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【關(guān)鍵詞】藥用植物;代謝組學(xué);功能基因組學(xué)
代謝組學(xué)是對(duì)生物體內(nèi)代謝物進(jìn)行大規(guī)模分析的一項(xiàng)技術(shù)[1],它是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分(如圖1所示),藥用植物代謝組學(xué)主要研究外界因素變化對(duì)植物所造成的影響,如氣候變化、營(yíng)養(yǎng)脅迫、生物脅迫,以及基因的突變和重組等引起的微小變化,是物種表型分析最強(qiáng)有力的工具之一。在現(xiàn)代中藥研究中,代謝組學(xué)在藥物有效性和安全性、中藥資源和質(zhì)量控制研究等方面具有重要理論意義和應(yīng)用價(jià)值。另外,在對(duì)模式植物突變體文庫(kù)或轉(zhuǎn)基因文庫(kù)進(jìn)行分析之前,代謝組學(xué)往往是首先考慮采用的研究方法之一。目前,國(guó)外已有成功利用代謝組學(xué)技術(shù)對(duì)擬南芥突變株進(jìn)行大規(guī)?;蚝Y選的例子,這為與重要性狀相關(guān)基因功能的闡明和選育可供商業(yè)化利用的轉(zhuǎn)基因作物奠定了基礎(chǔ)。
圖1系統(tǒng)生物學(xué)研究的四個(gè)層次略
目前,還有許多經(jīng)濟(jì)作物的全基因組測(cè)序計(jì)劃尚未完成,由于代謝組學(xué)研究并不要求對(duì)基因組信息的了解,所以在與這些作物有關(guān)的研究領(lǐng)域具有更大的利用價(jià)值,這也是其與轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白組學(xué)研究相比的優(yōu)勢(shì)之一。代謝組學(xué)研究涉及與生物技術(shù)、分析化學(xué)、有機(jī)化學(xué)、化學(xué)計(jì)量學(xué)和信息學(xué)相關(guān)的大量知識(shí),Fiehn[2]對(duì)代謝組學(xué)有關(guān)的研究方向進(jìn)行了分類(lèi)(見(jiàn)表1)。
1代謝組學(xué)研究的技術(shù)步驟
代謝組學(xué)研究涉及的技術(shù)步驟主要包括植物栽培、樣本制備、衍生化、分離純化和數(shù)據(jù)分析5個(gè)方面(見(jiàn)圖2)。
1.1植物栽培
對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行培育的目的是為了對(duì)樣本的穩(wěn)定性進(jìn)行控制,相對(duì)于微生物和動(dòng)物而言,植物的人工栽培需要考
表1代謝組學(xué)的分類(lèi)及定義略
慮更多的問(wèn)題,如中藥材在不同年齡、不同發(fā)育階段、不同部位以及光照、水肥、耕作等環(huán)境因素的微小差異都可引起生理狀態(tài)的變化,而這些非可控及可控雙重因素的影響很難進(jìn)行精確的控制,從而影響藥用植物代謝組研究的重復(fù)性。為了解決以上問(wèn)題,推薦使用大容量的培養(yǎng)箱[3],定時(shí)更換培養(yǎng)箱中栽培對(duì)象的位置,以及使用無(wú)土栽培技術(shù)等,FukusakiE[4]利用無(wú)土栽培系統(tǒng)將水和養(yǎng)分直接引入植物根部,并且對(duì)供給量進(jìn)行精確地控制,大大提高了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。
1.2樣本制備
為了獲得穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,樣本制備需要考慮樣本的生長(zhǎng)、取樣的時(shí)間和地點(diǎn)、取樣量以及樣本的處理方法等問(wèn)題,并根據(jù)分析對(duì)象的分子結(jié)構(gòu)、溶解性、極性等理化性質(zhì)及其相對(duì)含量大小對(duì)提取和分離的方法進(jìn)行選擇,逐一優(yōu)化試驗(yàn)方案。MaharjanRP等[5]用6種方法分別對(duì)大腸桿菌中代謝產(chǎn)物進(jìn)行提取,發(fā)現(xiàn)用-40℃甲醇進(jìn)行提取的效果最好?,F(xiàn)階段代謝組學(xué)的分析對(duì)象主要集中在親水性小分子,尤其是初級(jí)代謝產(chǎn)物,氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(GCMS)和毛細(xì)管電泳質(zhì)譜(CEMS)聯(lián)用都是分析親水小分子的重要技術(shù)。FiehnO等[6]使用GCMS對(duì)擬南芥葉片中的親水小分子進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)酒石酸半縮醛、檸蘋(píng)酸、別蘇氨酸、羥基乙酸等15種植物代謝物。
1.3衍生化處理
對(duì)目標(biāo)代謝產(chǎn)物的衍生化處理取決于所使用的分析設(shè)備,GCMS系統(tǒng)只適合對(duì)揮發(fā)性成分進(jìn)行分析,高效液相色譜法(HPLC)一般則使用紫外或熒光標(biāo)記的方法對(duì)樣本進(jìn)行衍生處理,BlauK[7]對(duì)酯化、?;⑼榛?、硅烷化、硼烷化、環(huán)化和離子化等衍生方法進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明。然而離子化抑制常使得質(zhì)譜分析過(guò)程中目標(biāo)代謝產(chǎn)物的離子化效率降低,這主要是由于分離過(guò)程中污染物與目標(biāo)代謝物難以完全分離開(kāi)所引起的,優(yōu)化色譜分離時(shí)間可有效緩解離子化抑制,然而在實(shí)際操作中不可能對(duì)上百種代謝產(chǎn)物的分離時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化,利用非放射性同位素稀釋法進(jìn)行相對(duì)定量可以很好的解決該問(wèn)題。HanDK等[8]應(yīng)用同位素編碼的親和標(biāo)記(ICAT),根據(jù)經(jīng)誘導(dǎo)分化的微粒蛋白及其同位素標(biāo)記物的峰面積比,對(duì)該蛋白的相對(duì)含量進(jìn)行分析。ZhangR等[9]發(fā)現(xiàn)同位素標(biāo)記技術(shù)也可用于代謝組學(xué)的研究,但是卻存在許多困難?;铙w的同位素標(biāo)記方法對(duì)于同位素的洗脫是一種非常有潛力的技術(shù),目前關(guān)于使用34s的研究已有報(bào)道[10]。
圖2代謝組學(xué)研究技術(shù)步驟略
1.4分離和定量
分離是代謝組學(xué)研究中的重要步驟,與質(zhì)譜聯(lián)用的色譜和電泳分析技術(shù)都是使用紫外或電化學(xué)檢測(cè)的方法進(jìn)行定量,其對(duì)代謝組數(shù)據(jù)的分辨率與定量能力都有一定的影響。TomitaM等[11]總結(jié)了各種色譜分離法中經(jīng)常遇到的技術(shù)問(wèn)題,認(rèn)為毛細(xì)管電泳和氣相色譜法由于具有較高的分辨率,已成為代謝組學(xué)研究的常規(guī)技術(shù)手段之一,液相色譜因其適用范圍廣,應(yīng)用也相當(dāng)廣泛。
TanakaN等[12]用高效液相色譜對(duì)樣品進(jìn)行分離,認(rèn)為使用硅膠基質(zhì)填充毛細(xì)管整體柱的高效液相色譜系統(tǒng)具有用量少、靈敏性高、低壓降高速分離等優(yōu)勢(shì);同時(shí),TolstikovV等[13]也使用硅膠填充的毛細(xì)管液相色譜方法對(duì)聚戊烯醇類(lèi)異構(gòu)體進(jìn)行了有效分離,獲得了很好的分辨率。TanakaN等[14]發(fā)現(xiàn)二維毛細(xì)管液相色譜法的分辨率比傳統(tǒng)的高效液相法高10倍。相對(duì)于其他色譜方法而言,超臨界流體色譜(SFC)是分離疏水代謝物最具潛力的技術(shù)之一,特別適用于分離那些傳統(tǒng)HPLC難以分析的疏水聚合物,BambaT等[15]通過(guò)SFC對(duì)聚戊烯醇進(jìn)行分析,證明其具有較好的分離能力。針對(duì)質(zhì)譜中存在的共洗脫現(xiàn)象,HalketJM等[16]發(fā)明了一種適用于GCMS的反褶積系統(tǒng),對(duì)共洗脫的代謝產(chǎn)物進(jìn)行分離與識(shí)別。AharoniA等[17]使用傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜(FTICRMS)對(duì)非目標(biāo)代謝物進(jìn)行分析,快速掃描植物突變樣品,獲得了一定量的代謝成分。
與分離一樣,定量能力也是代謝組學(xué)研究中的重要因素,其取決于各分析系統(tǒng)的線性范圍。傅立葉轉(zhuǎn)換核磁共振(FTNMR)、傅立葉紅外光譜(FTIR)以及近場(chǎng)紅外光譜法(NIR)等技術(shù)由于敏感性低,重復(fù)性受共洗脫現(xiàn)象影響較小也被用于檢測(cè)中。近年來(lái),FTNMR技術(shù)常被用于植物代謝組的指紋圖譜研究[18],但由于NMR分析需要樣品量較大,分析結(jié)果易受污染,GriffinJL[19]發(fā)現(xiàn)將統(tǒng)計(jì)模式識(shí)別與FTNMR相結(jié)合可以對(duì)代謝物進(jìn)行全面分析。除FTNMR之外,FTIR通過(guò)對(duì)有機(jī)成分的結(jié)構(gòu)進(jìn)行常規(guī)光譜測(cè)定,也可適用于代謝組學(xué)的研究,特別是應(yīng)用于構(gòu)建代謝組學(xué)的指紋圖譜。盡管它不能對(duì)代謝物進(jìn)行全面分析,但對(duì)具有特定功能的組分卻有很好的定量效果,對(duì)從工業(yè)及食品原材料中分離的代謝混合物也可以進(jìn)行全面分析,目前,已有學(xué)者將其成功地應(yīng)用于擬南芥[20]和番茄[21]代謝產(chǎn)物指紋圖譜的研究中。
1.5數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換
為闡明代謝物復(fù)雜的線性或非線性關(guān)系,需要進(jìn)行多變量分析,將原始的色譜圖數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為數(shù)字化的矩陣數(shù)據(jù),通過(guò)對(duì)色譜峰鑒定和整合從而進(jìn)行多變量分析。由于環(huán)境等因素的干擾,光譜數(shù)據(jù)需要通過(guò)適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)加工方法進(jìn)行校正,包括:①降低噪聲;②校正基線;③提高分辨率;④數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化。JonssonP等[22]報(bào)道了一種關(guān)于GCMS色譜圖數(shù)據(jù)處理的方法,可以對(duì)大量代謝產(chǎn)物樣品進(jìn)行有效的識(shí)別。
2代謝組學(xué)中的數(shù)據(jù)分析方法
2.1主成分分析法(PCA)
主成分分析法,將實(shí)測(cè)的多個(gè)指標(biāo)用少數(shù)幾個(gè)潛在的相互獨(dú)立的主成分指標(biāo)線性組合來(lái)表示,反映原始測(cè)量指標(biāo)的主要信息。使得分析與評(píng)價(jià)指標(biāo)變量時(shí)能夠找出主導(dǎo)因素,切斷其他相關(guān)因素的干擾,作出更為準(zhǔn)確的估量與評(píng)價(jià)。PCA數(shù)據(jù)矩陣通常來(lái)自于GCMS,LCMS或CEMS,因此將目標(biāo)代謝產(chǎn)物作為自變量,而相應(yīng)的代謝產(chǎn)物含量作為因變量,定義與最大特征值方向一致的特征向量為第一主成分,依此類(lèi)推,PCA便能通過(guò)對(duì)幾個(gè)主要成分的分析,從代謝組中識(shí)別出有效信息。主成分分析有助于簡(jiǎn)化分析和多維數(shù)據(jù)的可視化,但是該方法可能導(dǎo)致一部分有用信息的丟失。
2.2層次聚類(lèi)分析法(HCA)
層次聚類(lèi)分析法也常用于代謝組學(xué)的研究中,它是將n個(gè)樣品分類(lèi),計(jì)算兩兩之間的距離,構(gòu)成距離矩陣,合并距離最近的兩類(lèi)為一新類(lèi),計(jì)算新類(lèi)與當(dāng)前各類(lèi)的距離。再合并、計(jì)算,直至只有一類(lèi)為止。進(jìn)行層次聚類(lèi)前首先要計(jì)算相似度(similarity),然后使用最短距離法(NearestNeighbor)、最長(zhǎng)距離法(FurthestNeighbor)、類(lèi)間平均鏈鎖法(BetweengroupsLinkage)或類(lèi)內(nèi)平均鏈鎖法(WithingroupsLinkage)四種方法計(jì)算類(lèi)與類(lèi)之間的距離。該方法雖然精確,但計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)密集,對(duì)大量數(shù)據(jù)點(diǎn)進(jìn)行分析時(shí),更適合選用K均值聚類(lèi)法(KMC)或批次自組織映射圖法(BLSOM),而HCA適合將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為主成分后使用。
2.3自組織映射圖法(SOM)
神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)中鄰近的各個(gè)神經(jīng)元通過(guò)側(cè)向交互作用相互競(jìng)爭(zhēng),發(fā)展成檢測(cè)不同信號(hào)的特殊檢測(cè)器,這就是自組織特征映射的含義。其基本原理是將多維數(shù)據(jù)輸入為幾何學(xué)節(jié)點(diǎn),相似的數(shù)據(jù)模式聚成節(jié)點(diǎn),相隔較近的節(jié)點(diǎn)組成相鄰的類(lèi),從而使多維的數(shù)據(jù)模式聚成二維節(jié)點(diǎn)的自組織映射圖。除PCA和HCA外,SOM同樣也可應(yīng)用于包括基因組和轉(zhuǎn)錄組等組學(xué)研究中[23]。最初SOM計(jì)算時(shí)間長(zhǎng),依靠數(shù)據(jù)輸入順序決定聚類(lèi)結(jié)果,近年來(lái)SOM逐漸發(fā)展成為不受數(shù)據(jù)錄入順序影響的批次自組織映射圖法(BLSOM)。由于BLSOM可以對(duì)類(lèi)進(jìn)行調(diào)整,且有明確的分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn),優(yōu)化次序優(yōu)于其他聚類(lèi)法,已在基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)分析中得到廣泛的應(yīng)用。
2.4其他數(shù)據(jù)采礦方法
除PCA、HCA和SOM外,很多變量分析方法都可用于植物代謝組學(xué)的分析。軟獨(dú)立建模分類(lèi)法(SIMCA)是利用主成分模型對(duì)未知樣品進(jìn)行分類(lèi)和預(yù)測(cè),適合對(duì)大量樣本進(jìn)行分析;近鄰分類(lèi)法(KNN)和K平均值聚類(lèi)分析法(KMN)也可用于樣品分類(lèi);主成分回歸法(PCR)或偏最小二乘回歸法(PLS)在某些情況下也可使用。然而到目前為止由于還沒(méi)有建立一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的數(shù)據(jù)分析方法,代謝組學(xué)仍然是一門(mén)有待完善的學(xué)科。
3代謝組學(xué)在藥用植物中的實(shí)踐
植物藥材來(lái)源于藥用植物體,而藥用植物體的形態(tài)建成是其體內(nèi)一系列生理、生化代謝活動(dòng)的結(jié)果。植物代謝活動(dòng)分為初生代謝和次生代謝,初生代謝在植物生命過(guò)程中始終都在發(fā)生,其通過(guò)光合作用、檸檬酸循環(huán)等途徑,為次生代謝的發(fā)生提供能量和一些小分子化合物原料。次生代謝往往發(fā)生在植物生命過(guò)程中的某一階段,其主要生物合成途徑有莽草酸途徑、多酮途徑和甲瓦龍酸途徑等。植物藥材含有的生物堿、胺類(lèi)、萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、醌類(lèi)、皂苷、強(qiáng)心苷等活性物質(zhì)的絕大多數(shù)屬于次生代謝產(chǎn)物,因此探討次生代謝產(chǎn)物在藥用植物體內(nèi)的合成積累機(jī)制及其影響因素,對(duì)于提高活性物質(zhì)含量、保證藥材質(zhì)量、穩(wěn)定臨床療效等具有重要意義。孫視等[24]通過(guò)對(duì)銀杏葉中黃酮類(lèi)成分積累規(guī)律的研究,提出了選擇具有一定環(huán)境壓力的次適宜生態(tài)環(huán)境解決藥用植物栽培中生長(zhǎng)和次生產(chǎn)物積累的矛盾。王昆等[25]以人參葉組織為材料,總結(jié)了構(gòu)建人參葉cDNA文庫(kù)過(guò)程中存在的一些關(guān)鍵問(wèn)題和應(yīng)采取的對(duì)策,為今后關(guān)于人參有效成分如人參皂苷的生物合成途徑及其調(diào)控的基礎(chǔ)研究提供技術(shù)參考和理論指導(dǎo)。最近,美國(guó)加利福尼亞大學(xué)伯克利分校的Keasling等[26]采用一系列的轉(zhuǎn)基因調(diào)控方法,通過(guò)基因工程酵母合成了青蒿素的前體物質(zhì)——青蒿酸,其產(chǎn)量超過(guò)100mg/L,為有效降低抗瘧藥物的成本提供了機(jī)遇。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的研究積累,人們對(duì)代謝途徑的主干部分(為次生代謝提供底物的初生代謝途徑)已經(jīng)基本了解,例如酚類(lèi)的莽草酸途徑,萜類(lèi)的異戊二烯二磷酸(IPP)途徑等。被子植物中一些相對(duì)保守的次生代謝途徑也得到了很好的研究,如黃酮類(lèi)、木質(zhì)素的生物合成與調(diào)控。然而,對(duì)次生代謝最豐富最神奇的部分——特定產(chǎn)物合成與積累的過(guò)程,還所知甚少[27]。
4展望
近年來(lái),代謝組學(xué)正日益成為研究的熱點(diǎn),越來(lái)越多的人已加入到代謝組學(xué)的研究中。隨著代謝組學(xué)積累的數(shù)據(jù)和信息量的增大,其在藥用植物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用價(jià)值也與日俱增。它將不僅能對(duì)單個(gè)代謝物進(jìn)行全方面的分析,更能尋找其代謝過(guò)程中的關(guān)鍵基因、通過(guò)代謝指紋分析對(duì)藥用植物進(jìn)行快速分類(lèi)、進(jìn)一步研究藥用植物有效成分代謝途徑以及環(huán)境因子對(duì)植物代謝和品質(zhì)的影響與調(diào)控機(jī)制。
然而依據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)藥學(xué)和系統(tǒng)生物學(xué)的指導(dǎo)思想,目前急待解決的是中藥種質(zhì)資源的代謝組學(xué)研究和中藥體內(nèi)作用的代謝組學(xué)研究。同時(shí),代謝組學(xué)在分析平臺(tái)技術(shù)、方法學(xué)手段和應(yīng)用策略等方面相對(duì)于其他組學(xué)技術(shù)還需要進(jìn)一步發(fā)展和完善,還需要其他學(xué)科的配合和介入。相信隨著更有力的成分分析設(shè)備的使用及代謝組數(shù)據(jù)庫(kù)的建立,藥用植物代謝組學(xué)將對(duì)中醫(yī)藥學(xué)產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。
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摘 要:仲景原方中竹葉劑量以“二把”來(lái)描述為模糊劑量,本研究擬在采用文獻(xiàn)考證竹葉藥物品種的基礎(chǔ)上,依據(jù)語(yǔ)言學(xué)知識(shí)、臨床實(shí)際和竹葉的形狀進(jìn)一步探討名量詞“把”的含義,對(duì)竹葉石膏湯中“竹葉二把”進(jìn)行藥物實(shí)測(cè)研究。研究得出,張仲景竹葉石膏湯中竹葉當(dāng)屬竹亞科,并通過(guò)抓取竹葉實(shí)測(cè),結(jié)合現(xiàn)代方劑學(xué)劑量,本課題組推薦“竹葉二把”劑量為10g。
關(guān)鍵詞:竹葉二把;傷寒論;竹葉石膏湯;劑量;品種;竹亞科
中圖分類(lèi)號(hào):R222.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1673-7717(2011)03-0478-02
The Textual Criticism And Discrimination Of "Bamboo Leaf 2 Bunches" In
Bamboo Leaf And Gypsum Decoction
LIU Min1, YAN Jun-tang2, LI Yu-hang1, LIU Zhen-quan1, LI Bao-cheng1, LI Cheng-wei1, GUO Shao-ying1
(1 School of Preclinical Medicine of Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100029,China;
2 Library of Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029,China)
Abstract:In ZHANG Zhong-jing's original formula, the dosage of "bamboo leaf 2 bunches" is not clear. This article discusses the exact sense of "bunche" by knowledge of linguistics, the clinic practice and the shape of the bamboo leaf on the basis of textual research, Furthermore, the researchers actually measure 2 bunches of bamboo leaf in order to obtain the result. Consequently, this article concludes that bamboo leaf in Bamboo Leaf and Gypsum Decoction (Zhuye Shigao Tang) belongs to Bambusoideae, and the dosage of "bamboo leaf 2 bunches" should be 10 grams.
Key words:Bamboo leaf 2 bunches; Febrile Disease on Cold Damage; Gypsum Decoction (Zhuye Shigao Tang) ; Dosage; Species ; Bambusoideae
收稿日期:2010-10-03
基金項(xiàng)目:國(guó)家科技支撐計(jì)劃資助項(xiàng)目(2006BA121B03-12)
作者簡(jiǎn)介:劉敏(1978-),女,山西霍州人,副教授,博士,研究方向:經(jīng)方防治常見(jiàn)病、疑難病的研究。
通訊作者:李宇航(1960-),男,北京人,教授,博士,研究方向:經(jīng)方防治常見(jiàn)病、疑難病的研究。
竹葉甘、淡、寒,功可清熱除煩、生津。《神農(nóng)本草經(jīng)》載竹葉:“味苦平。主治咳逆上氣,溢筋急,惡瘍,殺小蟲(chóng)。根,作湯,益氣止渴,補(bǔ)虛下氣。汁,主風(fēng)痙痹。實(shí),通神明,輕身益氣?!薄秱摗分兄袢~與石膏、半夏、麥門(mén)冬、人參、甘草、粳米相伍而成竹葉石膏湯,用于熱病后期余熱未清、津氣兩傷的“虛羸少氣,氣逆欲吐”之證。其中,竹葉配石膏清透氣分余熱、除煩止渴,人參配麥冬補(bǔ)氣養(yǎng)陰生津,半夏降逆和胃,甘草、粳米和脾養(yǎng)胃,全方祛邪扶正兼顧,清而不寒,補(bǔ)而不滯。然而,仲景原方中竹葉劑量以“二把”來(lái)描述,以致后學(xué)眾說(shuō)紛紜,莫衷一是。因此,開(kāi)展竹葉劑量的考證、測(cè)量研究具有一定現(xiàn)實(shí)意義。
1 竹葉與淡竹葉考辨
我國(guó)著名氣象學(xué)家竺可楨根據(jù)考古發(fā)現(xiàn)指出古代華北曾是溫暖濕潤(rùn)、竹子異常繁盛活躍的地區(qū)[1],此論陸續(xù)被后來(lái)學(xué)者證實(shí)[2-3]。在很長(zhǎng)時(shí)期內(nèi),我國(guó)竹林分布廣泛覆蓋于南方和黃河中下游的廣袤地區(qū),成為世界上竹類(lèi)資源最豐富、開(kāi)發(fā)和利用竹資源最早的國(guó)家之一,被譽(yù)為“竹子文明的國(guó)度”[4]。因此,竹文化深入滲透到中國(guó)經(jīng)濟(jì)、政治、生活等各個(gè)層面,并被張仲景引入到竹葉石膏湯中作為藥用。
《本草經(jīng)集注》載:“竹類(lèi)甚多,此前一條云是竹,次用淡苦爾;又一種薄殼者,名甘竹葉,最勝,又有實(shí)中竹、竹,并以筍為佳,于藥無(wú)用”,竹、淡竹、苦竹、甘竹同為藥用竹葉的來(lái)源,但甘竹葉最佳。晉?戴凱之《竹譜》描述此幾種藥用竹:“謹(jǐn)按《竹譜》,字音斤,其竹堅(jiān)而促節(jié),體圓而質(zhì)勁,皮白如霜,大者宜刺船,細(xì)者可為笛??嘀裼邪子凶?。甘竹似篁而茂,即淡竹也。”表明陶氏所云甘竹與淡竹為同一種竹。唐以后,本草學(xué)著作逐漸認(rèn)為竹葉以淡竹為主要來(lái)源,竹、苦竹少有醫(yī)家提及。如唐?陳藏器《本草拾遺》云:“食療淡竹上,甘竹次之?!彼?寇宗爽《本草衍義》更是明確:“張仲景竹葉湯,用淡竹”。繼之,《證類(lèi)本草》記載:“淡竹葉,味甘,無(wú)毒。主吐血,熱毒風(fēng),壓丹石毒,止消渴”,符合《本經(jīng)》及仲景所論竹葉的功效特點(diǎn)。明?《本草綱目》載:“竹惟江河之南甚多……大抵皆土中苞筍,各以時(shí)而出,旬日落籜而成竹也。莖有節(jié),節(jié)有枝;枝有節(jié),節(jié)有葉。葉必三之,枝必兩之。根下之枝,一為雄,二為雌,雌者生筍?!庇袑W(xué)者[5]考證李時(shí)珍所描述之竹與淡竹(Phyllostachys nigra var.henonis)、桂竹(Phyllostachys bumbusoides Sieb.et Zucc)、苦竹(Pleioblastus amarus)的形態(tài)特點(diǎn)相符。綜上,我們認(rèn)為淡竹Phyllostachys nigra var. henonis應(yīng)是竹葉石膏湯中竹葉的基原之一,因此選用其作為實(shí)測(cè)藥材的品種來(lái)源。
需要明確的是,明以后所云淡竹葉為禾本科禾亞科植物淡竹葉Lophatherum gracile Brongn.的干燥莖葉,與淡竹的竹葉完全不同?!侗静菥V目》首次記載淡竹葉,“處處原野有之。春生苗,高數(shù)寸,細(xì)莖綠葉。儼如竹米落地所生竹之莖葉。其根一窠數(shù)十須,須上結(jié)子,與麥門(mén)冬一樣,但堅(jiān)硬爾,隨時(shí)采之。八九月抽莖,結(jié)小長(zhǎng)穗?!睆拇艘院蟮袢~進(jìn)入醫(yī)家的視野。清?張山雷著《本草正義》:“此非竹類(lèi)也。生濕地,細(xì)莖綠葉.有似于竹,故有此名。四五月間開(kāi)花如蛾,兩面如蛾,兩瓣舒展作翅.栩栩欲飛,深碧可玩”。顯然淡竹葉其植物形態(tài)特征與明以前古籍中記載的竹葉有著顯著區(qū)別?!端幱弥参飳W(xué)》將禾本科分為竹亞科與禾亞科?!吨兴庤b定學(xué)》認(rèn)為,淡竹葉基原屬禾亞科,系多年生草本。而取用竹葉的淡竹則屬竹亞科,系常綠喬木或灌木?!吨腥A人民共和國(guó)藥典2005版》僅載淡竹葉1種,目前臨床中有將淡竹葉代替竹葉使用的趨勢(shì)。然而,從性味和功效來(lái)看,竹葉甘淡性寒,善清上焦心熱而除煩,且其甘寒可化陰而生津;淡竹葉甘淡平,善長(zhǎng)清下焦火熱并可導(dǎo)熱下行而利小便。因此,竹葉石膏湯所用竹葉并不適合完全用禾亞科植物淡竹葉來(lái)替代。
2 “竹葉二把”的“把”考辨
“把”,奉義“握,執(zhí)”,早在漢朝就可用作名量詞[6],稱量一手握持的事物,如:“夫腹下之毳,背上之毛,增去一把,飛不為高下”。呂叔湘[7]對(duì)量詞“把”進(jìn)行了詳盡的概括,其中之一為“可用一只手抓起來(lái)的數(shù)量(包括用繩子捆起來(lái)的東西)”。蕭國(guó)政[8]認(rèn)為“把”作此義項(xiàng)解釋是由“握”引申而來(lái),其使用依據(jù)是用于“握”的手所形成的包圍圈。其中又包括兩種情況:①“包圍”,度量時(shí),手圈成的“容器”把被量對(duì)象完全包在里面,如:一把米、兩把花生;②“圈圍”,側(cè)重手抓握形成的圈,度量時(shí),被量對(duì)象集合在一起形成一個(gè)整體,手圈可握住這個(gè)整體的橫截面,如:一把芹菜、一把韭菜、三把稻草、一把粽葉等。圈圍的計(jì)量對(duì)象,一般是能用繩子捆起來(lái)的東西,兩端通常也能超出手掌。
仲景方中,以“把”作為計(jì)量單位的還有艾葉,《驚悸吐衄下血胸滿瘀血》柏葉湯中艾葉的劑量為“三把”。竹葉原生形狀呈狹披針形,如同韭菜、粽葉等一樣,扎成一束、集合在一起被計(jì)量也比較符合常理。另外,《傷寒論》存在擘、咀等修治法[9],由此可以推斷,漢代中藥炮制方法相對(duì)簡(jiǎn)捷,竹葉采集后,未進(jìn)行切制而扎“把兒”存放的可能性很大。因此,筆者認(rèn)為張仲景“竹葉二把”的“把”當(dāng)從②“圈圍”,并開(kāi)展進(jìn)一步的實(shí)測(cè)研究。
筆者選中等身高的青年男性抓取竹葉(采自北京紫竹院公園,經(jīng)陰干后實(shí)測(cè))。如果抓取未經(jīng)切制的一束竹葉1把,抓取8次,測(cè)量結(jié)果分別為:5.3g、3.9g、4.8g、4.3g、3.9g、7.3g、4.9g、4.1g、5.2g、5.9g,再取其平均值,可以得出竹葉1把為4.96g,“竹葉二把”則是4.96×29.92g。
3 結(jié) 語(yǔ)
綜上所述,本研究在采用文獻(xiàn)考證竹葉藥物品種的基礎(chǔ)上,依據(jù)語(yǔ)言學(xué)知識(shí)、臨床實(shí)際和竹葉的形狀進(jìn)一步探討名量詞“把”的含義,對(duì)竹葉石膏湯中“竹葉二把”進(jìn)行藥物實(shí)測(cè)研究。研究得出,張仲景竹葉石膏湯中竹葉當(dāng)屬竹亞科。抓取竹葉實(shí)測(cè),得出“竹葉二把”劑量為9.92g,四舍五入為10g,結(jié)合現(xiàn)代方劑學(xué)劑量,本課題組推薦“竹葉二把”劑量為:10g。
圖1 竹葉圖片
表1 現(xiàn)代方劑學(xué)所記載竹葉石膏湯用藥劑量
(在竹葉品種的采集過(guò)程中,得到紫竹院公園管理處翟敬宇、馮小虎的大力支持和幫助,在此表示衷心的感謝!)
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