標準譜圖對照,鑒定出其中的6個組分。以扣除溶劑峰的色譜圖的全部峰面積作為100%,用歸一化法確定了各組分在揮發(fā)油中的相對含量。分析結(jié)果見表1,總離子流圖見圖1。表1金針菇揮發(fā)性成分中的化學(xué)成分及相對百分含量(略)
4討論
從GC-MS總離子流圖及GC-MS檢測結(jié)果可以看出,金針菇揮發(fā)性成分以亞麻酸為主,其相對含量達到32.74%。亞麻酸具有增長智力、延緩衰老、降低血壓和膽固醇、抗菌、抗炎、抗腫瘤等活性[5~7],是降血壓、降血脂藥物和保健品的重要原料之一,應(yīng)進一步研究,加以利用。
本研究首次從金針菇揮發(fā)性成分中鑒定出亞麻酸(32.74%)、軟脂酸(6.41%)、鄰苯二甲酸異丁酯(5.23%)、軟脂酸乙酯(4.96%)、鄰苯二甲酸丁酯(3.07%)、苯乙醛(1.95%)等成分,占其揮發(fā)性成分相對含量的54.36%,但還有24個組分尚未能鑒定出其結(jié)構(gòu),可能是由于金針菇揮發(fā)性成分屬首次研究,其中一些成分尚未收入NIST檢索譜庫,有待于今后深入研究。
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